6.10: Uso adequado de autoclaves

1. Use equipamentos de proteção individual adequados (EPI)

As condições de operação de alta pressão e temperatura encontradas durante o autoclaving representam potenciais riscos de queimadura de calor ou explosão. O EPI apropriado inclui um casaco de laboratório, óculos de segurança, luvas resistentes ao calor e sapatos de dedo fechado; estes devem ser usados ao carregar e descarregar materiais da autoclave. Ao lidar com amostras líquidas, use um avental e escudo facial como EPI adicional.

2. Preparação de Materiais a serem Carregados

1. Identificar material compatível com autoclave e material incompatível autoclave
   Embora a autoclavagem represente um método comumente utilizado e econômico para descontaminação, nem todos os materiais são adequados para autoclavagem devido às condições de trabalho de alta pressão e temperatura. Em geral, todos os materiais que evaporarão ou derreterão sob o vapor pressurizado não são compatíveis com autoclavagem. Isso inclui materiais como solventes orgânicos, plástico pouco resistente ao calor, como poliestireno, polietileno e metais, excluindo aço inoxidável. Nunca autoclave substâncias químicas inflamáveis, corrosivas, tóxicas, reativas ou radioativas. Os materiais compatíveis para autoclavagem incluem pyrex ou vidro borossilicato tipo I, polipropileno, policarbonato, luvas, aço inoxidável, pontas de pipeta, papel (colocado dentro de sacos de autoclave) e soluções de mídia.
2. Material de embalagem
   Após a identificação de materiais compatíveis com autoclave, a embalagem adequada também é importante, pois garante segurança e autoclavagem eficiente. Aqui estão os princípios básicos quando materiais de embalagem:
   1. Use sempre um recipiente secundário feito de polipropileno ou aço inoxidável.
   2. Para amostras líquidas, encha o frasco em torno de 1/2 cheio e solte as tampas ou use fechos ventilados. Nunca encha os recipientes com mais de 2/3 cheios com a tampa totalmente apertada.
   3. Inspecione a nave de vidro para ter certeza de que não há rachaduras. Se forem identificadas rachaduras, descarte os vidros em um recipiente adequado. Nunca autoclave um navio de vidro quebrado conhecido.
   4. Use sempre sacos compatíveis com autoclave para embalar resíduos. Os sacos devem ter fitas de indicação e devem ser abertos nas extremidades antes de carregar para permitir vapor dentro do saco.
   5. Nunca sobrecarregue os sacos ou recipientes para permitir fluxo de vapor suficiente para esterilização completa. Deixe espaço entre os itens.
   6. Não misture materiais incompatíveis.
   7. Nunca coloque itens afiados no saco de lixo.

3. Material de carga

1. Verifique o interior da autoclave para ter certeza de que não há perigo potencial do usuário anterior.
2. Limpe o dreno antes de carregar os materiais para permitir uma boa circulação.
3. Certifique-se de que os sacos não toquem nas paredes internas da autoclave para evitar o derretimento.
4. Líquidos e materiais secos requerem ciclos diferentes e precisam ser autoclavados separadamente.
5. Feche a porta com firmeza.

4. Operação da Autoclave

1. Apenas pessoas treinadas devem ser autorizadas a operar autoclaves. Consulte o manual do equipamento, se necessário, uma vez que os protocolos de operação variam entre diferentes autoclaves.
2. Depois de certificar-se de que a porta autoclave está firmemente fechada, coloque a temperatura de autoclavagem para 121 °C e mantenha uma pressão de pelo menos 15 psi.
3. Para definir o tempo e o ciclo da autoclave, os seguintes fatores precisam ser considerados:
   1. Recomendações do equipamento do manual do fabricante.
   2. O tipo de materiais carregados dentro: seco ou líquido.
   3. As quantidades de material(s) carregados.
   4. Forma e tamanho do recipiente usado.
   5. Condutividade térmica de recipientes e materiais.
   6. Propósito de descontaminação.

5. Descarregamento de Materiais Autoclavados(s)

1. Use EPI adequado como descrito acima.
2. Certifique-se de que a temperatura e a pressão da autoclave voltaram a um intervalo seguro.
3. Fique atrás da porta e abra cuidadosamente a porta para liberar qualquer vapor que sobrou dentro da autoclave para dentro da sala.
4. Deixe que os materiais dentro da autoclave suportem por 10 minutos para liberar qualquer vapor ou ar quente preso dentro do material.
5. Não agite nenhum material líquido enquanto o remove da autoclave. Se necessário, rotule o material como quente para evitar queimaduras de calor a um indivíduo que pode estar potencialmente inconsciente do fato de que o material foi recentemente autoclavado.
6. Aguarde que o material esfrie até a temperatura ambiente antes de ser transportado dentro do laboratório ou fora do laboratório. Em ambos os casos, certifique-se de utilizar a contenção adequada para o transporte.
7. Registre os detalhes dos materiais e condições de autoclavagem no registro do usuário.

