6.4: Trabalhando com Centrífugas

1. Protocolo Geral para Uso seguro de Centrífuga

1. O supervisor de laboratório ou oficial de segurança laboratorial deve garantir que todos os usuários sejam devidamente treinados na seleção do rotor, tubo de amostra e operação adequada da centrífuga.
2. Qualquer novo usuário deve ser supervisionado de perto por um usuário treinado até que esteja confiante sobre como usar corretamente o instrumento.
3. Antes de usar o instrumento, cada usuário deve ler atentamente e entender as instruções de segurança para a centrífuga específica.
4. Dependendo da amostra, devem ser utilizados rotores compatíveis.
5. O rotor, o tubo e o eixo devem estar limpos, secos e livres de rachaduras ou deformidades.
6. Os anéis O devem ser verificados para qualquer desgaste ou rachaduras.
7. É importante ter certeza de que os tubos utilizados para centrifugação são compatíveis com a amostra e a velocidade de rotação (baixa, alta ou ultra).
8. Os tubos de centrífugas não devem ser preenchidos mais de três quartos do seu nível máximo de preenchimento.
9. Os tubos devem ser tampados firmemente.
10. É extremamente importante equilibrar os tubos opostos uns aos outros. O não cumprimento pode levar à separação incompleta e, em casos extremos, pode causar dispersão do conteúdo do tubo na carcaça da centrífuga.
11. Antes de ligar a centrífuga, o rotor deve ser verificado para garantir que esteja corretamente sentado na unidade e a tampa esteja devidamente fechada.
12. A tampa deve ser mantida fechada o tempo todo quando a centrífuga estiver em funcionamento, e nunca deve estar aberta até que o rotor pare completamente.
13. O operador deve permanecer nas proximidades da centrífuga até atingir com segurança a velocidade de operação alvo. No caso de sons ou vibrações incomuns, o instrumento deve ser imediatamente desligado. O limite de velocidade do instrumento nunca deve ser excedido. Ao desligar, dê tempo suficiente para o rotor desacelerar para uma posição parada. Centrífugas modernas têm indicadores que significam que é seguro abrir a centrífuga.
14. Uma vez que a centrifugação tenha acabado, as amostras devem ser removidas e o instrumento deve ser verificado se há derramamentos ou vazamentos. Se necessário, o rotor deve ser completamente limpo.

2. Precauções adicionais ao manusear produtos químicos perigosos ou materiais infecciosos

1. Ao usar produtos químicos perigosos ou amostras biológicas que possam ser infecciosas, é importante rotular o instrumento durante o uso para alertar outros trabalhadores sobre o perigo.
2. Luvas apropriadas¹ devem ser usadas para manusear amostras perigosas.
3. Devem ser utilizados tubos de segurança selados. É preferível usar o confinamento secundário, se disponível, para os tubos de centrífugas. Estes são geralmente na forma de pastilhas de plástico ou vidro que são colocados diretamente nos baldes de amostra da centrífuga.
4. Uma vez que a centrifugação tenha acabado, os tubos devem ser removidos do rotor e abertos apenas no capô da fumaça ou no armário de segurança biológica, conforme aplicável.
5. A limpeza, se necessário, deve ser feita com extremo cuidado, de modo a não expor o operador a produtos químicos perigosos ou materiais infecciosos. Em caso de derramamento de tais amostras, veja o passo 3, Situações de Emergência, abaixo.
6. Para tipos específicos de amostras perigosas, pode ser preferível manter procedimentos padrão e protocolos de limpeza em laboratório. Estes devem ser revistos e atualizados em conformidade, conforme necessário.

3. Situações de emergência e suas medidas de segurança

Uma situação de emergência pode surgir se o rotor falhar ou se houver um derramamento na centrífuga devido à quebra do tubo ou má manipulação. Nessas situações, devem ser tomadas as seguintes medidas.

