Name: Geração de Single-Cell Tissue Suspensões de rato Neural (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Aprenda a dissociar tecido neural de rato usando o gentleMACS Dissociator para obter suspensões de células viáveis. Este método preserva epítopos de antígenos e simplifica a preparação de amostras para análise de células únicas em neurociência.

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Para trabalhar em condições estéreis, é recomendada a realização de todas as etapas em uma capela de fluxo laminar. 1. Materiais <ul><li> Neurais Tissue dissociação Kit (P) (Componentes: Solução 1,2, 3 e 4, buffer de armazenamento) </li><li> Separação pré-filtros </li><li> (Opcional) Remoção Beads Mielina </li><li> Beta-mercaptoetanol </li><li> gentleMACS Dissociator </li><li> C Tubes </li><li> MACSmix Rotator Tubo </li><li> HBSS (w / o) </li><li> HBSS (w) </li></ul><ol><li> Preparar as soluções seguintes antes de começar o protocolo: <ol><li> Solução Hanks 'Salt Buffered sem cátions divalentes Ca 2 + ou Mg 2 + (HBSS (w / o) </li><li> HBSS, standard, ou seja, com Ca 2 + e Mg 2 + (HBSS (w) </li></ol></li><li> Dependendo do epítopo do antígeno de interesse em aplicações subseqüentes, use o papaína baseado Neural Tissue dissociação Kit (P) ou o Tripsina baseado Neural Tissue dissociação Kit (T). </li><li> Prepare as seguintes soluções a partir da dissociação Neural Tissue Kit: <ol><li> Solução 2: adicionar beta-mercaptoetanol para 0,067 mM </li><li> Solução 4: dissolver o pó em 0,7 ml de buffer de armazenamento (fornecido no kit), misture delicadamente (não vortex) </li><li> Mix de enzimas 1: Pipetar 1,9 mL da solução 2 e 50 mL da solução 1 (ambos do kit) em um tubo C e incubar por 10-15 min a 37 ° C. Isto é suficiente para dissociar 400 mg do tecido cerebral. </li></ol></li></ol> 2. Dissociar o tecido neural <ol><li> Pesar tecido cerebral em um tubo contendo 1 ml HBSS (w / o) </li><li> Transferência do cérebro do rato no tubo C contendo 1950 mL da mistura de enzimas pré-aquecido 1. (NOTA: este protocolo é escrito para ≤ 400 mg, mas os volumes solução pode ser dimensionada para acomodar até 1.600 mg de tecido cerebral por metro C) </li><li> Coloque o tubo C para a Dissociator gentleMACS e executar o programa "m_brain_01". </li><li> Incube com a rotação (4 rpm usando um tubo Rotator MACSmix) por 15 min a 37 ° C. </li><li> Coloque o tubo C para a Dissociator gentleMACS e executar o programa "m_brain_02". </li><li> Durante a etapa de dissociação preparar 30 mL da mistura de 2 por Enzyme 400 mg de tecido por gentilmente mistura de 20 ml de solução-3 e 10 ml de solução 4. </li><li> Adicionar Mix Enzyme 2 para o tubo C através do septo, selada tampa e misture delicadamente sem vórtex. </li><li> Incubar o tubo C com rotação de 10 min a 37 ° C em uma incubadora. </li><li> Coloque o tubo C para a Dissociator gentleMACS e executar o programa "m_brain_03". </li><li> Incubar o tubo C com rotação de 10 min a 37 ° C em uma incubadora. </li><li> Centrifugar brevemente para coletar a amostra no fundo do tubo. </li></ol> 3. Filtração <ol><li> Selecione um filtro grande o suficiente para permitir a passagem para as células de interesse. Por exemplo, células de Purkinje são demasiado grandes para passar através de um filtro M 30, mas Prominin-1 + células vontade. </li><li> Use uma pipeta suitable1000 mL para remover as células formam o tubo C através do septo, selada tampa e aplicá-lo para o Filtro de pré-separação em um tubo de coleta de 15 ml. (NOTA: para tamanhos de amostra maior uso de um tubo de coleta de 50 ml). </li><li> Lavar o filtro com 10 ml de HBSS (w). </li><li> Centrifugar as células filtradas a 300 xg por 10 min em temperatura ambiente. </li><li> Ressuspender o sobrenadante em seu meio ou tampão de escolha para aplicações subseqüentes. </li><li> Para remover os restos de mielina, use Beads Remoção de mielina. </li></ol> 4. Resultado representante: Por favor Veja as Figuras 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="fig 1"> Figura. Uma dissociação O cérebro com o Dissociator gentleMACS resultou em 97% de células viáveis, como mostra a análise por citometria de fluxo. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="fig 2"> Figura. 2 imagem do microscópio de luz de formação neurosphere após separação de células magnéticas usando Anti-Prominin-1 microesferas após 7 dias de cultivo em MACS ® NeuroMedium suplementado com MACS suplemento B27 PLUS. Células foram preparados a partir de cérebro de camundongos CD1 (P3), utilizando o Neural Tissue dissociação Kit (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="fig 3,5"> Figura. Três fragmentos de mielina em uma única célula suspensões prejudica consideravelmente o isolamento de células e remoção de detritos de mielina por Beads Remoção de mielina aumenta a eficiência das células separações. Para MACS Separações usando Anti-Prominin-1 micro, P22 cérebro do rato era dissociado usando o Neural Tissue dissociação Kit (P). Células da suspensão de uma única célula foram diretamente usados ​​para a separação, ou foram submetidos a mielina esgotamento usando Beads Remoção de mielina. Comparando-se a separação de amostras sem e com a remoção de mielina, demonstra que a pureza é maior para as amostras com a remoção de mielina anterior.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

