Name: Reestenose imagem In-Stent: Um Barato, modelo confiável, rápida e pré-clínicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprenda a implantar stents em modelo pré-clínico de ratos Sprague-Dawley para estudar reestenose intra-stent usando tomografia de coerência óptica. Este método permite visualização vascular detalhada e análise quantitativa de placa.

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Financiamento O presente estudo foi apoiado pelo Fundo de Investigação Falk para o Departamento de Cirurgia Cardiotorácica da Universidade de Stanford School of Medicine, Stanford, CA, EUA. Tobias Deuse foi financiado por uma bolsa de pesquisa da Sociedade Alemã Cardíaca. Sonja Schrepfer recebeu uma bolsa de pesquisa do Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/2-1).

Implantação de stent de aorta <ol><li> Masculino Sprague-Dawley pesando 550-600 g forem comprados de Harlan (Indianapolis, IN, EUA). Ratos casa em condições convencionais, alimentados padrão ração e água ad libitum. </li><li> Anestesiar ratos com isoflurano (2%) e ketamina (25 mg / kg). Sob visão microscópica, realizar uma mini-laparotomia mediana superior para expor a aorta infra-renal. </li><li> Dissecar a aorta abdominal do tecido circundante, desde o nível das artérias renais até a bifurcação. ATENÇÃO: Não há necessidade de dissecar a aorta do IVC. </li><li> Use microclamps para parar o fluxo sanguíneo na aorta. Coloque a braçadeira proximal primeiro lugar, seguido pela fixação distal. </li><li> Abra a aorta com uma pequena incisão transversal e lave a aorta com heparina (200 unidades). </li><li> O endotélio da aorta é desnudada pela passagem de um 2-francês cateter Fogarty embolectomia arterial (Baxter Healthcare, Deerfield, IL, EUA). </li><li> Use qualquer tamanho humano stent entre 8mm e 12mm de comprimento, e 2,5 mm-3mm de diâmetro. ATENÇÃO: O diâmetro do stent não deve exceder o diâmetro do vaso em mais de 10% para evitar estenose pré e pós-stent. ATENÇÃO: Não ligue extensão do stent dentro do mesmo estudo. </li><li> Implantar o stent com o balão de pressão adequadas para atingir o diâmetro desejado. </li><li> A incisão aórtica pequena é fechada com suturas 9-0 Prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). </li><li> Fechar a incisão abdominal em camadas com Vicryl 4-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). As suturas de pele ainda deve ser removido dentro de 7-14 dias, mesmo quando Viacryl é usado. </li><li> Animais receberam carprofeno (6mg/kg) no intra-operatório, e metamizol por mais 7 dias na água de beber. </li></ol> Tomografia de Coerência Óptica (OCT) Imaging Imagens outubro são obtidos com o sistema de outubro M2 imagem (LightLab Imaging, Inc., Westford, MA, EUA). ImageWire é uma sonda de imagem para fornecer a luz para o tecido e recolher os sinais. O ImageWire consiste de 0,006 &quot;(0,15 mm) de fibra ótica do núcleo, dentro de uma bainha com um OD máximo de 0,019&quot; (0,48 mm). <ol><li> Anestesiar ratos com isoflurano (2%) e ketamina (25 mg / kg). Sob visão microscópica, realizar uma laparotomia mediana refazer para expor a aorta infra-renal. </li><li> Pinça da aorta proximal e ambos artéria ilíaca. </li><li> Realizar uma arteriotomia transversa na extremidade distal da aorta, lave com 1ml de PBS com cateter 28G e insira o cateter outubro e enviá-lo para a aorta. </li><li> Pullback motorizado outubro de imagem é realizada a uma taxa de retração de 1,0 mm por segundo. </li><li> Adquirir imagens a 15 frames por segundo, as imagens são exibidas com uma cor tabela look-up e digitalmente arquivados. </li><li> Feche a arteriotomia. </li><li> Fechar o abdominal e incisões com Vicryl 4-0 sutura (Ethicon, Norderstedt, Alemanha). As suturas de pele ainda deve ser removido dentro de 7-14 dias, mesmo quando Viacryl é usado. </li><li> A formação da neoíntima máximo irá desenvolver dentro de 6 semanas após o implante de stent. </li></ol> Análise de imagens outubro Medições de outubro são realizadas utilizando o software de imagem LightLab outubro de propriedade com uma interface baseada em ratos. <ol><li> Calibrar o sistema para o reflexo da imagem fio outubro, que é a técnica de calibração padrão para este sistema. </li><li> Traço lúmen e stent áreas das secções transversais (CSA) manualmente em cada intervalos de 1,0 mm. </li><li> Calcular a área de placa transversal como CSA stent subtraído do CSA lúmen. Calcular a área por cento da placa, placa CSA, dividido pelo CSA stent (%). Calcular áreas de placa médio por cento. </li></ol> Validação da técnica outubro Resultados outubro correlaciona bem com a histopatologia (Figura 1). CSAs placa histológicos são calculados como descrito acima. Histologia revela hiperplasia intimal com alta densidade de células fusiformes e apenas poucas células mononucleares da inflamação. Após 6 semanas, os stents são completamente cobertas com tecido de granulação neointimal eo CSA placa medidas 1,3 ± 0,4 mm 2 em um stent de 2,5 mm. <img src="/files/ftp_upload/1346/1346fig1tmb.jpg" border="0" /> Figura 1: OCT (A) e histológico (B; ampliação de 16x) imagens do stent seis semanas após a implantação. Resultados obtidos a partir de placas CSA imagens outubro correlaciona bem com histopatologia. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1346/1346fig1.jpg">clique aqui</a> para ver uma versão ampliada da figura 1.

