Name: Rastreamento de Dinâmica de enxerto muscular em animais de pequeno In Vivo Fluorescent Imagem (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Aprenda a usar imagem de fluorescência in vivo para monitorar regeneração muscular em camundongos com mioblastos marcados por GFP. Este método permite estudos longitudinais não invasivos da dinâmica de enxerto celular.

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O trabalho de Z Yang e Wang Y foi possível graças a conceder K02 AR051181 de NIAMS / NIH, subsídios da Muscular Dystrophy Association e Harvard Stem Cell Institute for Y Wang. O trabalho de Q Zeng e Xu X são suportados por uma bolsa concedida ao programa Lab imagem óptica do Brigham e do Hospital da Mulher. Os autores gostariam de agradecer Liu Wen do Departamento de Anestesia, BWH, para ajuda técnica no trabalho da célula.

Preparação celular <ol><li> Isolamento das células satélites <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Sob anestesia, os músculos dos membros de camundongos transgênicos GFP (C57BL / Ka-βactin-EGFP) são removidos. Após o corte em pedaços pequenos, as células satélite são enzimaticamente dissociado pela incubação do tecido picada com solução de 2% dispase colagenase durante 1 hora a 37 ° C. </li><li> Neutralize a digestão enzimática com meio de cultura contendo Ham F-10 e 20% FBS, dissociar o músculo por trituração repetido com uma pipeta Pasteur. As células são filtrados através de um filtro de células (ø70-100μm) e então semeadas em uma placa não-revestido por 1 hora a 37 ° C. </li><li> Remova cuidadosamente o sobrenadante e placa-los em um prato de colágeno revestido. Repita este passo uma hora mais tarde, para purificar os mioblastos. (Pré-plate) </li><li> Troque a mídia ea placa de células no tempo. Os mioblastos final purificado são cultivadas em meio contendo Ham F-10, 20% FBS, 100 U / ml de penicilina, estreptomicina e 100 mg / ml (média de crescimento), a 37 ° C com 5% de CO2 do ar, 95%. </li></ol> </li><li> Cultura e expandir a mioblastos primários em meio de crescimento com a adição de FGF básico de 10 ng / ml. </li><li> Para todos os experimentos in vivo, injetamos 5x10 5 células por músculo TA. </li><li> Ao colher os mioblastos, destacamos as células usando 0,25% de tripsina / EDTA e lavá-los com PBS duas vezes. O número de células são contadas com um hemocitômetro e as células são ressuspendidas em HBSS a uma concentração de 5x10 4 células / ml. As células concentradas em HBSS são colocados no gelo e injetado dentro de uma hora após a coleta. </li></ol> Vivo na imagem <ol><li> Camundongos machos mdx com a idade de 4-6 semanas são comprados a partir de Jackson laboratório e mantida em uma instalação de alojamento dos animais. </li><li> Após cerca de uma semana de alojamento para o meio ambiente, os ratos estão prontos para serem implantados com a cultura de células. </li><li> Antes do transplante das células, o mouse é anestesiado por uma injeção intraperitoneal (ip) da mistura de ketamina (100 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg). Em seguida, o cabelo em torno da área do músculo TA é removida através da aplicação de Nair para a perna e à espera de 30 segundos para limpe-o com água destilada. </li><li> Enquanto o mouse está ainda sob anestesia, 5x10 5 células em HBSS 10μl estão lentamente injetadas em cada músculo TA em 3 pontos usando uma agulha de calibre 30. </li><li> Após o passo 4, o mouse pode ser regularmente fotografada pela fluorescência in vivo de imagens. A fluorescência de imagem da estação Nightowl LB981 (Berthold Technologies, Inc.), equipado com uma câmera de alta charge-coupled sensível, é usado para obter imagens das pernas dificultam dos ratos. </li><li> No dia da in vivo de imagens, nós primeiro verificar o crescimento do cabelo no músculo TA. Se necessário, voltar a aplicar Nair para remover o cabelo como descrito acima, depois de anestesiar o rato com a mistura de Ketamina e Xilazina. </li><li> Enquanto o mouse está sob anestesia, colocamos o mouse em uma posição de bruços em um pedaço de papel não-fluorescente preto (papel Artagain preto de Strathmore). Para expor totalmente o músculo TA para uma melhor imagem, que tape as patas traseiras para o papel. </li><li> Nós colocamos o mouse na câmara de imagem e posição da perna a ser trabalhada no centro do campo de visão da câmera. Nós primeiro mudar o filtro de emissão para tirar uma foto em tons de cinza fotográfica tradicional da perna com um tempo de exposição de 5 segundos. Reajuste a posição do mouse e foco da câmera, se necessário. Os parâmetros de imagem, incluindo o tempo de exposição (1.250 ms), altura de amostra (0,9 cm), etc são mantidas constantes no processo experimental. </li><li> Em seguida, interruptor no filtro de emissão adequada para o comprimento de onda da proteína verde fluorescente. Tomamos imagem de fluorescência com um tempo de exposição de 1.250 ms e um número binning de 1. Depois de imagem, o mouse é removido da câmara de imagem para uma gaiola que esperar a recuperação. </li><li> Para a análise, traçamos uma região de interesse (ROI) ao longo dos sinais fluorescentes para medir sua intensidade em termos de fótons por segundo. Também medimos o tamanho do ROI em termos de número de pixels como um outro valor de quantificação. Os experimentos de imagem pode ser repetida a cada semana ou mais freqüentemente ao longo de alguns meses, se necessário, para aquisição de dados longitudinal. </li></ol> No final dos experimentos, o mouse é sacrificados eo músculo TA é colhida para análise histológica.