A autoclavagem é um dos métodos mais utilizados no laboratório para fins de descontaminação.

Muitos cientistas, em particular aqueles que trabalham com amostras biológicas, precisam de equipamentos e meios esterilizados, e as autoclaves fornecem uma maneira rápida e econômica de descontaminar materiais. Eles usam vapor em altas temperaturas e pressão para matar microorganismos. Devido a essas condições extremas, porém, eles devem ser usados com cuidado.

Este vídeo ilustrará como as autoclaves funcionam e como usá-las corretamente.

Em uma autoclave, os materiais são aquecidos com vapor a temperaturas de 121 graus Celsius a pressões de pelo menos 15 psi. Após pelo menos 30 minutos, essas condições desidratam e matam as células.

As autoclaves podem esterilizar materiais líquidos e sólidos, mas diferentes configurações operacionais devem ser consideradas. Os líquidos requerem tempos mais longos do que os sólidos para esgotar o vapor, a fim de evitar a ebulição repentina. Além disso, volumes maiores de materiais líquidos levam mais tempo para aquecer até a temperatura correta.

Nem todos os materiais podem suportar as temperaturas dentro de uma autoclave. Portanto, nunca autoclave nada que derreta, queime, seja explosivo ou líquidos que evaporem. Além disso, não autoclave produtos químicos tóxicos ou radioativos.

Agora, mostraremos como preparar amostras para a autoclave e como operar uma.

Primeiro, selecione os materiais que você irá autoclavar e use apenas recipientes e instrumentos compatíveis. Pirex, vidro borossilicato, aço inoxidável, polipropileno e policarbonato podem ser usados para autoclavagem.

Outros materiais comuns de laboratório, como pontas de pipeta e caixas, também são compatíveis. O papel pode ser autoclavado em sacos compatíveis com autoclave.

Os resíduos sólidos também podem ser autoclavados em um saco apropriado. Deixe espaço neste saco para permitir que o vapor circule e amarre as pontas. Por fim, antes da autoclavagem, certifique-se de criar uma pequena abertura no saco para permitir a entrada de vapor.

Para meios aquosos e outros líquidos compatíveis samples, use um recipiente intacto sem rachaduras. Encha o recipiente até a metade e nunca mais do que dois terços.

Para ventilar gases de um recipiente de líquido, afrouxe a tampa. Se não houver tampa, cubra frouxamente com papel alumínio para evitar a contaminação do material autoclavado.

Coloque todos os materiais em um recipiente secundário de polipropileno ou aço inoxidável. Separe os materiais sólidos e líquidos a serem autoclavados. Deixe espaço entre os materiais e não encha demais o recipiente.

Por fim, prenda um pedaço de fita adesiva em todos os materiais. Esta fita possui indicadores sensíveis à temperatura que ficarão pretos se for atingida temperatura suficiente.

Ao usar uma autoclave, use equipamento de proteção individual adequado para proteger contra os riscos de alta temperatura e pressão. Isso inclui óculos de segurança de EPI padrão, jalecos e sapatos fechados e luvas resistentes ao calor. Use um avental e protetor facial ao manusear amostras líquidas.

Na autoclave, primeiro abra a porta e verifique se há perigos dentro. Carregue os materiais líquidos e secos separadamente, pois eles exigem diferentes ciclos de autoclave.

Para evitar o derretimento, certifique-se de que os materiais não toquem nas paredes. Garanta um bom fluxo de calor, mantendo espaçamento suficiente entre os materiais. Por fim, feche e feche a porta.

Diferentes autoclaves têm diferentes instruções de operação. Os ciclos podem ser definidos definindo manualmente a temperatura e o tempo ou selecionando em uma lista predefinida. Em geral, use os ciclos recomendados para o tipo de material que você está descontaminando.

Existe uma variedade de ciclos para sólidos e líquidos, bem como para diferentes quantidades de material e resíduos a serem autoclavados. Ao executar um ciclo, certifique-se de que a temperatura atingiu pelo menos 121 graus Celsius e a pressão de pelo menos 15 psi.

Após o término do ciclo, certifique-se de que a pressão voltou a zero e a autoclave esfriou. Abra a porta com cuidado para deixar sair o vapor restante. Em seguida, deixe os materiais repousarem por 10 minutos para liberar quaisquer gases quentes. A fita de autoclave agora deve ter listras pretas ou, digamos, autoclavada, embora isso não seja uma garantia de que a esterilização tenha ocorrido.

Usando EPI apropriado, remova os materiais, certificando-se de não agitar nenhuma amostra líquida. Anote seu uso no registro, incluindo o tipo de substâncias e quaisquer circunstâncias especiais, se encontradas. Finalmente, transporte os materiais para uma área segura ou uma capela de fluxo laminar para esfriar.

Você acabou de assistir à introdução da JoVE às autoclaves. Agora você deve entender quais materiais podem ser autoclavados, como prepará-los e como usar o instrumento com segurança. Obrigado por assistir!