Os autores são funcionários da Miltenyi Biotec GmbH, Alemanha.

O Dissociator gentleMACS facilita a preparação padronizada de uma única célula suspensões de tecidos neurais em um sistema fechado. Kits tecido neural dissociação são otimizados para preservar epítopos de antígeno necessária para outras aplicações como reações imunoistoquímicas e separação de células imunomagnética 1-5. Neste protocolo, mostramos a dissociação gentil enzimática de cérebro de camundongo usando o Dissociator gentleMACS eo Neural Tissue dissociação Kit (P), resultando em 97% de células viáveis. 100 mg de rendimentos tecido neural entre 5x10 6 e 1x10 7 células, dependendo da idade do tecido hospedeiro. O alvo células Prominin-1 + foram isoladas usando Anti-Prominin-1 micro e posteriormente levados em cultura. O protocolo é mostrado para ser ainda mais eficaz com o uso adicional de Contas Remoção de mielina quando se trabalha com tecido neural derivado de ratos P7&gt;.

<table><tbody><tr><td>Tubos C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Kit de Início</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Rotador de tubos</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de Dissociação de Tecido Neural (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-092-628</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Filtros Pré-Separação</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Microesferas Anti-Prominina-1</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-092-333</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominina-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-092-335</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Contas de Remoção de Bainha de Mielina</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-094-544</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipet Tips </td><td>Molecular BioProducts</td><td>Nº do pedido 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de Dissociação de Tecido Neural (T)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Encomenda nº 130-093-231</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Solução de Iodeto de Propídio</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Nº do pedido 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

geração de single-cell tissue suspensões de rato neural

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Dentro do sistema nervoso, centenas de tipos de células neuronais e gliais têm sido descritas. Cada tipo específico de célula no cérebro ou na medula espinhal tem um repertório de moléculas da superfície celular, ou determinantes moleculares, através do qual podem ser identificados e caracterizados. Atualmente, a identificação de células robustas e tecnologias de separação exige uma única célula preparações a serem gerados ao mesmo tempo, limitar a morte celular e destruição de proteínas de superfície característicos. O Dissociator gentleMACS, quando usado em combinação com tripsina ou kits papaína baseado dissociação, pode efetivamente e gentilmente dissociar o tecido cerebral, preservando epítopos do antígeno e limitar a perda de células. Preparação padronizada de uma única célula suspensões é conseguido usando Tubos C e otimizado, programas predefinidos gentleMACS. Uma vez gerados, de uma única célula suspensões podem ser tratados com conjugados monoclonais como Anti-Prominin-1 microesferas, que identificam progenitores neurais, ou purificado ainda mais usando Beads Remoção de mielina.