<ol><li>Ballou, B., Ernst, L. A., Waggoner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+imaging+of+tumors+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescence imaging of tumors in vivo.</a> Curr Med Chem. 12, 795-805 (2005).</li>
<li>Green, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263, 802-805 (1994).</li>
<li>Godavarty, A., Sevick-Muraca, E. M., Eppstein, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+fluorescence+lifetime+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Phys%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional fluorescence lifetime tomography.</a> Med Phys. 32, 992-1000 (2005).</li>
<li>Graves, E. E., Weissleder, R., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+molecular+imaging+of+small+animal+tumor+models%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorescence molecular imaging of small animal tumor models.</a> Curr Mol Med. 4, 419-430 (2004).</li>
<li>Graves, E. E., Yessayan, D., Turner, G., Weissleder, R., Ntziachristos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+in+vivo+fluorochrome+concentrations+measured+using+fluorescence+molecular+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Validation of in vivo fluorochrome concentrations measured using fluorescence molecular tomography.</a> J Biomed Opt. 10, 44019-44 (2005).</li>
<li>Gurfinkel, M., Ke, S., Wen, X., Li, C., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescence+optical+imaging+and+tomography.+Dis+Markers%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescence optical imaging and tomography. Dis Markers.</a> , 107-121 Forthcoming.</li>
<li>Lee, J., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+fluorescence+enhanced+optical+tomography+using+referenced+frequency-domain+photon+migration+measurements+at+emission+and+excitation+wavelengths%5BTitle%5D)+AND+%22J+Opt+Soc+Am+A+Opt+Image+Sci+Vis%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional fluorescence enhanced optical tomography using referenced frequency-domain photon migration measurements at emission and excitation wavelengths.</a> J Opt Soc Am A Opt Image Sci Vis. 19, 759-771 (2002).</li>
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<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+biology+of+cancer+cells+visualized+with+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Top+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo cell biology of cancer cells visualized with fluorescent proteins.</a> Curr Top Dev Biol. 70, 121-144 (2005).</li>
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<li>Morgan, J. E., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+satellite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle satellite cells.</a> Int J Biochem Cell Biol. 35, 1151-116 (2003).</li>
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<li>Morgan, J. E., Coulton, G. R., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mdx+muscle+grafts+retain+the+mdx+phenotype+in+normal+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Mdx muscle grafts retain the mdx phenotype in normal hosts.</a> Muscle Nerve. 12, 401-409 (1989).</li>
<li>Sherwood, R. I., Christensen, J. L., Weissman, I. L., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determinants+of+skeletal+muscle+contributions+from+circulating+cells%2C+bone+marrow+cells%2C+and+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Determinants of skeletal muscle contributions from circulating cells, bone marrow cells, and hematopoietic stem cells.</a> Stem Cells. 22, 1292-1304 (2004).</li>
<li>Cerletti, M., Jurga, S., Witczak, C. A., Hirshman, M. F., Shadrach, J. L., Goodyear, L. J., Wagers, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient%2C+functional+engraftment+of+skeletal+muscle+stem+cells+in+dystrophic+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Highly efficient, functional engraftment of skeletal muscle stem cells in dystrophic muscles.</a> Cell. 134, 37-47 (2008).</li>
</ol>