<ol><li>Langeveld, B., Roks, A. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commentary%3A+rat+restenosis+models%3A+means+for+thorough+restenosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+endovascular+therapy%22%5BJournal%5D)">Commentary: rat restenosis models: means for thorough restenosis research.</a> Journal of endovascular therapy. 12 (3), 343-345 (2005).</li>
<li>Roguin, A., Grenadier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stent-based+percutaneous+coronary+interventions+in+small+coronary+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Acute+Card+Care%22%5BJournal%5D)">Stent-based percutaneous coronary interventions in small coronary arteries.</a> Acute Card Care. 8, 70-74 (2006).</li>
<li>Post, M. J., Waltenberger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+Is+Beautiful%3A+A+Miniature+Stent+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Small Is Beautiful: A Miniature Stent Model.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 701-702 (2007).</li>
<li>Langeveld, B., Roks, A. J. M., Tio, R. A., Boven, A. J. van, Want, J. J. L. vander, Henning, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+abdominal+aorta+stenting%3A+a+new+and+reliable+small+animal+model+for+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+vascular+research%22%5BJournal%5D)">Rat abdominal aorta stenting: a new and reliable small animal model for in-stent restenosis.</a> Journal of vascular research. 41 (5), 377-386 (2004).</li>
<li>Lowe, H. C., Chesterman, C. N., Khachigian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+aortic+stenting%3A+toward+a+simple+model+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+cardiology%22%5BJournal%5D)">Rat aortic stenting: toward a simple model of in-stent restenosis.</a> The American journal of cardiology. 88 (6), 720-721 (2001).</li>
<li>Groenewegen, R., Harst, R. vander, Roks, R., Buikema, R., Zijlstra, R., Gilst, R. van <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+angiotensin+II+and+angiotensin+II+type+1+receptor+blockade+on+neointimal+formation+after+stent+implantation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Effects of angiotensin II and angiotensin II type 1 receptor blockade on neointimal formation after stent implantation.</a> International Journal of Cardiology. , (2007).</li>
<li>de Smet, B. J. G. L., Zijlstra, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+look+at+drug+eluting+stents+with+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">A look at drug eluting stents with optical coherence tomography.</a> European Heart Journal. 28 (8), 918-919 (2007).</li>
<li>Pinto, T. L., Waksman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+applications+of+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+interventional+cardiology%22%5BJournal%5D)">Clinical applications of optical coherence tomography.</a> Journal of interventional cardiology. 19 (6), 566-573 (2006).</li>
<li>Matsumoto, D., Shite, J., Shinke, T., Otake, H., Tanino, Y., Ogasawara, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neointimal+coverage+of+sirolimus-eluting+stents+at+6-month+follow-up%3A+evaluated+by+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Neointimal coverage of sirolimus-eluting stents at 6-month follow-up: evaluated by optical coherence tomography.</a> European Heart Journal. 28 (8), 961-967 (2007).</li>
<li>Kawase, Y., Suzuki, Y., Ikeno, F., Yoneyama, R., Hoshino, K., Ly, H. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+nonuniform+rotational+distortion+between+mechanical+IVUS+and+OCT+using+a+phantom+model.+Ultrasound+in+medicine+%26amp%3B+biology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Comparison of nonuniform rotational distortion between mechanical IVUS and OCT using a phantom model. Ultrasound in medicine &amp; biology.</a> 33 (1), 67-73 (2007).</li>
</ol>

Todos os ratos foram alojados nas instalações de cuidados de animais em Stanford University Medical Center (Stanford, Ca), sob condições normais de temperatura, umidade e condições de iluminação, e receberam ração e água ad libitum. A investigação conformados com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelo National Institutes of Health EUA (NIH Publication No. 85-23, revista em 1996). O protocolo do estudo foi aprovado pela Junta Administrativa de Laboratório Animal Care, Stanford University.