Dissociar as células de tipos de tecido específico requer parâmetros específicos para aggitation tecido para obter um volume elevado de viáveis, as células cultiváveis. A Miltenyi gentleMACS Dissociator otimiza essa tarefa com um protocolo simples e prática. Nesta publicação o uso deste aparelho no tecido nerual é explicado.

Geração de Single-Cell Tissue Suspensões de rato Neural

No sistema nervoso, centenas de tipos de células neuronais e gliais foram descritos. Cada tipo celular específico no cérebro ou na medula espinhal possui um...

No interior do sistema nervoso, centenas de tipos celulares neurais e gliais foram descritos. Cada tipo celular específico no cérebro ou na medula espinhal possui um repertório de moléculas de superfície celular ou determinantes moleculares pelos quais pode ser identificado e caracterizado.Atualmente, tecnologias robustas de identificação e separação celular exigem a geração de preparações de células únicas, limitando simultaneamente a morte celular e a destruição de proteínas superficiais características. O gentle max associator, quando usado em combinação com kits de dissociação baseados em tripsina ou pepane, pode dissociar eficaz e suavemente o tecido cerebral, preservando epítopos antigênicos com perda celular mínima. Após a obtenção, as suspensões de células únicas podem ser tratadas com conjugados monoclonais, como microesferas anti prominent one, que identificam neuroprogenitores, ou purificadas adicionalmente utilizando microesferas de remoção de mielina.Olá, meu nome é Sandra PeNAT. Sou gerente de projetos para produtos de neurociência na Mil Biotech aqui em Bagagem Gabert, Alemanha. Hoje vou mostrar como preparar uma suspensão de células individuais a partir de tecido cerebral de camundongo utilizando o disassociador genix.O dissociador genix dis é um dispositivo que pode dissociar uma variedade de tipos de tecidos em um ambiente estéril fechado, eliminando assim a necessidade de dissociação mecânica manual tediosa. Vamos começar. Dependendo do epítopo antigênico de interesse nas aplicações subsequentes, utilize o kit de dissociação de tecido neural baseado em papaína ou o kit de dissociação de tecido neural baseado em tripsina.Para o experimento de hoje, preferimos o kit de dissociação de tecido neural P, pois desejamos isolar células positivas proeminentes utilizando microesferas anti-proeminentes um. A proteína proeminente um não é sensível nem à pepanase nem à tripsina, e, nesse caso, o kit de dissociação de tecido neural P é a melhor escolha. Antes de iniciar o protocolo, os reagentes e soluções devem ser preparados para este kit.Tenha em mãos seu próprio estoque de solução salina equilibrada de Hank (HBSS) sem íons de cálcio e íons de magnésio, HBSS com cálcio e magnésio e beta-mercaptoetanol. Etanol, comece preparando a solução dois, a solução quatro e posteriormente a mistura enzimática um. Primeiro, adicione beta-mercaptoetanol à solução dois até uma concentração final de 0,067 milimolar.A solução agora é estável por até um mês quando armazenada a quatro graus Celsius. Em seguida, dissolva o pó liofilizado e uma solução rotulada em um frasco. Quatro. Usando 0,7 mililitro de tampão de armazenamento, misture suavemente e não vortex. Agora prepare a mistura enzimática um pipetando 1900 microlitros da solução dois e 50 microlitros da solução um em um tubo C. Esta quantidade é suficiente para dissociar 400 miligramas de tecido; portanto, se for necessário dissociar mais, prepare mistura enzimática um adicional. Um máximo de 1600 miligramas de tecido cerebral pode ser processado em um tubo C.A mistura enzimática um no tubo C é então incubada a 37 graus Celsius por 10 a 15 minutos. Para iniciar a dissociação, pipete um mililitro de HBSS sem íons de cálcio e magnésio para dentro do tubo. Coloque o tubo sobre uma balança, adicione o tecido cerebral e registre sua massa.Este cérebro de camundongo P4 pesa cerca de 0,2 gramas. Um cérebro adulto pesaria cerca de 0,4 gramas; para todas as amostras de tecido com menos de 400 miligramas, os volumes de solução que usaremos hoje são adequados.Se o seu tecido pesar mais de 400 miligramas, aumente proporcionalmente todos os volumes de reagentes; até 1600 miligramas de tecido podem ser processados em um único tubo C. Transfira o cérebro do camundongo para o tubo C preparado contendo 1.950 microlitros de enzima pré-aquecida. Misture bem e feche firmemente a tampa.Agora, coloque o tubo C no associador gen max com a tampa para baixo e certifique-se de que o tecido esteja localizado na área do estator. Selecione o programa MCO brain O um e execute o programa. Este é