Montamos uma plataforma de imagem confiável e estável para acompanhar a fluorescência rotulados células transplantadas no músculo esquelético anfitrião neste estudo. GFP-rotulados mioblastos de camundongo GFP transgênicos representa um tipo de células-tronco adultas que serão candidatos para terapia celular no futuro. A manipulação constante, incluindo o número de células, injeção de células, fundo claro, a posição de imagem e de parâmetros de máquina é importante para a obtenção de imagem de alta qualidade e especialmente para análise quantitativa. Fluorescência de imagens tem muitas aplicações na pesquisa biomédica, uma vez que é não-invasivo, fácil de usar, e tem uma alta taxa de transferência. Além de imagens de fluorescência pode fornecer uma medida quantitativa com base na contagem de fótons, porém, devido à dispersão, atenuação e absorção, a luz não pode penetrar uma grande distância no tecido, que é uma lacuna da técnica. Esforços têm sido feitos para uso repórter vermelho ou infravermelho próximo para aumentar a profundidade de penetração da luz. Outra vantagem de imagens de fluorescência é que é traduzível para clínicas específicas, se o repórter fluorescente é aprovado para uso humano. Comparação com ressonância magnética, tomografia computadorizada, PET e, fluorescência de imagem tem alta flexibilidade, uma vez que não requer hardware caro e agentes de imagem. Um exemplo é a fluorescência baseada endoscópio e micro-endoscópio que têm sido utilizados em clínicas. Através da combinação de imagens de fluorescência com outras modalidades, esperamos alcançar a capacidade de adquirir tanto as informações anatômicas e funcionais sobre os processos biológicos subjacentes.

<table><tbody><tr><td>NightOwl LB981</td><td>Berthold Technologies</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

rastreamento de dinâmica de enxerto muscular em animais de pequeno in vivo fluorescent imagem

Tracking Dynamics of Muscle Engraftment in Small Animals by In Vivo Fluorescent Imaging

Distrofias musculares são um grupo de doenças musculares degenerativas caracterizada pela perda progressiva de células musculares contráteis. Atualmente, não há tratamento curativo disponível. Os recentes avanços na biologia das células estaminais têm gerado novas esperanças para o desenvolvimento de terapias celulares eficientes com base para tratar estas doenças. Transplante de vários tipos de células-tronco marcadas com proteínas fluorescentes em músculos de modelos animais distróficos tem sido utilizado amplamente no campo. A técnica não-invasiva com a capacidade de rastrear o destino das células transplantadas longitudinalmente pode continuar a nossa capacidade de avaliar o enxerto muscular por células transplantadas com mais precisão e eficiência. No presente estudo, demonstramos que fluorescence in vivo de imagens é um método sensível e confiável para rastreamento de GFP transplantado (Proteína Fluorescente Verde) marcado com células em músculos esqueléticos do rato. Apesar da preocupação de fundo, devido à utilização de uma luz externa necessária para a excitação da proteína fluorescente, descobrimos que usando o mouse nuas ou eliminar o cabelo com reagentes depilação muito deste problema é eliminado. Usando uma câmera CCD, o sinal fluorescente pode ser detectado no músculo tibial anterior (TA) após a injeção de 5 x 10 5 células de ambos os camundongos transgênicos ou GFP eGFP transduzidas cultura de mioblastos. Para os músculos mais superficiais, como o extensor longo dos dedos (EDL), a injeção de células menos produz um sinal detectável. Intensidade do sinal podem ser medidos e quantificados o número de fótons emitidos por segundo em uma região de interesse (ROI). Uma vez que as imagens obtidas mostram limites claros demarcar a área enxertada, o tamanho do ROI pode ser medido também. Se as pernas são posicionadas de forma consistente o tempo todo, as mudanças no número total de fótons por segundo por músculo e do tamanho do ROI refletir as mudanças no número de células enxertadas eo tamanho da área enxertada. Portanto, as alterações no músculo mesmo ao longo do tempo são quantificáveis. In vivo técnica de imagem fluorescente foi usado principalmente para controlar o crescimento de células tumorogenic, nosso estudo mostra que é uma ferramenta poderosa que nos permite acompanhar o destino de células-tronco transplantadas.