1. A centrífuga deve ser desligada imediatamente e a tampa deve ser mantida fechada até que outras sejam notificadas e evacuem o local. A energia deve ser exterminada no botão de alimentação do instrumento. O botão estará localizado na parte frontal, lateral ou atrás do instrumento. O usuário deve se familiarizar com sua localização. Se o botão de alimentação estiver com defeito, o usuário deve remover o plugue de alimentação principal da tomada de parede.
2. Para reduzir o risco de aerossóis, às vezes é melhor deixar a centrífuga intocada por pelo menos 0,5 h. Consulte o documento técnico da centrífuga.
3. Para limpar os derramamentos, o operador deve estar bem familiarizado com a amostra que está sendo usada e deve usar trajes adequados, incluindo jaleco, luvas, escudo facial e óculos de segurança.
   1. Uma vez limpo, o material derramado deve ser descartado adequadamente e as roupas de proteção contaminadas devem ser descartadas ou limpas adequadamente. As mãos e qualquer pele exposta devem ser lavadas completamente.
4. Se abertamente exposto a materiais altamente perigosos, o 911 deve ser chamado ou a atenção médica imediata deve ser administrada à pessoa aflita.

4. Manutenção da Centrífuga

NOTA: O corpo da centrífuga é geralmente feito de metais que podem corroer na presença de umidade, produtos químicos ou agentes de limpeza fortes. Para a manutenção adequada da centrífuga, recomenda-se seguir cuidadosamente as instruções do fabricante para limpeza e manutenção. Fora isso, algumas medidas gerais para manutenção a serem mantidas em mente são as seguintes.

1. A centrífuga deve ser sempre mantida limpa e seca.
2. Qualquer tipo de derramamento deve ser imediatamente limpo.
3. O rotor deve ser descontaminado após o uso com materiais biológicos e radioativos. Recomenda-se o uso de alvejante de 10% por 30 min seguido de 70% de etanol, deixando o ar do rotor secar.
4. Os fios de escova abrasivos nunca devem ser usados para limpar o rotor e as partes associadas.
5. O rotor deve ser inspecionado após cada uso pelo operador e pelo menos anualmente pelo inspetor do fabricante.
6. Um diário de bordo deve ser mantido para cada centrífuga para manter um registro de usuários, amostras e histórico de serviços. Além disso, cópias de quaisquer materiais relacionados à garantia podem ser incluídas neste diário de bordo.

A centrifugação é uma das ferramentas mais poderosas usadas em laboratórios para a separação de misturas heterogêneas, mas pode ser perigosa e, portanto, precauções de segurança devem ser aplicadas.

Uma centrífuga gira rapidamente as amostras para separar materiais heterogêneos, o que induz forças centrífugas extremas nas amostras e no instrumento. Devido à alta velocidade com que uma centrífuga opera, ela pode causar ferimentos graves ao usuário se manuseada incorretamente. Portanto, cuidados especiais devem ser tomados ao usar uma centrífuga para evitar derramamentos e danos ao equipamento.

Este vídeo ilustrará o mecanismo de uma centrífuga e como operá-la e mantê-la com segurança.

Antes de entrar nos detalhes das medidas de segurança, vamos revisar rapidamente os fundamentos da centrifugação. As centrífugas contêm um rotor alojado em um fuso. Rotores de tamanhos diferentes geralmente podem ser instalados em um único fuso para acomodar diferentes frascos, tubos ou sacos de amostra. Um motor gira o rotor a uma RPM ou rotações por minuto especificadas. Isso, por sua vez, transmite a força centrífuga à mistura heterogênea direcionada para longe do eixo de rotação, que separa partículas com densidades diferentes.

Diferentes tipos de centrífugas operam em diferentes RPMs. As centrífugas de baixa velocidade funcionam a menos de 10.000 RPMs, a alta velocidade até 21.000 e as ultracentrífugas até 30.000 e acima. Cada tipo possui rotores diferentes que são compatíveis com ele. Após a corrida, um sistema de frenagem geralmente desacelera o rotor. Em qualquer centrífuga, a alta velocidade deforma o rotor.

