Name: Gene-gun Transfection de neurônios do hipocampo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Aprenda a isolar hipocampos de cérebros inteiros usando um estágio de corte limpo e pinças. Este protocolo de dissecação precisa facilita estudos de neurociência sobre memória e aprendizagem em tecido viável.

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Os autores não têm nada a declarar.

gene-gun transfection de neurônios do hipocampo

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun Transfection de neurônios do hipocampo

Olá, sou Kma. Trabalho no Laboratório Case da Universidade Brown. Limpe o estágio do cortador com etanol 70%. Coloque o inserto do prato em seis.Placa de poços com meio e incubação a 37 graus cérebro inteiro com pinça entre o mesencéfalo e o quarto ventrículo. Isole o hipocampo de um lado, isole o hipocampo do segundo lado. Coloque os hipocampos em uma gota de PBS.Aspire o PBS e faça seções sagitais usando o cortador de tecidos. Transfira repetidamente os cortadores para um recipiente com PBS, lavando as seções mediante adição e aspiração suave de PBS e meio. Separe as seções com pinça.Lave as seções com PBS e meio. Novamente, transfira as seções para a placa e insira. Aspire o meio das seções utilizando pinças.Conecte a mangueira do canhão de genes ao cilindro de hélio. Conecte o cano ao canhão de genes. Carregue o magazine com projéteis.Insira a cápsula na pistola Jing. Ajuste a pressão no tanque de hélio para disparar. Dispare as microesferas revestidas com EGFP sobre as seções.E agora.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nós descrevemos um método para preparar balas DNA revestido de ouro e demonstrar o uso de balas tais biolistically transfectar neurônios em cultura de fatias do hipocampo.

Preparação de Gene Gun Bullets e Transfection biobalística de neurônios em cultura Slice

Imagens de células vivas é de utilidade particular quando se estuda a dinâmica do tráfico organela. Aqui nós descrevemos um protocolo para geração de imagens ao vivo de vesículas com núcleo denso em neurônios cultivados com grande campo de microscopia de fluorescência. Este protocolo é flexível e pode ser adaptado para outras organelas imagem, tais como mitocôndrias, endossomos, e peroxissomos.

Imagens ao vivo de vesículas com núcleo denso na Primária Cultivadas neurônios do hipocampo

Este protocolo descreve os passos necessários para dissecar, transfectar via de eletroporação e neurônios do hipocampo e da cultura do mouse cortical. Curto prazo, as culturas podem ser utilizados para estudos sobre crescimento do axônio e orientação, enquanto culturas a longo prazo podem ser usados ​​para estudos de sinaptogênese e análise espinha dendrítica.

Nucleofection e Cultura Primária de Neurônios do hipocampo do rato embrionárias e Cortical

Fonte: Keener, D. G., et al. Eletroporação de célula única em diferentes culturas de fatias organotípicas de neurônios excitatórios do hipocampo de camundongos e inibitórios específicos de classe. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra o processo de eletroporação de célula única para introduzir DNA de plasmídeo em neurônios dentro de culturas de fatias de hipocampo de camundongos. O procedimento envolve posicionamento preciso da pipeta, ajustes de pressão e pulsos de eletroporação para...

Expressão gênica via eletroporação de célula única em culturas de fatias de hipocampo de camundongos

Fonte: Denaxa, M., el al., Transplante de progenitores de interneurônios corticais quimiogeneticamente modificados em cérebros de camundongos pós-natais precoces. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o procedimento para injetar um vetor de plasmídeo carregando o gene de interesse em progenitores interneurônios em uma fatia de cérebro embrionário, seguido de eletroporação para entrada de plasmídeo e expressão gênica. Esses progenitores modificados podem ser usados posteriormente para o...

Transferência de genes assistida por eletroporação incorporada em agarose em progenitores de interneurônios corticais de camundongos

Precipitação com fosfato de cálcio é um método conveniente e económico para a transfecção de células em cultura. Com a otimização, é possível usar esse método em células de difícil transfecção como neurônios primários. Aqui nós descrevemos o nosso protocolo detalhado para a transfecção de fosfato de cálcio dos neurônios do hipocampo co-cultivadas com células gliais.

Fosfato de cálcio transfecção de primário neurônios do hipocampo

Melhorias recentes nas preparações organotípicas de fatias de cérebro permitiram sua exploração para aplicações biotecnológicas. As fatias organotípicas mantêm características estruturais locais da biologia in vivo, incluindo conexões sinápticas funcionais. Aqui apresentamos um método de entrega biolística regiosseletiva para rotular e manipular geneticamente essas fatias.

Regiosseletiva Biolistic Segmentação em Organotípicas fatias do cérebro do Usando um Modificado Gene Gun

Apresentado aqui é um método de tubo de rolo modificado para cultivo e intermitente de imagem de alta resolução do cérebro de roedor fatias muitas semanas com reposicionamento exacto em lamelas de photoetched. Viabilidade neuronal e morfologia da fatia são bem mantidos. Aplicações deste sistema completamente fechado usando vírus para expressão específica do tipo de célula são fornecidas.

Método do tubo de rolo modificados para precisamente localizadas e repetitivas imagens intermitentes durante a cultura a longo prazo de fatias de cérebro em um sistema fechado

Apresentado aqui é um protocolo para eletroporação unicelular que pode fornecer genes em neurônios excitatórios e inibitórios em uma gama de idades in vitro de cultura de fatias hipocampais. Nossa abordagem fornece uma expressão precisa e eficiente de genes em células individuais, que podem ser usadas para examinar funções células autônomas e intercelulares.

Eletroporação unicelular em diferentes culturas organotipápicas de neurônios inibitórios hipocampais e inibidores específicos de classe

Esta técnica demonstra uma forma eficiente de preparar replicação defeituosa stocks retroviral codificação de um oncogene humano, e posteriormente utilizado para indução de doença mieloproliferativa no modelo de mouse.

Produção de retrovírus replicação defeituosa por transfecção transiente das células 293T

Aprenda a isolar hipocampos de cérebros inteiros usando um estágio de corte limpo e pinças. Este protocolo de dissecação precisa facilita estudos de neurociência sobre memória e aprendizagem em tecido viável.

Gene-gun Transfection de neurônios do hipocampo

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