Medição da pressão arterial em ratos usando Recording Volume de pressão, um método de cauda-manguito
15 de maio de 2009
O CODA 8 canais de alta taxa de transferência não-invasiva da pressão arterial do sistema mede a pressão arterial em até 8 camundongos ou ratos simultaneamente. Este sistema utiliza-tail cuff Recording Volume de pressão (VPR) para medir a pressão arterial através da determinação do volume de sangue da cauda.
A palavra coda é italiana e significa cauda. O sistema não invasivo de pressão arterial Coda permite medições da pressão arterial em roedores, graças a um sensor especializado de gravação de pressão por volume que mede as alterações no volume sanguíneo da cauda quando colocado sobre a cauda de um animal. Este vídeo demonstra como configurar o sistema, preparar os animais e obter medições de pressão arterial de oito animais simultaneamente.
Olá, sou Anju Bala Krishnan, trabalhando no laboratório de Alan Dougherty, Centro de Pesquisa Cardiovascular, Universidade de Kentucky, Lexington. Hoje vamos mostrar um procedimento para medir a pressão arterial em camundongos utilizando o método de gravação de pressão por volume com colete na cauda. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar o sistema cardiovascular.
Então vamos começar. Para configurar o sistema CODA, selecione uma área do laboratório onde a temperatura ambiente seja estável em 20 graus Celsius ou acima disso. Evite locais próximos a saídas de ar condicionado, pois expor os animais a ruídos altos ou odores pode irritá-los ou causar estresse.
Os odores de animais podem incluir qualquer perfume forte que você esteja usando. Ligue o controlador Coda e, em seguida, as plataformas de aquecimento, que devem ser ajustadas para o nível três. Se a temperatura ambiente estiver acima de 25 graus Celsius, comece nos níveis um ou dois.
Realize primeiro o teste de diagnóstico do controlador, abra o software Coda. Selecione o dispositivo Coda clicando sobre ele. Clique em testar dispositivo selecionado.
Selecione as braçadeiras e os canais para testar e clique em testar. Após a conclusão do teste de diagnóstico do controlador, feche a janela de teste do dispositivo. Selecione o código do controlador a ser usado e, em seguida, clique.
Use esses dispositivos para configurar o software. Selecione ferramentas para gerenciar o pessoal. Em seguida, clique no pesquisador um.
Para alterar o nome, clique nas linhas subsequentes para adicionar pesquisadores adicionais. Em seguida, clique em salvar dados. Clique na guia técnicos para modificar ou adicionar técnicos.
Depois disso, clique na aba espécimes para nomear os animais, facilitando sua identificação, e para selecionar o tipo de animal. Em seguida, clique em salvar dados. Por fim, clique na aba animais.
Para alterar o tipo de animal e a sensibilidade, clique em salvar dados e, em seguida, feche. Para iniciar um novo experimento, selecione arquivo Novo experimento. Insira o nome do experimento, selecione o pesquisador principal e escolha uma data de início.
Clique em próximo. O próximo passo é inserir as informações básicas da sessão. Comece digitando o nome da sessão, defina os ciclos de aclimatação como cinco; se preferir não incluir ciclos de aclimatação, defina como zero.
Defina o número de séries como uma vez, com intervalo entre as séries de 30 segundos para múltiplas séries. Defina os ciclos por série como 20 ciclos e o intervalo entre ciclos como cinco segundos. Em seguida, clique em próximo.
Para iniciar a seleção de espécimes, selecione o espécime do grupo de espécimes e atribua-o ao primeiro canal disponível. E clique em próximo para definir os parâmetros da sessão. Defina a pressão máxima de oclusão como 250 milímetros.
Tempo de desinflação do mercúrio para 20 segundos. Para camundongos, volume mínimo para 15 microlitros e estilo de exibição com um canal por gráfico. Você também pode adicionar pesquisadores e técnicos adicionais.
Em seguida, clique em próximo. Revise o script da sessão e clique em próximo. Não selecione concluir até que você finalize a seção de preparo do animal, que é descrita a seguir.
E agora você pode recuperar os animais e colocá-los ao lado do sistema de pressão sanguínea coda. Antes de colocar os animais nos suportes, observe o tamanho de cada animal em relação ao tamanho do suporte selecionado. O animal deve ser capaz de entrar livremente no suporte.