Embora a artéria ilíaca coelho eo porco modelos da artéria coronária são os mais freqüentemente utilizados para a colocação de stent 1, uma combinação de equipamentos radiológicos e cirúrgico é necessário, a capacidade de alojamento dos animais é limitada, e os custos de aquisição são elevados. Limitações do modelo de ratos stent é necessário o uso de stents projetado especificamente para ratos, a relação de metal para artéria, resultando em lesão vascular mais dois, ea incidência de trombose artificialmente elevado 3. O modelo de implante de stent rato é um modelo de 4 simples, barata, rápida e precisa pré-clínicos. Após o relatório inicial de implante direto do stent da aorta de ratos por Lowe et al. 5 de viabilidade e adequação deste modelo para a avaliação da fisiopatologia da reestenose intra-stent foi exaustivamente demonstrado 5,6. O diâmetro da aorta de ratos é adequada para permitir a expansão de stents comercialmente disponíveis, sem interrupção da arquitetura navio fisiológico. Tem sido demonstrado que os mecanismos fisiopatológicos, tais como a formação de trombos, inflamação e proliferação SMC, desenvolver nestes modelos de ratos como o fazem no coelho e porco. Portanto, esses modelos são representações bem do próprio processo de reestenose. A outubro de alta resolução tecnologia de imagem é útil para avaliar a hiperplasia intimal. A profundidade de penetração é apenas 1,5-2 milímetros, mas sua resolução é uma ordem de magnitude maior do que a ultra-sonografia intravascular (IVUS) 7,8. Vários estudos comparando com outubro IVUS concluir que outubro é atualmente a técnica preferida para avaliar hiperplasia neointimal após implante de stent 80-10. Especialmente em animais de pequeno porte, com diâmetros de pequenos vasos, a alta resolução de outubro torna a modalidade melhor imagem para a avaliação de reestenose. Em resumo, este vídeo mostra que (1) implante de stent de aorta de ratos é facilmente viável, (2) de ratos stent aorta abdominal é adequado para testes stents comercialmente fabricados e (3) outubro de imagens é uma técnica precisa e elegante para acompanhamento longitudinal de intra-stent reestenose.

reestenose imagem in-stent: um barato, modelo confiável, rápida e pré-clínicos

Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model

Modelos pré-clínicos de reestenose são essenciais para desvendar os processos fisiopatológicos que levam a reestenose intra-stent e otimizar existentes e futuras stents farmacológicos. Uma variedade de anticorpos e cepas de transgênicos e knockout estão disponíveis em ratos. Conseqüentemente, um modelo de reestenose no rato seria conveniente para estudos Pathobiological ea fisiopatológicos. Neste vídeo, apresentamos o procedimento completo e pit-quedas de um modelo de rato stent adequados para a investigação de alto rendimento stent. Nós vamos mostrar o procedimento cirúrgico de implantação do stent, ea avaliação da reestenose intra-stent utilizando a técnica mais elegante de outubro (Tomografia de Coerência Óptica). Esta técnica proporciona alta precisão na avaliação CSAs placa (áreas de seção transversal) e se correlaciona bem com cortes histológicos, que exigem técnicas especiais e tempo consumindo incorporação e de corte. Outubro de imagem ainda permite o monitoramento longitudinal do desenvolvimento da reestenose intra-stent dentro do mesmo animal em comparação com um tempo de instantâneos utilizando histologia.

Este vídeo demonstra como usar um modelo pré-clínicos de baixo custo e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicos da intra-stent desenvolvimento de reestenose. Longitudinal monitorização in vivo utilizando OCT (Optical Coherence Tomography) e análise de imagens de outubro também são demonstrados.

Reestenose imagem In-Stent: Um Barato, modelo confiável, rápida e pré-clínicos

Modelos pré-clínicos de restenose são essenciais para desvendar os processos fisiopatológicos que levam à restenose intra-stent e para otimizar as terapias existentes e...