Nós descrevemos um<em&gt; In vivo</em&gt; Fluorescência imagem de protocolo para acompanhar a regeneração muscular, GFP-rotulados mioblastos após o transplante em músculos esqueléticos de ratos saudáveis ​​e distrófica. Este protocolo pode ser adaptado para estudo da regeneração muscular de transplante de outros tipos de células e em outras condições muscular também.

Rastreamento de Dinâmica de enxerto muscular em animais de pequeno In Vivo Fluorescent Imagem

As distrofias musculares são um grupo de doenças musculares degenerativas caracterizadas pela perda progressiva de células musculares contráteis. Atualmente, não existe...

Olá, sou Juwan Ma do Departamento de Anestesiologia do Bergham Women's Hospital em Boston. Hoje vamos mostrar uma técnica para obter imagens de fluorescência in vivo com o objetivo de monitorar o progresso da regeneração muscular em camundongos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar o enxerto de células-tronco musculares transplantadas.Então vamos começar. Células marcadas com GFP para transplante são isoladas e cultivadas a partir de camundongos transgênicos para GFP. Antes de prosseguir, um aperto no dedo do pé confirma que o camundongo está completamente anestesiado. Os músculos da perna traseira são então removidos. Em condições assépticas, o músculo é então macerado.As células satélites são dissociadas incubando o fragmento com uma solução de colagenase a 2% a 37 graus Celsius por uma hora. Após a incubação, adiciona-se meio de crescimento contendo Ham F10 e 20% de soro bovino fetal (FBS) para interromper a digestão enzimática. Os músculos são então dissociados por meio de pipetagem repetida com uma pipeta de Pasteur.Em seguida, as células são filtradas por um filtro celular e então semeadas em uma placa de cultura não revestida. A placa é colocada em uma incubadora padrão de cultura celular por uma hora. Para separar as células satélites de outras populações celulares com propriedades de adesão mais fortes, o sobrenadante é decantado sobre uma placa revestida com colágeno e incubado por mais uma hora.Após essa incubação, o sobrenadante enriquecido em células satélite resultante é removido novamente e aplicado a uma nova placa revestida com colágeno, sendo cultivado até que colônias de mioblastos sejam observadas. Esse processo é denominado pré-plaqueamento. As células são subcultivadas ao atingirem de 60 a 70% de confluência celular. Uma pequena proporção das células é utilizada para imunocitoquímica, com coloração por marcadores de células miogênicas, a fim de verificar a pureza das células musculares no cultivo.Uma vez confirmada a pureza das células miogênicas, as células são expandidas na mesma cultura. Condições de transplante antes do transplante celular: as células são destacadas com tripsina 0,25% N. EDTA, lavadas duas vezes e ressuspendidas em HBSS numa concentração de cinco vezes 10 elevado a sete células por mililitro; 10 microlitros da solução celular são injetados por músculo tibial anterior, ou músculo TA.Para a imagem in vivo, os mioblastos marcados com GFP são primeiramente transplantados em camundongos machos com quatro a seis semanas de idade. O camundongo é anestesiado com cetamina e xilazina, e o procedimento é iniciado após a confirmação do estado anestésico. Para reduzir o ruído de fundo, os pelos das duas patas traseiras são removidos aplicando nare nas patas e aguardando 30 segundos antes de limpá-lo.Para o aplicador com ponta de algodão, as pernas são então limpas novamente com um novo aplicador com ponta de algodão embebido em água destilada para remover restos de narina e pêlos e transplantar células para o camundongo. Primeiro, aspire cinco vezes 10 elevado a 5 células em 10 microlitros de HBSS para dentro de uma seringa Hamilton. Com uma agulha de calibre 30, injete um número igual de células em três posições ao longo do eixo longo do músculo TA, na parte superior medial e na parte inferior.Após cada injeção, mantenha a agulha por dois minutos antes de retirá-la do músculo, a fim de evitar vazamento ao longo da agulha. Durante o período de espera, aspire a mesma quantidade de células em outra seringa e injete o músculo tibial anterior contralateral da mesma maneira. Após as injeções celulares, o camundongo é imediatamente colocado em posição prona sobre uma folha de papel preto não fluorescente, com os dois pés fixados sobre o papel, voltados para baixo, e as pernas abertas