Coloque cada animal em um suporte pegando-o pela cauda e posicionando-o suavemente na parte traseira do suporte, que fica voltada para a extremidade aberta do cone nasal. Prenda cuidadosamente a tampa traseira ao suporte girando o parafuso localizado na tampa traseira. Tenha cuidado para não prender a cauda ou quaisquer outras partes do corpo ao fixar a tampa traseira.
Próximo slide. O cone nasal em direção à escotilha traseira. Limitando o movimento do animal.
O cone nasal deve estar posicionado de forma a impedir que o animal dê meia-volta. Com o animal dentro do suporte, coloque o suporte sobre a plataforma de aquecimento. Na posição designada, permita que o animal se aclimate ao suporte por pelo menos cinco minutos.
Não toque nem manipule o animal. Enquanto estiver dentro do suporte, o contato aumentado pode irritar o animal, e nunca deixe o animal no suporte sem supervisão. Para posicionar corretamente a braçadeira de oclusão na cauda, passe a cauda através da braçadeira de oclusão e posicione a braçadeira o mais próximo possível da base da cauda, sem aplicar força.
Em seguida, passe a cauda pela braçadeira do sensor VPR, posicionando-a a menos de dois milímetros da braçadeira de oclusão. Fixe o tubo no entalhe na parte superior traseira do suporte. A braçadeira de oclusão na cauda é inflada para impedir o fluxo sanguíneo na cauda.
O manguito de oclusão é desinflado lentamente e o manguito de cauda VPR, que incorpora um sensor especialmente projetado, mede as características fisiológicas do fluxo sanguíneo que retorna enquanto o sangue volta à cauda. O manguito sensor VPR mede o inchaço da cauda em decorrência das pulsações arteriais provocadas pelo fluxo sanguíneo. A pressão arterial sistólica é medida automaticamente na primeira ocorrência de inchaço da cauda.
A pressão arterial diastólica é calculada automaticamente quando a taxa crescente de inchaço cessa na cauda. Depois que todos os animais forem colocados nos suportes e as braçadeiras aplicadas em suas caudas, deixe-os pelo menos cinco minutos para regularização térmica. Registre a temperatura dos animais.
Frequentemente com um termômetro infravermelho, a temperatura do animal deve estar entre 32 e 35 graus Celsius. Agora que os animais estão prontos, podemos iniciar o experimento. Clique em finalizar para começar o experimento.
A linha vermelha representa a desinsuflação da braçadeira de oclusão e da braçadeira do sensor VPR. A linha azul representa as alterações no volume sanguíneo na cauda. O primeiro ponto de inflexão da linha azul, correspondente à taxa mínima de variação, identifica a pressão arterial sistólica.
O segundo ponto de inflexão da linha azul, correspondente à taxa máxima de variação, identifica a pressão arterial diastólica ao final do experimento. Remova imediatamente os animais das braçadeiras e do suporte. Um relatório simples de resumo da sessão é exibido.
Os dados coletados no experimento são salvos como um arquivo Excel. Existem várias maneiras de processar os dados dentro do arquivo Excel. Uma prática comum é obter a média e o desvio padrão, excluir medições.
Se o desvio padrão for maior que 30. Além disso, os ciclos rejeitados podem ser visualizados e todo o banco de dados pode ser facilmente exportado para o Excel. Consulte o protocolo escrito e o manual do usuário.
Para obter mais informações, acabei de mostrar como medir a pressão arterial em camundongos de forma não invasiva utilizando a gravação de pressão por volume. É mais importante reduzir o estresse dos animais seguindo este procedimento para obter medições precisas e consistentes. Assim sendo, é isso.
Obrigado por assistir e boa sorte com os experimentos.
Visão Geral
O sistema de Pressão Arterial Não Invasiva de Alto Rendimento com 8 Canais CODA permite medições simultâneas de pressão arterial em até oito roedores. Utilizando um método de manguito caudal com Registro de Volume e Pressão (VPR), ele avalia com precisão a pressão arterial ao monitorar as alterações no volume sanguíneo da cauda.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Pesquisa cardiovascular
- Fisiologia de roedores
- Técnicas de medição não invasivas
Contexto
- O sistema CODA é projetado para medir a pressão arterial em animais pequenos.
- Utiliza um método não invasivo com manguito caudal para garantir o bem-estar animal.
- A tecnologia de Gravação de Volume e Pressão aprimora a precisão das medições.
- Condições ambientais estáveis são essenciais para resultados confiáveis.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar o procedimento para medir a pressão arterial em roedores.
- Fornecer um guia detalhado de configuração e operação do sistema CODA.
- Facilitar a pesquisa cardiovascular por meio do monitoramento preciso da pressão arterial.