Em uso normal, ele retornará ao seu tamanho anterior. No entanto, se a força devido à rotação exceder a força máxima que o rotor pode suportar, ele poderá ficar permanentemente deformado. Isso pode levar a rachaduras, que podem, por sua vez, levar a falhas graves. As falhas da centrífuga, por outro lado, podem levar ao vazamento da amostra, o que pode ser perigoso se materiais perigosos estiverem envolvidos e devem ser manuseados com cuidado. Agora, mostraremos como preparar amostras e usá-las com segurança na centrífuga.

Primeiro, selecione os tubos de centrífuga apropriados que sejam compatíveis com as velocidades de rotação que você deseja usar. Verifique a documentação para descobrir os limites do tubo. Os tubos devem estar intactos e livres de rachaduras. Encha cada um até não mais do que 3/4 para evitar derramamentos. Em seguida, certifique-se de que os tubos estejam equilibrados e tampe-os bem.

Ao centrifugar amostras químicas ou biológicas perigosas, tome precauções especiais. Use equipamento de proteção adequado e prepare amostras em um ambiente de trabalho apropriado, como uma capela de exaustão ou gabinete de fluxo laminar. Para obter mais informações sobre esses recursos de segurança, consulte os vídeos da JoVE sobre hottes.

Se necessário, use uma contenção secundária para materiais perigosos, como uma inserção de vidro ou plástico. Tubos de segurança selados que fornecem um ambiente contido também podem ser usados. Todos devem ser treinados antes de usar qualquer centrífuga ou rotor.

Selecione um rotor apropriado para a centrífuga. Verifique se o rotor e sua tampa estão limpos e secos e não apresentam rachaduras ou deformidades. Certifique-se de que os anéis de vedação do rotor ou da tampa não estejam gastos. Além disso, verifique o fuso da centrífuga para ver se está dobrado ou se apresenta outras deformidades. Em seguida, coloque o rotor no fuso, certificando-se de que esteja encaixado corretamente. Insira as amostras no rotor, certificando-se de que os tubos se encaixem perfeitamente no rotor.

Sempre coloque tubos balanceados opostos um do outro. Cubra o rotor, certificando-se de que a vedação esteja firme. Feche a tampa da centrífuga e inicie seu programa. Novamente, consulte o vídeo anterior da centrífuga da JoVE, para obter mais informações sobre como executar um programa de centrífuga.

Permaneça na centrífuga até que ela atinja sua velocidade máxima. Familiarize-se com a localização do botão liga/desliga. Desligue o botão liga/desliga se houver sons ou vibrações incomuns para parar a centrífuga imediatamente. Em seguida, evacue a área imediata até que o rotor pare. Depois de parado, inspecione as amostras quanto a derramamento e o rotor quanto a anormalidades ou desequilíbrios. Se não houver problemas, espere até que a centrífuga tenha concluído seu programa e parado completamente.

Aguarde mais meia hora se houver produtos químicos formadores de aerossóis. Caso contrário, você pode abrir

a centrífuga imediatamente. Remova as amostras e leve-as de volta a uma área especializada para abertura, se necessário. Em caso de derramamento, limpe a centrífuga imediatamente. Use EPI adequado a qualquer perigo presente e descarte os materiais contaminados de acordo com as diretrizes. Não use fios de escova abrasivos para limpar, pois podem danificar o rotor. Alerte o pessoal de emergência e não tente limpar a centrífuga se houver riscos de risco de vida.

Descontamine o rotor com alvejante a 10% para quaisquer amostras biológicas usadas na centrífuga, independentemente do derramamento ou não. Deixe o alvejante repousar por 30 minutos e, em seguida, enxágue o etanol a 70% e seque ao ar. Por fim, remova e inspecione o rotor quanto a danos e anote seu uso no diário de bordo.

Você acabou de assistir a introdução da JoVE ao uso de centrífugas. Agora você deve entender como preparar suas amostras, bem como operar e manter o instrumento.

Obrigado por assistir.