em um ângulo de 90 graus. Em seguida, o camundongo é colocado na câmara de um night owl, estação de imagem de fluorescência LB 981.Equipado com uma câmera acoplada a carga altamente sensível, uma das patas traseiras é posicionada no centro do campo de visão da câmera. Primeiro, tire uma foto tradicional em escala de cinza da pata. Para iniciar a aquisição de imagens, escolha o filtro de emissão apropriado com um comprimento de onda específico para a proteína verde fluorescente.Faça uma imagem com uma exposição de 1.250 milissegundos seguida por outra com uma exposição de 500 milissegundos. Verificamos que um tempo de exposição mais longo permite a detecção de um sinal fraco, enquanto uma exposição mais curta revela mais detalhes. Após uma pata traseira ter sido imageada, posicione a outra pata traseira no centro do campo de visão da câmera e image essa pata da mesma maneira que mostrado anteriormente.Para garantir resultados comparáveis, a altura do espécime deve permanecer inalterada. Após a aquisição de imagens, o camundongo é transferido de volta para uma gaiola e sua recuperação da anestesia é monitorada. Para análise, uma região de interesse é delineada sobre os sinais fluorescentes para medir fótons por segundo.Também medimos o tamanho da região de interesse em número de pixels para obter um valor quantitativo adicional e adquirir dados longitudinais; os experimentos de imagem podem ser repetidos em diferentes dias ou semanas, conforme necessário. Nos experimentos, uma imagem fluorescente da pata traseira do camundongo obtida no dia em que as células marcadas com GFP foram injetadas mostrou alta intensidade de sinal. A intensidade do sinal então diminuiu no segundo dia e depois aumentou até um nível estável no sétimo, décimo quarto e vigésimo primeiro dias. Quando essas alterações na fluorescência foram quantificadas mediante a medição da intensidade do sinal em fótons por segundo, observamos uma diminuição acentuada na intensidade do sinal um dia após a injeção, refletindo uma redução no número de células positivas para GFP.No entanto, no sétimo, 14º e 21º dia, a intensidade do sinal aumentou até um nível estável, indicando que a regeneração muscular havia ocorrido. Acabamos de mostrar como usar a imagem de fluorescência in vivo para monitorar o progresso da regeneração muscular após a injeção de células marcadas com GFP. Utilizando este método, somos capazes de estudar a dinâmica da regeneração muscular após a injeção de todos os tipos de células marcadas com fluorescência.Como as imagens podem ser adquiridas de forma não invasiva em intervalos definidos, dados longitudinais mais precisos podem ser obtidos com menos animais e menor carga de trabalho. Ao utilizar parâmetros de medição fixos, as imagens do mesmo animal ao longo do tempo devem ser quantitativamente comparáveis. É extremamente importante manter uma superfície limpa na pele sobre o músculo para reduzir o fundo; é absolutamente essencial remover todos os pelos que cobrem as pernas e limpar a área cuidadosamente com cotonetes ou discos de algodão.E lembre-se, não se esqueça de usar o mesmo conjunto de parâmetros todas as vezes para garantir consistência entre todas as suas medições. É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este artigo descreve uma sequência otimizada de eventos para imagiologia multimodal de enxertos celulares no cérebro de roedores por meio de: (i) na bioluminescência vivo e ressonância magnética, e (ii) a análise post mortem histológica. A combinação destas modalidades de imagem em um único animal permite uma avaliação do enxerto celular com alta resolução, sensibilidade e especificidade.

Imagem Multimodal de implante de células-tronco no sistema nervoso central de camundongos

Este vídeo demonstra o protocolo para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes ortotopicamente no pâncreas do camundongo. O modelo ortotópico de camundongo ajuda a investigar a eficácia de novas terapêuticas em tumores primários e metastáticos.

Modelo de camundongo ortotópico fluorescente: implantando células cancerígenas que expressam GFP em camundongos para avaliar a progressão do tumor in vivo

Um meio não-invasivo para avaliar o sucesso do transplante de mioblastos é descrito. O método leva vantagem de um gene de fusão unificada repórter composto de genes cuja expressão pode ser trabalhada com diferentes modalidades de imagem. Aqui, fazemos uso de...

