Name: Implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-24T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Aprenda a implantar tecidos bioengenhados no sulco AV do coração de ratos Lewis. Este protocolo cirúrgico demonstra a viabilidade de criar vias de condução elétrica alternativas para pesquisa em engenharia cardiovascular.

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Este trabalho é suportado por verbas de pesquisa dos Institutos Nacionais de Saúde (HL068915; HL088206) e contribuições para o Fundo de Condução Cardíaca do Hospital Infantil de Boston.

Parte 1: Indução de anestesia geral <ol><li> A 200-250 g de ratos Lewis é anestesiados com ketamina 50 mg / kg e 4 Xilazina mg / kg injetado com uma agulha G 30 na cavidade intraperitoneal. Parte superior do abdômen e no peito direito são recortados para remover os pêlos eo local da incisão cuidadosamente limpos com álcool 70% e, em seguida, um iodopovidona solução anti-séptica tópica. </li><li> O animal é entubado endotraqueal usando um cateter 16 G intravenosa conectado a um respirador para pequenos animais (Harvard Apparatus). O respirador é conectado a um vaporizador para abastecer 0,5 a 1,0% do isoflurano (Baxter) misturado com oxigênio a 100% para manter a anestesia geral. Taxa de respiração e do volume corrente é ajustada de acordo com o peso corporal dos ratos. O animal é colocado sobre uma almofada de aquecimento (Hood Thermo-Pad) para manter a temperatura corporal durante o procedimento cirúrgico. </li><li> Para monitor de freqüência cardíaca e saturação de oxigênio durante o procedimento cirúrgico de um dispositivo pulsoximeter (Nellcor) é cortada para um dos membros de volta. </li></ol> Parte 2: Toracotomia e implantação de engenharia de tecidos <ol><li> O sítio cirúrgico é preparado com draping cirúrgica estéril que é mantida no lugar com pinças. </li><li> Uma incisão é feita a partir do antero-lateral da parede lateral do tórax direito, logo acima do espaço de 5 ª intercostal. O interior do peito é acessado através do espaço intercostal 5 ª e um afastador pequeno (Roboz) está posicionado para maximizar a vista. </li><li> O pericárdio é cortado um pouco acima do apêndice do átrio direito eo ventrículo direito a partir da base em direção ao ápice do coração. Depois disso, o sulco AV é identificado ea camada epicárdica adjacente ao triângulo aorto-atrioventricular é suavemente esmiuçadas distante. </li><li> A sutura Prolene 7-0 (Ethicon) é colocado através do ombro basal do ventrículo direito. A 2 x 2 x 2 mm é peça dissecada da construção da engenharia de tecidos e posicionada dentro do sulco AV e delicadamente amarrados com a sutura Prolene. </li><li> O campo cirúrgico é verificada para o sangramento e duas suturas Vicryl 4-0 (Ethicon) são colocados entre o superior e inferior do espaço intercostal para o fechamento do tórax. </li><li> Qualquer pneumotórax aparente é escavada pela expansão dos pulmões por meio do ventilador. </li><li> A parede torácica é fechada em camadas. </li></ol> Parte 3: Recuperação <ol><li> Enquanto o animal se recupera da cirurgia, o local da incisão é infiltrada com 5 mL bupivacaína 0,25% [2]. </li><li> O animal é extubado após o desmame do respirador e é devolvido para uma gaiola com camas frescas uma vez que é plenamente desperto e esternal. O rato é subsequentemente administrado 0,01 mg / kg por via subcutânea Buprenorfina analgesia a cada 12 horas durante 3 dias. </li></ol> Parte 4: Os resultados representativos Se realizado corretamente, o descrito implante cirúrgico de engenharia de tecidos na AV-groove do coração (Figura 1) resulta em mais de 90% de recuperação dos animais. <img src="/files/ftp_upload/1139/Figure1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. A fotografia do coração exposto mostrando o local de implantação da engenharia de tecidos.

<ol><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).</li>
<li>Shin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+systemic+bupivacaine+prevents+the+development+of+allodynia+after+thoracotomy+in+rats.+Anesth+Analg%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg.</a> 107, 1587-1591 (2008).</li>
<li>Horstick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+procedure+affects+physiological+parameters+in+rat+myocardial+ischemia%3A+need+for+mechanical+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation.</a> Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).</li>
</ol>

Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Institutional Animal Care e do Comitê Use no Hospital Infantil s Boston.