o primeiro dos três programas que você executará na dissociação; quando o programa terminar.Remova o tubo C e incube a amostra por 15 minutos a 37 graus Celsius sob rotação lenta e contínua. Utilizando o rotador de tubos max mix, o modo de operação do dispositivo corresponde a quatro RPM. Após a primeira incubação, coloque o tubo de volta na dissociação de cabeça para baixo e execute o programa M brain O2. Durante a próxima associação, prepare 30 microlitros da mistura enzimática dois por 400 miligramas de tecido, adicionando 20 microlitros da solução três a 10 microlitros da solução quatro.Quando o segundo ciclo de associação terminar, adicione 30 microlitros da mistura enzimática dois no tubo C diretamente através da abertura selada com septo no centro da tampa. Para garantir a esterilidade, inverta suavemente o tubo C para homogeneizar e não use vortex. Em seguida, coloque o tubo C de volta no rotador de tubos max mix e incube a amostra por 10 minutos a 37 graus Celsius com agitação de quatro RPM.Em seguida, a unidade CTU é recolocada no dissociador gentle max pela terceira e última vez, e o programa M brain oh três é executado. Quando o terceiro programa for concluído, coloque os tubos C no rotador e incube por mais 10 minutos a 37 graus Celsius. Agora, centrifugue brevemente a amostra para recolher as células no fundo do tubo.Agora estamos prontos para filtrar as células. Escolha um filtro celular de acordo com o tamanho do seu tipo celular de interesse. Se as células que você deseja coletar têm diâmetro maior que 30 micrômetros, como as células kinji, o tamanho dos poros deve ser grande o suficiente para permitir a passagem dos corpos celulares com esse diâmetro.Para células positivas proeminentes, um filtro de 30 micrômetros funcionará. Remova o tecido dissociado do tubo C utilizando ponteiras de pipeta de 1000 microlitros que passem através da abertura selada por septo na tampa do tubo C. Aplique a suspensão celular no filtro de pré-separação colocado sobre um tubo de coleta de 15 mililitros.Para tamanhos maiores de amostra, pode ser necessário um tubo de 50 mililitros. Deixe a suspensão celular passar através do filtro. Em seguida, lave o filtro adicionando 10 mililitros de solução HBSS com íons de cálcio e magnésio.Ao trabalhar com quantidades de tecido superiores a 400 miligramas, utilize até 30 mililitros de HBSS com íons cálcio e magnésio para a lavagem do filtro. Em seguida, pelotize as células no tubo de coleta por centrifugação a 300 Gs durante 10 minutos à temperatura ambiente, aspire completamente o sobrenadante e re-suspenda o pellet celular no seu tampão ou meio de escolha. Neste momento, você pode optar por remover quaisquer detritos de mielina, pois eles podem prejudicar o isolamento celular e a marcação com anticorpos.Para remover detritos de mielina, sugerimos o uso de microesferas de remoção de mielina. Caso contrário, as células estão prontas para aplicações adicionais. Este gráfico de dispersão baseado na coloração com iodeto de propídio indica que 97% das células presentes em uma suspensão de células isoladas de camundongo doméstico com entorse, como a suspensão gerada neste vídeo, são viáveis.Essas células podem ser ainda mais purificadas usando microesferas magnéticas anti-prominentes para obter progenitores neuronais, os quais, quando cultivados em meio max neuro, suplementado com B 27 plus, podem formar neuroesferas nestes gráficos de dispersão. Observa-se a vantagem de tratar as suspensões com microesferas de remoção de mielina. Um percentual significativamente maior de progenitores neuronais expressando prominente um é obtido por separação max após esgotamento de mielina a partir de uma suspensão de células únicas.Acabo de mostrar como preparar uma suspensão de células isoladas a partir de tecido cerebral de camundongo utilizando a dissociação genix e o kit de dissociação de tecido neural. Ao realizar este procedimento, é importante ter todas as soluções preparadas adequadamente para a escolha correta do kit de dissociação de tecido neural, T ou P. Consulte a nota de aplicação ou a ficha técnica do NDK. Utilizando este método, seções de tecido embrionário, bem como de D, ou cérebro inteiro podem ser processadas em condições estéreis de maneira padronizada e com economia de tempo.Obrigado por assistir e boa sorte em seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo descreve o método utilizado para o isolamento de neuroprecursors desenvolvimento do córtex de ratos embrionárias. O procedimento para a remoção de embriões do útero, dissecando o tecido cortical, e digerindo o córtex cerebral isolado é mostrado.