Métodos Utilizados
- Configuração do sistema CODA em um ambiente controlado.
- Preparação dos animais e aclimatação aos suportes.
- Aplicação de manguitos de oclusão e VPR para medição da pressão arterial.
- Coleta e análise de dados da pressão arterial sistólica e diastólica.
Resultados Principais
- Medição bem-sucedida da pressão arterial em múltiplos roedores simultaneamente.
- Determinação precisa das pressões sistólica e diastólica utilizando a tecnologia VPR.
- Estabelecimento de protocolos para manipulação dos animais e registro de dados.
Conclusões
- O sistema CODA é eficaz para a medição não invasiva da pressão arterial em roedores.
- A configuração adequada e o preparo do animal são essenciais para resultados precisos.
- Este método apoia diversas aplicações na pesquisa cardiovascular.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
Medição não invasiva e de alto rendimento da pressão arterial em camundongos utilizando a Gravação de Volume e Pressão (VPR) permite a fenotipagem cardiovascular robusta e a avaliação quantitativa de pontos finais hemodinâmicos em modelos pré-clínicos. Essa capacidade apóia a descoberta precoce, a validação de alvos e a pesquisa translacional ao fornecer dados reprodutíveis e multiparamétricos em coortes geneticamente diversos ou tratados farmacologicamente. A escalabilidade e padronização do sistema CODA facilitam a tomada de decisões em nível de portfólio e a comparabilidade entre estudos na descoberta de fármacos cardiovasculares.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação quantitativa da função cardiovascular em camundongos geneticamente modificados ou tratados.
- Apóia a redução de riscos mecanicistas ao fornecer leituras hemodinâmicas diretas para validação de alvos.
- Facilita a verificação de hipóteses quanto à participação de vias na regulação da pressão arterial.
- Fornece pontos finais padronizados para estudos comparativos entre alvos candidatos.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Fornece medições validadas e reprodutíveis de pressão arterial e fluxo sanguíneo para fluxos de trabalho de triagem posteriores.
- Permite a padronização e escalabilidade de ensaios com processamento simultâneo de múltiplos animais.
- Permite a avaliação quantitativa dos efeitos de compostos sobre a pressão arterial sistólica, diastólica e média.
- Oferece prontidão da plataforma para estudos longitudinais repetidos em diversas linhagens de camundongos.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha pontos finais pré-clínicos com biomarcadores cardiovasculares clínicos para continuidade translacional.
- Apoia decisões de avanço ajustadas ao risco mediante a quantificação de desfechos funcionais em modelos relevantes para a doença.
- Permite o monitoramento longitudinal da eficácia e segurança terapêutica in vivo.
- Facilita a integração de dados entre estudos para triagem de portfólio orientada por biomarcadores.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O método VPR de cauda com colete se integra ao continuum de descoberta a pré-clínico ao permitir o fenotipagem cardiovascular padronizada e não invasiva, desde a validação inicial do alvo até a otimização do composto líder e estudos de eficácia pré-clínicos.
- Biologia da Descoberta: Fornece avaliação quantitativa e baseada em hipóteses de alvos e vias cardiovasculares.
- Triagem: Fornece dados reprodutíveis e multiparamétricos de pressão arterial para avaliação de compostos.
- Análises: Gera conjuntos de dados compatíveis com Excel para comparação estatística e análise entre condições.
- Pesquisa Translacional: Conecta desfechos pré-clínicos e clínicos por meio da medição direta da pressão arterial e do fluxo sanguíneo.
- Reutilização Empresarial: Oferece uma plataforma escalável e padronizada para uso repetido em múltiplos estudos e equipes.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na pesquisa cardiovascular.
- Valor Operacional: Aprimora a padronização, reprodutibilidade e produtividade em estudos in vivo.
- Valor Estratégico: Melhora a qualidade das decisões de prosseguimento ou interrupção e a eficiência do capital ao fornecer dados funcionais robustos.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização e o avanço ajustados ao risco de programas cardiovasculares.
Considerações de Implementação
- Requer experiência técnica em manipulação de roedores e monitoramento fisiológico.
- Necessita de instrumentação dedicada, software e controles ambientais para operação confiável.
- Exige padronização entre equipes nos protocolos de preparação dos animais e de análise de dados.
- Adaptável a diferentes tamanhos e linhagens de roedores mediante seleção apropriada do suporte e da braçadeira.
- A precisão depende da minimização do estresse animal e da manutenção de condições térmicas estáveis.