Para um resultado favorável ao procedimento cirúrgico, é fundamental à adequada entubar e ventilar o animal invasiva. Se o rato é simplesmente sedado e permitiu a respirar espontaneamente, ambos os pulmões, inevitavelmente, colapso, enquanto o tórax é aberto devido a pleura comuns em roedores. Antes de fechar o tórax, pneumotórax qualquer precisa ser completamente eliminada e os pulmões completamente expandido para reduzir a atelectasia. Caso contrário, o desmame do respirador e recuperação será mal sucedida e que o ani...

<table><tbody><tr><td>7x4 Thermo Pad 4/caixa</td><td>Equipamento</td><td>Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canadá</td><td>MODELO 704R</td><td></td></tr><tr><td>Respirador Inspira ASV</td><td>Equipamento</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxímetro de Pulso Portátil</td><td>Equipamento</td><td>Nellcor</td><td>N20PA</td><td></td></tr><tr><td>Retrador</td><td>Equipamento</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-6514</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (Forane)</td><td>Reagente</td><td>Baxter International Inc.</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de Ketamina</td><td>Reagente</td><td>Hospira Inc.</td><td>RL-0065</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina (AnaSed)</td><td>Reagente</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>LB15705A</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina HCL Injetável</td><td>Reagente</td><td>Bedford Laboratories</td><td>Div-BUP-P00</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaína 0,25%</td><td>Reagente</td><td>Hospira Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Cirurgia de roedores é muitas vezes um componente importante na avaliação da utilidade de tecidos artificiais. Uma grande variedade de procedimentos cirúrgicos podem ser realizados em ratos de laboratório comum ou ratos e estes muito freqüentemente serve como um passo intermediário entre a bancada experimentos e testes em animais grandes ou testes em humanos. Dado que os roedores fornecer um sistema modelo estabelecido, o custo-benefício, e fisiologicamente relevantes em que para testar novas combinações de materiais de andaime e células, elas são particularmente bem adequada para estudos de engenharia de tecidos cardiovasculares. Atualmente, descrevemos um procedimento de coração aberto cirúrgico para implante de engenharia de tecidos que contêm células progenitoras miogênica no atrioventricular (AV) sulco de um coração de rato. Estes implantes têm a intenção de criar um conduto elétrico entre o átrio direito eo ventrículo direito com o objetivo final de oferecer um tratamento alternativo para implante de marcapasso convencional em pacientes pediátricos com bloqueio cardíaco completo [1]. A engenharia de tecidos é implantado na AV-groove por meio de uma toracotomia. Para nossos propósitos, ratos Lewis são anestesiados e ventilados invasiva para manter a pressão positiva nas vias aéreas durante o procedimento cirúrgico estéril. A abordagem do coração é realizada por uma toracotomia direita através de uma incisão ântero-lateral na 5<sup&gt; Th</sup&gt; Espaço intercostal. A construção do tecido é fixada no sulco AV usando uma sutura Prolene 7-0 única e posicionado entre o ventrículo direito e átrio na porção ventral do coração. O epicárdio é parcialmente removido para permitir o contato direto entre as células receptoras do miocárdio e os contidos na engenharia de tecidos. Após a implantação, a parede torácica é fechada em camadas, qualquer pneumotórax é evacuado, e que o animal é extubado e tratada com analgésicos.

Aqui, descrevemos um procedimento de cirurgia cardíaca para implante de engenharia de tecidos na atrioventricular (AV)-groove de um rato Lewis adulto.

Implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos

A cirurgia em roedores é frequentemente um componente importante na avaliação da utilidade de tecidos engenheirados. Uma ampla variedade de procedimentos cirúrgicos pode ser realizada em ...

Olá, sou Zu do laboratório de Douglas Cowan do Departamento de Anestesiologia do Hospital Infantil e da Escola Médica de Harvard. Hoje vamos mostrar um procedimento para implantar tecido engenheiro no coração vermelho. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para criar uma via alternativa de condução elétrica átrio-ventricular.Então vamos começar. Este vídeo descreve um implante cirúrgico de um constructo tecidual engenheirado contendo mioblastos. Este protocolo experimental de prova de princípio fornece evidências de que moldes teciduais podem ser fabricados in vitro e transplantados in vivo para receptores que necessitam da reparação de um órgão disfuncional.E o vídeo acompanhante descreve como as células foram moldadas no molde que se encaixa no sulco AV do coração de um rato adulto. O protocolo começa anestesiando um rato Lewis de 200 a 250 gramas com uma mistura de ketamina e xilazina injetada por meio de uma agulha de 30 gauge na cavidade intraperitoneal. Uma vez que o rato esteja completamente anestesiado e não responda a um aperto no pé, prepare-se para o procedimento cirúrgico aparando os pelos do abdômen superior e do tórax direito.Em seguida, o lado da incisão

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Métodos para a preparação de um gel matriz injetável a partir de tecido decelularizado e injetá-lo em rato...

