Culturas de enriquecimento: cultivo de micróbios aeróbicos e anaeróbicos em meios seletivos e diferenciais

1. Preparação

1. Antes de começar, lave bem as mãos e coloque luvas de tamanho adequado.
2. Esterilizar a superfície de trabalho com hipoclorito de sódio de 5% (alvejante) e secar completamente.
3. Coloque um laço inoculante em um frasco vazio de 120 mL Erlenmeyer para que ele não toque na parte superior do banco durante o trabalho.

2. Growth Media and Cultures

1. Reúna quatro pratos de Mannitol Salt Agar (MSA), ágar azul de metilaeno Eosin (EMB) e oito ágar de soja tripptic (TSA) da geladeira (estes podem ser comprados comercialmente).
2. Coloque placas na área de trabalho limpa.
3. Junte as seguintes culturas de caldo: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidise Proteus vulgaris. Tenha cuidado: como se trata de organismos aeróbicos, as tampas dos tubos devem estar ligeiramente soltas.
4. Coloque todas as culturas em um rack de tubo de ensaio na superfície de trabalho limpa.

3. Transferir culturas e incubação

1. Fique ou sente-se no banco com todos os materiais ao alcance.
2. Para usar a técnica asséptica para transferir as bactérias para a placa, primeiro flameja o laço até que esteja brilhando laranja - e, em seguida, deixe esfriar no ar.
3. Enquanto o laço esfria, pegue a cultura do caldo de E. coli,e depois abra a tampa usando seu dedo mindinho.
4. Inflamar a abertura do tubo rapidamente. Isso evita a contaminação.
5. Mergulhe o laço no tubo e coloque o organismo no primeiro quadrante de uma placa EMB.
6. Após a primeira raia ser realizada, flame o loop, e depois executar uma segunda raia cruzando a primeira raia apenas uma ou duas vezes. Isso permitirá o isolamento de uma única colônia e determinará se há alguma contaminação.
7. Repita isso até que todos os quatro quadrantes da placa tenham sido listrados.
8. Agora, transfira cada um dos outros quatro organismos da mesma maneira de chapeamento de raia para que o produto final seja uma placa MSA, uma placa EMB, e duas placas TSA separadas por organismo.
9. Uma vez que todos os organismos foram transferidos, inflamar o laço uma última vez e colocá-lo fora.
10. Coloque 1 placa TSA com cada organismo no pacote de gás e, em seguida, agite um sachê de gás antes de colocá-lo na câmara ao lado das placas. Selar firmemente.
11. Incubar todas as placas a 37°C durante a noite.
12. Esterilize a superfície de trabalho uma última vez com 5% de alvejante.

4. Resultados de leitura e gravação

1. Remova as placas da incubadora e coloque-as em um banco de laboratório limpo
2. Tome nota do crescimento a partir dos organismos em cada placa em seu caderno de laboratório. Em particular, tome notas detalhadas sobre:
   1. Números e tamanho das colônias (se presentes) em cada placa, para cada cepa banhada
   2. Aparência do ágar em torno de quaisquer colônias crescendo nas placas msa
   3. Aparência de quaisquer colônias crescendo nas placas emb
   4. Diferenças no crescimento entre as placas TSA cultivadas fora versus dentro do pacote de gás