Imagem Molecular para atingir as células progenitoras transplantadas musculares

Progenitores miogênicos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC) são candidatos promissores para estratégias de terapia celular para tratar distrofias musculares. Este protocolo descreve transplantes e medidas funcionais necessárias para avaliar o enenxerto e diferenciação dos mesoangioblastos derivados do iPSC (um tipo de progenitores musculares) em modelos de camundongos de regeneração muscular aguda e crônica.

Transplante de Progenitores Miogênicos derivados de células-tronco pluripotentes induzidos em modelos de regeneração muscular

Combinatória 5 proteínas fluorescentes marcação de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas permite in vivo de rastreamento via clonal confocal e microscopia de dois fótons, fornecendo insights sobre medula óssea hematopoiética arquitetura durante a regeneração. Este método permite o mapeamento destino não-invasivo de espectro codificados células hspCs derivados em tecidos intactos por longos períodos de tempo após o transplante.

In vivo Clonal Rastreamento de Stem hematopoiéticas e células progenitoras Marcado por cinco proteínas fluorescentes usando confocal e microscopia multifotônica

Descreve-se um método relativamente simples para a imagiologia ex vivo, ao vivo das interacções de células de estroma tumoral dentro de metástase pulmonar, utilizando repórteres fluorescentes, em ratinhos. Utilizando microscopia confocal de disco rotativo, esta técnica permite a visualização de células vivas durante pelo menos 4 horas e pode ser adaptado para estudar outras condições inflamatórias do pulmão.

Ex vivo de imagens ao vivo de pulmão Metástase e seu microambiente

Microscopia de fluorescência intravital (IVFM) da calvária é aplicada em combinação com modelos de animais geneticamente para estudar o homing e enxertia das células hematopoiéticas em nichos de medula óssea (BM).

Combinando a microscopia Intravital fluorescente (IVFM) com modelos genéticos para estudar a dinâmica de enxertia das células hematopoiéticas para nichos de medula óssea

Descreveremos um protocolo para pré-clínicos em vivo rastreamento de metástases. É baseado em um repórter de radionuclídeos-fluorescência combinando o symporter de iodeto de sódio, detectado pelo não-invasiva [18F] tetrafluoroborate-animal de estimação e uma proteína fluorescente para confirmação simplificada ex vivo . O método é aplicável para pré-clínicos na vivo celular rastreamento além da biologia do tumor.

Radionuclídeo-fluorescência Gene do repórter de imagem para controlar a progressão do Tumor em modelos de roedores Tumor

Aqui usamos bioluminescentes, raio-x e positron-emissão calculado a tomografia computadorizada/tomografia computadorizada de imagem para estudar a atividade como a inibição de mTOR impactos tumores de medula óssea-incorporada do mieloma múltiplo em um modelo de transplante. Isto permite análises fisiologicamente relevantes, não-invasivo e multimodais do efeito antimieloma de terapias direcionamento incorporada a medula óssea mieloma tumores na vivo.

Imagem de tomografia computadorizada multimodal bioluminescentes e emissão positrônica Tomography/computacional de mieloma múltiplo Xenografts de medula óssea em camundongos NOG

Aqui, apresentamos um protocolo para imagens ao vivo de fluorescente etiquetadas fragmentos endometriais humanas transplantada em ratos. O método permite estudar os efeitos das drogas de escolha no tamanho da lesão endometriotic através do acompanhamento e quantificação da fluorescência emitida pelo repórter fluorescente em tempo...

Monitorização não invasiva do tamanho da lesão em um modelo de Mouse heteróloga de endometriose

Este artigo detalha como realizar a miografia de impedância elétrica in vivo (usando matrizes de eletrodos de superfície e agulha) e ex vivo (usando uma célula dielétrica) no músculo gastrocnêmio de roedores. Ele demonstrará a técnica em camundongos e ratos e detalhará as modificações disponíveis (ou seja, animais obesos, filhotes).

Realização de Miografia de Impedância Elétrica In Vivo e Ex Vivo em Roedores

Aprenda a usar imagem de fluorescência in vivo para monitorar regeneração muscular em camundongos com mioblastos marcados por GFP. Este método permite estudos longitudinais não invasivos da dinâmica de enxerto celular.

Rastreamento de Dinâmica de enxerto muscular em animais de pequeno In Vivo Fluorescent Imagem

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