Biologicamente fabricação de materiais derivados injetável para Engenharia de Tecidos do Miocárdio

Imagem bioluminescência para avaliação das respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT)

Implantação de um biograft para tratar infarto do miocárdio induzido por ligadura LAD em um modelo de roedor tem convencionalmente necessárias duas cirurgias de coração aberto. A fim de reduzir a mortalidade e proporcionar as condições óptimas para a fixação de Biomatrizes sólidos gelatinosos e associados a células, procedimentos minimamente invasivos têm sido desenvolvidos.

Terapia Celular para insuficiência cardíaca em Rat: Double toracotomia para infarto do miocárdio e Epicárdica implante de células e Biomatrix

Esta é uma diretriz para a construção de tecido vascularizado in vivo usando uma alça arteriovenosa microcirúrgica ou uma configuração de pedículo de fluxo dentro de uma câmara de engenharia de tecidos. Os tecidos vascularizados gerados podem ser empregados para regeneração de órgãos e substituição de defeitos teciduais, bem como para testes de drogas e modelagem de doenças.

Engenharia de Tecidos por Intrínseca Vascularização numa<em&gt; In Vivo</em&gt; Câmara Engenharia de Tecidos

Aqui nós apresentamos um protocolo para a indução de cryoinjury ventricular esquerdo, seguido da implantação de um patch do músculo cardíaco, derivado de células iPS humana cardiomyocytes em um modelo de cobaia.

Implantação de Patches hiPSC-derivado do músculo cardíaco após lesão miocárdica em um modelo de cobaia

Descrevemos um modelo de transplante de coração abdominal heterotópico em ratos, implicando modificações nas estratégias atuais, que levam a uma abordagem cirúrgica simplificada. Além disso, descrevemos um novo modelo de rejeição pela injeção in-ear de células musculares cardíacas vitais, permitindo novas análises imunológicas de transplante em ratos.

Um modelo imunológico para transplante heterotópico de células cardíacas e cardíacas em ratos

Este protocolo descreve a implantação de stents coronários humanos na aorta abdominal de ratos com um apoE-/- fundo usando um acesso trans-femoral. Em comparação com outros modelos animais, os modelos murinos carregam as vantagens da alta produtividade, reprodutibilidade, facilidade de manuseio e habitação, e uma ampla disponibilidade de marcadores moleculares.

Implantação de stents coronários de tamanho humano na aorta abdominal de rato usando um acesso trans-femoral

Este protocolo descreve um método simples e eficiente para o transplante de folhetos de válvulas aórticas sob a cápsula renal para permitir o estudo da aoreatividade das válvulas cardíacas.

Um modelo simplificado para transplante de válvula cardíaca heterotópica em roedores

O presente protocolo descreve métodos de expressão transgênica em corações de ratos e camundongos por injeção intramiocárdica direta do vírus sob orientação ecocardiográfica. Métodos para a avaliação da suscetibilidade de corações a arritmias ventriculares pela estimulação elétrica programada de corações isolados, perfundidos por Langendorff, também são explicados aqui.

Expressão Transgênica Viral em Corações de Roedores e Avaliação do Risco de Arritmia Cardíaca

Este trabalho apresenta um modelo animal de fibrose induzida pela transição endotelial-mesenquimal, como visto em defeitos cardíacos congênitos, como estenose aórtica crítica ou síndrome do coração esquerdo hipoplásico, que permite a avaliação histológica detalhada do tecido, a identificação de vias de sinalização regulatórias e o teste de opções de tratamento.

Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Neonatal em Rato para Estudo da Transição Endotelial-Mesenquimal

Aqui, é apresentado um protocolo para o implante de um enxerto vascular de engenharia tecidual na artéria carótida de camundongo usando a técnica do manguito, fornecendo um modelo animal adequado para investigar os mecanismos de regeneração do tecido vascular.

Implante de enxerto vascular de engenharia de tecidos na artéria carótida de camundongo via técnica de manguito

Aprenda a implantar tecidos bioengenhados no sulco AV do coração de ratos Lewis. Este protocolo cirúrgico demonstra a viabilidade de criar vias de condução elétrica alternativas para pesquisa em engenharia cardiovascular.

Implantação de engenharia de tecidos no coração de ratos

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