Olá, sou o Dr. Schwab do Laboratório de Transplante de Células-Tronco e Imunologia do Transplante da Universidade Stanford. Sou a Dra. Dee. Trabalho no Departamento de Cirurgia Cardiovascular da Universidade Central.E eu sou o Dr. Keno da Medicina Cardiovascular da Universidade de Stanford. Hoje vamos mostrar um procedimento para eventos de implantação de stent. Também demonstraremos a OCT como uma técnica inovadora para imagem in vivo.Utilizamos este modelo pré-clínico de baixo custo, confiável e rápido em nosso laboratório para estudar o desenvolvimento da estenose de stent. Então, vamos começar. Para iniciar este procedimento, prepare o stent preenchendo a pistola com 10 ccs de solução salina e D air e trave-a.Em seguida, conecte o cateter de stent e a pistola. Quando o stent estiver pronto, o rato macho Sprague Dawley é anestesiado com isoflurano e realiza-se uma laparotomia mediana superior para expor a aorta infrarrenal. Os seguintes passos são realizados sob visão microscópica.A aorta abdominal é dissecada do tecido circundante desde o nível das artérias renais até a bifurcação. É importante observar que não é necessário dissecar a aorta da veia cava inferior. Utilize grampos microcirúrgicos para interromper o fluxo sanguíneo aórtico, colocando primeiro o grampo proximal.Em seguida, do lado distal do grampeamento, os ramos são grampeados individualmente. A seguir, a aorta é aberta com uma pequena incisão transversal, não muito próxima ao grampeamento proximal, e lavada com heparina. Uma vez aberta a aorta, o endotélio aórtico é desnudado pela passagem de um cateter arterial embolectômico de dois French foggerty.Remova a tampa plástica do stent e introduza o stent na posição da aorta e libere-o. O comprimento do stent não deve ser alterado dentro do mesmo estudo; dependendo do stent utilizado, aplique a pressão adequada no balão para atingir o diâmetro desejado. Para evitar estenose pré e pós-stent, o diâmetro do stent não deve exceder o diâmetro do vaso em mais de 10%. Uma vez que o stent tenha sido liberado, lave-o com heparina.Agora que a implantação do stent está concluída, mude a visualização microscópica para ampliação de 10x. A pequena incisão aórtica é fechada com suturas contínuas de prolina 9-0. Por fim, os grampos são abertos e a incisão abdominal é fechada em camadas com três suturas contínuas de Vicryl 3-0.Para iniciar a imagem por tomografia de coerência óptica, realiza-se uma laparotomia mediana para expor a aorta infrarrenal, clampar a aorta proximal e ambas as artérias ilíacas. Após isso, realiza-se uma arterotomia aórtica transversa. Em seguida, insere-se o cateter de OCT e avança-se para dentro da aorta.E a luz está se movendo agora da parte proximal para, você sabe, dá para ver bem aqui. Sim, sim, dá para ver isso. Ah, isso é bem interessante.Com o cateter inserido, podemos agora iniciar a imagem por OCT. A aorta é lavada com solução salina e realizada uma retirada automatizada. A aquisição de imagens por OCT é realizada a uma velocidade de retirada de um milímetro por segundo.As imagens são adquiridas a 15 quadros por segundo. As imagens adquiridas são exibidas com uma tabela de cores e arquivadas digitalmente. Após a conclusão da aquisição de imagens, a arterotomia é fechada utilizando suturas contínuas de prolina 9.0.Por fim, as incisões abdominais são fechadas com três suturas contínuas de Vicryl 3-0. Agora que as imagens de OCT foram obtidas, podemos iniciar a análise das imagens utilizando um software proprietário de imagem de OCT da Light Lab com interface baseada em rato. Primeiro, calibre o sistema com base na reflexão do fio de imagem de OCT.Em seguida, trace manualmente as áreas da luz e do stent em cortes transversais a intervalos de um milímetro para realizar os cálculos. A área da placa em corte transversal é calculada subtraindo-se a área da luz da área do stent em corte transversal. A porcentagem de área da placa é calculada dividindo-se a área da placa em corte transversal pela área do stent em corte transversal.Os resultados de OCT correlacionam-se bem com a placa histopatológica. As áreas transversais são calculadas conforme descrito. A histologia seis semanas após a implantação do stent revela hiperplasia intimal com alta densidade de células em forma de fuso e apenas pouca inflamação mononuclear.Células após seis semanas, os stents estão completamente cobertos por tecido de granulação neointimal e a área da seção transversal da placa mede 1,3 mais ou menos 0,4 milímetros quadrados em um stent de 2,5 milímetros. Acabamos de mostrar como implantar um stent humano na aorta. E que os métodos de OCT permitem monitorar in vivo o desenvolvimento da estenose.Ao realizar este procedimento, certifique-se de usar corações com peso superior a 500 gramas, para que os AARs abdominais correspondam ao tamanho das artérias coronárias humanas e, consequentemente, ao tamanho do stent. Lembre-se de evitar o fenômeno da can lab e a lesão vascular durante a implantação do stent. É isso aí.Muito obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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