Name: Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprenda a isolar e injetar Wolbachia em Drosophila usando dispositivo de filtração e microinjeção. Este protocolo simples permite estudar a transmissão bacteriana e a infecção em moscas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores não têm nada a declarar.

wolbachia em drosophila infecção bacteriana

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Meu nome é Voia Friedman. Sou pesquisadora associada na Universidade de Princeton. E hoje vou contar a vocês sobre alguns protocolos que desenvolvi para transinfectar, inicialmente para isolar, para retornar do héli de moscas infectadas e, posteriormente, ajudar a injetar o alimento contendo o héli em moscas não afetadas.Então, basicamente, este é um protocolo muito simples para isolar hemolinfa para análises básicas. Você usará este dispositivo da mepo, que contém um filtro que se coloca sobre um E. Basicamente, você precisa colocar, começando de cerca de cem moscas. Você anestesia as moscas, coloca-as no dispositivo com filtro, pode-se usar simplesmente um funil, o que facilitará muito a adição delas a este dispositivo, e depois as lava com etanol 70%.Você simplesmente retira, retira o futuro, pode descartar o etanol e, após a terceira lavagem, realiza a lavagem final com água molecular, pois não deseja que haja bactérias com traços de etanol. Bem, e então você simplesmente transfere para um novo tubo e, em seguida, centrifuga em um microcentrífugo, um micro real, por dois minutos. Depois disso, você pode injetar. Ele só alimenta moscas não afetadas.Então, basicamente, pegue uma fita adesiva dupla face; normalmente, essas fitas têm dois lados, sendo que um lado é adesivo e o outro não. Deixe o lado adesivo voltado para cima, pois é esse lado que você usará para colar as moscas em cima dela. E, basicamente, no aparato de gás, se você tiver essa luz acesa em cima, não haverá fluxo de gás, e as moscas acordarão se estiverem em cima da lâmina.Então você pode simplesmente direcionar o fluxo, criando uma pequena proteção, uma câmara com fita adesiva. Em seguida, direciona o gás sobre as moscas. Depois você coloca sua luz aqui com a fita e tem suas moscas.Cole as moscas na parte superior da fita, todas na mesma orientação, com a cabeça voltada para a direção de onde você trará a agulha. Assim, você pode passar diretamente sobre a asa e garantir que, como elas voam, não sairão voando. Se acordarem durante o procedimento, não queremos que saiam.Portanto, certifique-se de aplicar uma leve pressão com a ponta contra as asas da mosca na região da cauda. É aceitável se as asas forem danificadas. E quando você remover as moscas após a injeção, muito provavelmente elas perderão as asas de qualquer forma, mas sobreviverão.Isso pode ser útil porque você não vai perder as moscas; então ele coloca óleo mineral no micrômetro, na parte traseira da agulha, depois a injeção com a agulha polarizada, e então você pode simplesmente ajustar a pressão para trazer o material até a ponta da agulha. Eu injetei em algum lugar entre 10 e 15 nanolitros, mas, desde que eu seja consistente. Ok, então um detalhe importante nesse experimento é que a mosca, uma vez que o material está sendo injetado, quando você vê a agulha, ela precisa penetrar o máximo possível na parte superior do abdômen.Porque aqui, basicamente, quando a agulha penetra, você tem um espaço maior para movimentar para cima e para baixo. E, basicamente, se estiver mais próximo da cutícula, é menos provável que haja penetração em órgãos vitais durante o voo. É muito improvável, por exemplo, que você perfure um orifício no seu intestino, o que poderia matar o inseto durante a realização da cirurgia.Meu nome é Voia Friedman. Sou pesquisadora associada na Universidade de Princeton, no laboratório de Eric Hels. E hoje gostaria de falar com vocês sobre este protocolo que acabaram de ver, a demonstração.Este protocolo foi realizado porque queríamos comprovar que o UBA é capaz de atravessar tecidos. O UBA é um dos parasitas intracelulares mais bem-sucedidos da face da Terra, infectando de 20 a 70% dos insetos e muitas partículas.E também é muito importante em termos de doenças humanas porque infecta nematoides que transmitem doenças como a cegueira dos rios ou a filariose. Além disso, CCA é um endossimbionte obrigatório nesses vermes. E há um grande e intenso interesse no uso de CCA como meio para controlar doenças parasitárias transmitidas por mosquitos e outros vetores, como malária e dengue.Assim, este protocolo foi basicamente desenvolvido para demonstrar que, uma vez dentro da cavidade abdominal de uma mosca, as CCA podem atravessar tecidos e alcançar a linhagem germinativa. Então, basicamente, o que se pode observar aqui é o ovário de *Drosophila* e, uma vez presentes na gordura corporal, elas podem atravessar uma camada perineural rosa que envolve o ovário.Em seguida, eles atravessam uma camada muscular. Na verdade, um dos primeiros locais para onde eles entram dentro do ovário é a imagem da célula-tronco somática. Então, podem alcançar a linhagem germinativa.E esta bactéria é transmitida da mesma maneira que as mitocôndrias são transmitidas, ou seja, pela mãe, por meio dos citoplasmas presentes no óvulo. Portanto, é claro que elas precisam estar presentes na linhagem germinativa. É por isso que este protocolo foi desenvolvido.E este protocolo pode ser muito útil, pois tradicionalmente a forma pela qual as pessoas tentariam transinfectar wbaa seria basicamente pegar wbaa e introduzir uma nova espécie de inseto. Isso seria feito por meio de microinjeções no embrião. Porém, esses métodos são muito mais complicados.E basicamente aqui estamos apenas aproveitando a biologia dos o, já que eles são capazes de atravessar tecidos e migrar para os tecidos de células-tronco, podendo passar para a linhagem germinativa. Isso facilita a obtenção de UBA de certas espécies de insetos que estão infectadas, e que podem ser transmitidas a espécies não infectadas. Provavelmente, acho que é a própria injeção.Basicamente, é necessário ter cuidado para imobilizar a mosca o melhor possível. Estamos usando fita adesiva dupla face e é preciso inserir a agulha o mais próximo possível, e o mais paralelo possível à mosca, para não penetrar muito fundo. Dessa forma, é menos provável que a matemos após realizarmos a cirurgia.