Cultura de rato precursores das células-tronco neurais

Um método simples e confiável sobre o isolamento e cultura de células-tronco neurais de tecido fetal humano descartado cortical é descrito. Derivados de culturas humanas conhecidas doenças neurológicas podem ser usados ​​para a caracterização de processos patológicos celular e molecular, bem como fornecer uma plataforma para avaliar a eficácia farmacológica.

Geração de células-tronco neurais de Discarded tecido fetal humano Cortical

Este vídeo demonstra um método para isolar células-tronco do cerebelo pós-natal de camundongos e diferenciá-las em células neurais. As células-tronco da suspensão de células isoladas são purificadas usando esferas magnéticas revestidas com anticorpos e são cultivadas para formar neuroesferas. As neuroesferas são então mantidas em um meio de diferenciação para gerar células neurais.

Isolamento de células-tronco do cerebelo pós-natal de camundongo e diferenciação em células neurais

Este vídeo demonstra um protocolo para obter uma suspensão unicelular altamente viável do hipocampo do cérebro de camundongo usando uma combinação de dissociação mecânica automatizada e uma mistura de enzimas para auxiliar na digestão enzimática.

Obtenção de uma suspensão unicelular do tecido hipocampal de camundongo

O vídeo demonstra a preparação de uma suspensão unicelular de células imunes a partir de um tecido cerebral murino. Envolve digestão enzimática para liberar células do tecido cerebral, seguida de centrifugação com gradiente de densidade para isolar as células imunes com base em suas densidades para obter a suspensão unicelular.

Preparando uma suspensão unicelular de células imunes a partir de tecido cerebral murino

Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para a produção simultânea de culturas de células precursoras neurais, quer como monocamadas aderentes ou neuroesferas, a partir da zona subventricular e giro dentado de ratinhos adultos individuais.

Um rato, duas culturas: isolamento e cultivo de células-tronco neurais Adulto de as duas zonas neurogênica Individual Ratos

O estabelecimento de sistemas de cultura para a expansão de células-tronco neurais adultas (aNSCs) permite o exame e a aplicação de aNSCs para terapia. A zona subcalosa (SCZ) foi recentemente reconhecida como uma nova região formadora de neuroblastos em camundongos adultos. Aqui, são descritos métodos para o isolamento, expansão e diferenciação de SCZ-aNSCs.

Isolamento e Cultura de células estaminais adultas neurais do Subcallosal Zona Rato

Aqui, apresentamos uma nova técnica microcirúrgica para o isolamento de células-tronco neurais da Eminência ganglionar embrião de rato E13 .

Isolamento e cultura de células-tronco neurais embrionárias de rato

Aqui, descrevemos um sistema de nucleofecção projetado para aumentar a eficiência da entrega de genes em células-tronco neurais expandidas (NSCs) isoladas da zona subventricular murina adulta. Os resultados demonstram que este método melhora significativamente a perturbação gênica em NSCs, superando a eficácia dos protocolos tradicionais de transfecção e aumentando a taxa de sobrevivência celular.

Isolamento, expansão e nucleofecção de células-tronco neurais da zona subventricular murina adulta

Para investigar a resposta imune a distúrbios cerebrais, uma abordagem comum é analisar as mudanças nas células imunológicas. Aqui, dois protocolos simples e eficazes são fornecidos para isolar células imunes do tecido cerebral murino e da medula óssea do crânio.

Isolando células imunes do cérebro e crânio de camundongos

Aprenda a dissociar tecido neural de rato usando o gentleMACS Dissociator para obter suspensões de células viáveis. Este método preserva epítopos de antígenos e simplifica a preparação de amostras para análise de células únicas em neurociência.

Geração de Single-Cell Tissue Suspensões de rato Neural

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