Preparação Cell Block da amostra citologia com predomínio de células individualmente Scattered

Shidham método para a preparação de blocos de células com marcador de AV partir de amostras de citologia com células individualmente dispersos e grupos de células pequenas.

A preparação do bloco de células começa com a transferência das células concentradas da amostra para um tubo de vidro de fundo plano mantido dentro de um tubo maior. As células são então colocadas em camadas na parte inferior por centrifugação antes de adicionar o marcador AV e o HistoGel fundido. A adição de água morna ao tubo de vidro transportador garante que o HistoGel permaneça líquido.

Uma centrifugação subsequente empurra o marcador AV através do gel e concentra as células em uma camada próxima à superfície de corte do bloco de células. Uma vez solidificado, o botão de gel pode ser removido e processado para incorporação de parafina. Olá, sou o Dr. George Varszegi, da seção de citologia do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Wisconsin em Milwaukee, Wisconsin.

E eu sou o Dr.Vsam, também da seção de Citopatologia do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina de Wisconsin Milwaukee. E hoje gostaríamos de mostrar a você um procedimento para preparar blocos de células a partir de preparações citológicas com preponderância de células espalhadas individualmente. Usamos este procedimento para estudar o perfil imunológico das células nessas células espalhadas individualmente nas seções do bloco de células e também para avaliar as colorações especiais nessas seções.

Então vamos começar. Para iniciar este procedimento, transfira cerca de 0,5 mililitros da amostra preferencialmente concentrada para um tubo de vidro de fundo plano de 45 milímetros de comprimento com 15 milímetros de diâmetro. Em seguida, coloque o tubo de vidro em um grande tubo de suporte de plástico de fundo plano e centrifugue a 1800 Gs por cinco minutos em temperatura ambiente.

Após a centrifugação, remova o tubo de vidro de fundo plano do tubo transportador de plástico e despeje o super natan. Tomando cuidado para não perturbar a camada plana de sedimento celular no fundo. Um farol escuro em Johnny Vena ou marcador AV é adicionado às células como uma placa de sinalização.

Depois que as células são incorporadas, um marcador AV serve para identificar o nível em que as células estão concentradas dentro do bloco de parafina. Usando uma pipeta especial, adicione um cubo de superfície plana marcador AV previamente preparado às células do tubo. Agora comece o processo de adicionar o gel, liquefazer uma alíquota de histo gel ou HG derretendo-o no micro-ondas por 10 segundos em potência média ou siga as instruções do fabricante.

Adicione 0,5 mililitros do HG fundido ao tubo que contém as células sedimentadas. Misture e retampe rapidamente o tubo. Prossiga imediatamente para adicionar cerca de dois mililitros e meio de água morna a 45 graus Celsius ao tubo de plástico transportador.

Em seguida, insira o tubo CAPAs contendo as células, o marcador AV e o HistoGel. Trabalhar rapidamente e usar água morna evita que o gel se solidifique durante as etapas subsequentes. Em seguida, centrifugue para empurrar o marcador AV através do gel e concentrar as células em uma camada que ficará mais próxima da superfície de corte do bloco de células embebido em parafina final.

Use copos giratórios e não copos de ângulo fixo para que as células se concentrem perpendicularmente ao fundo plano do tubo de vidro e gire-o 1800 Gs por cinco minutos à temperatura ambiente. Quando a centrifugação estiver concluída, remova os tubos suave e verticalmente da centrífuga, tomando cuidado para não perturbar a fina camada de sedimentos das células no fundo. Usando uma pinça, remova o tubo de vidro menor verticalmente sem perturbar a camada de sedimentos das células da amostra.

Por fim, leve à geladeira o pequeno tubo de vidro na posição vertical por 15 minutos para esfriar e solidificar o gel. Ao final de 15 minutos, proceda à remoção do gel contendo as células do tubo de vidro para desalojar o disco HG solidificado, que contém uma camada de amostra concentrada na parte inferior junto com o marcador AV de cor escura. Use uma agulha de calibre 23 presa a uma seringa cheia de 10% de formina.

Comece inserindo a agulha ao longo da lateral do tubo na periferia do disco HG solidificado. Continue girando a agulha ao longo da lateral do tubo e, ao mesmo tempo, empurrando lentamente a solução de Formina através da seringa. Observe a separação do botão HG do fundo plano do tubo de vidro.

O botão de gel separado contendo o marcador AV de beacon de cor escura e a amostra concentrada é denominado acabamento de bloco de células, colocando o bloco de células em um rotulado e enviando-o para processamento de tecido para preparar blocos de células embebidas em parafina. Uma vez que o bloco de células esteja embutido, prossiga para cortar a amostra para começar a cortar o disco do bloco de células embutido em parafina, monte o bloco de células embebido em parafina na seção do micrótomo por corte de curso para nivelar a superfície do bloco de parafina e expor o disco do bloco de células até que o marcador AV de cor escura esteja exposto e claramente visível. Assim que o marcador AV de cor escura estiver exposto, corte seções de três a quatro mícrons de espessura.

Essas seções contêm células concentradas do espécime original. Colete cada seção em uma lâmina de vidro para posterior coloração seguida de microscopia. Aqui, com baixa ampliação, vemos o impacto da inclusão de um marcador de casca de banana com tinta AV na amostra na celularidade nessas seções coradas com h e e.

Pode-se ver na imagem à esquerda que este marcador permite o monitoramento da profundidade de corte da seção para obter o nível com boa celularidade. O marcador AV também permite a orientação de diferentes células, em seções específicas a serem seguidas em diferentes seções seriais em outras lâminas de vidro com o marcador. Na ausência da profundidade de corte não pôde ser monitorada.

As amostras de tecido foram coletadas em um plano de secção com escassa celularidade. O grau de celularidade presente nas amostras é ainda mais evidente em alta ampliação com o marcador AV presente, a profundidade de corte pode ser facilmente monitorada e pode-se facilmente evitar a obtenção de amostras com baixa celularidade. Mostramos a você um método de preparar o bloco de células a partir da amostra com fragmentos e células frouxamente espalhados.

O marcador AV escuro, que adicionamos durante o processamento do bloco de células, nos ajuda a selecionar essas seções com a maior concentração de células. Também nos permite orientar adequadamente essas seções em lâminas de vidro. É importante que o HistoGel esteja em um estágio fundido enquanto as células estão se alinhando ao longo do tubo de vidro com fundo de pla de inundação, que é a superfície de corte.

No entanto, este procedimento pode ser modificado para outros métodos, incluindo métodos frios, como trombina, fibrinogênio, por modificações relevantes. Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus procedimentos.

Obrigado.