wolbachia-bacterial-infection-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Parasitóide (parasita) vespas constituem uma classe importante de inimigos naturais de insetos, incluindo...

Uma Introdução à Vespas parasitas de<em&gt; Drosophila</em&gt; E Resposta Imune a antiparasitários

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al. Infecção Bacteriana Oral e Eliminação em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra a infecção oral de Drosophila melanogaster com bactérias patogênicas. Inclui a preparação de frascos de infecção e a transferência de moscas famintas para possibilitar a ingestão bacteriana. O procedimento captura a colonização intestinal, seguida pela esterilização superficial e homogeneização das moscas. Por fim, mostra a quantificação da carga bacteriana...

Infecção Oral de Drosophila melanogaster com Bactérias Patogênicas

Fonte: Hiroyasu, A., D et al., Extração de Hemocitos de Larvas de Drosophila melanogaster para Infecção e Análise Microbiana. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra o procedimento para estabelecer uma infecção bacteriana em larvas de Drosophila , colocando-as em uma gota bacteriana e furando-as com uma agulha de tungstênio. As larvas são então incubadas em uma placa de ágar sulcada e rica em nutrientes para estudar as interações hospedeiro-patógeno.

Estabelecimento de infecção bacteriana em larvas de Drosophila

Drosophila melanogaster é um excelente organismo modelo para estudar o sistema imunológico inato e as consequências fisiológicas de infecções e doenças. Este protocolo descreve como fornecer infecções bacterianas robustas e quantitativamente repetíveis a D. melanogaster e como medir subsequentemente a gravidade da infecção e quantificar a resposta imune do hospedeiro.

Infecção bacteriana sistêmica e Imune Defesa Phenotypes em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Um método para a criação de Drosophila melanogaster sob condições axénicas e gnotobióticos é apresentada. embriões voam são dechorionated em hipoclorito de sódio, transferidos assepticamente à dieta estéril, e criados em recipientes fechados. Inoculando dieta e embriões com bactérias leva a associações gnotobióticos e presença de bactérias é confirmada por plaqueamento de corpo inteiro de Drosophila homogeneizados.

Elevando a mosca da fruta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sob axênicas e gnotobióticos Condições

Os mosquitos Aedes aegypti infectados com Wolbachia estão sendo liberados em populações naturais para suprimir a transmissão de arbovírus. Descrevemos métodos para traseira Ae. aegypti com Wolbachia infecções no laboratório para experiências e lançamento de campo, tomando as precauções para minimizar a seleção e adaptação de laboratório.

Manter o Aedes aegypti , mosquitos infectados com Wolbachia

Este protocolo descreve métodos para oralmente expor e infectar a mosca de fruta Drosophila melanogaster com patógenos bacterianos e para medir o número de bactérias infecciosas galpão após infecção do intestino. Ainda mais, descrevemos o efeito de mutantes imunes na mosca sobrevivência após infecção bacteriana oral.

Infecção bacteriana e oral Shedding em Drosophila melanogaster.

Este protocolo descreve como estabelecer infecção viral na vivo em Drosophila melanogaster , usando o método de nano-injeção e técnicas básicas para analisar a interação vírus-hospedeiro.

Estabelecimento de infecção Viral e análise da interação vírus-hospedeiro em Drosophila Melanogaster.

As moscas adultas de Drosophila melanogaster têm sido amplamente utilizadas como organismos modelo para investigar os mecanismos moleculares subjacentes às respostas imunes inatas antimicrobianas e estratégias de infecção microbiana. Para promover o estágio da larva D. melanogaster como um sistema modelo adicional ou alternativo, uma técnica de injeção larval é descrita.

Melanogaster drosophila Protocolo de injeção de larvas

Quatro métodos foram usados para detectar wolbachia intracelular, que se complementou e melhorou a precisão de detecção da infecção wolbachia da Aa23 e Aa23-T derivadas de Aa23 e Aa23-T curadas da infecção nativa wolbachia usando antibióticos.

Detectando wolbachia strain wAlbb em linhas celulares Aedes albopictus

As linhagens celulares são úteis em estudos sobre organismos intracelulares que não podem ser cultivados fora de suas células hospedeiras. Embora as linhagens infectadas com Wolbachia tenham permitido muitas descobertas, a heterogeneidade dentro dessas linhagens pode levar a resultados experimentais variáveis. Apresentamos um protocolo para geração de clones unicelulares e culturas contínuas a partir de células JW18 infectadas com Wolbachia.

Geração de Culturas Monoclonais a partir de Wolbachia-infectada com Drosophila melanogaster JW18

Aprenda a isolar e injetar Wolbachia em Drosophila usando dispositivo de filtração e microinjeção. Este protocolo simples permite estudar a transmissão bacteriana e a infecção em moscas.

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Explorar mais vídeos