Name: Dissecção de 6,5 embriões de camundongos dpc (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Aprenda a dissecar embriões de camundongos de 6,5 dpc para estudar padrões de genes e decisões de linhagem celular. Este método sistemático facilita pesquisas em biologia do desenvolvimento.

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Dissecação de órgãos reprodutivos de uma fêmea <ol><li> As fêmeas grávidas são sacrificados por asfixia CO 2, utilizando gás comprimido. </li><li> Coloque o animal em decúbito dorsal almofada absorvente e mergulhe-o em etanol 70% para reduzir o risco de contaminação a dissecção com cabelo mouse. </li><li> Aperte a pele e fazer uma pequena incisão lateral na linha média com tesouras cirúrgicas regulares. Segure a pele firmemente acima e abaixo da incisão e puxar a pele para além em direção à cabeça e cauda para expor o abdômen. </li><li> Segure o peritônio com uma pinça e corte para expor a cavidade abdominal. </li><li> Localize os órgãos reprodutivos na região dorsal da cavidade do corpo: dois cornos uterinos, o oviduto e os ovários. </li></ol> Primitive Streak estágio Dissection (6,5 dpc) <ol><li> Remover o corno uterino, segurando o útero abaixo do oviduto e cortá-la livre ao longo da mesométrio. Lugar útero dissecado em PBS gelado. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Figura 1" width="263" height="132"> Figura 1 </li><li> Separe cada embrião cortando entre locais de implantação ao longo corno uterino. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Figura 2" width="575" height="171"> Figura 2 </li><li> Segure o revestimento muscular uterina, deslizando forceps relojoeiro entre a camada muscular circunvizinho e do tecido envolvido decídua. Retire a camada muscular, expondo a decídua. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Figura 3" width="593" height="166"> Figura 3 </li><li> Clipe de fora de uma parcela da decídua expostas no ápice (aproximadamente 1 / 5 do tecido decídua), que irá expor a ponta midventral ou distal do embrião fechado. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Figura 4" width="589" height="212"> Figura 4 </li><li> O embrião pode ser descascado, utilizando as pontas de uma pinça. Pierce a decídua com uma pinça em torno do embrião e uma pinça aberta a lágrima decidua distante. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Figura 5" width="249" height="200"> Figura 5 </li><li> Uma vez que embrião é removido, a membrana Reichart ainda pode ser anexado, bem como o cone ectoplacental (trofoblasto). O embrião pode ser dissecada ainda por dissecção cuidadosa. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Figura 6" width="356" height="222"> Figura 6 </li></ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

Pós-implantação em ratos ocorre entre 4,5 dpc e nascimento. Este método de dissecação pode ser aplicada, essencialmente como descrito, para isolar mais cedo ou mais tarde embriões em estágio 5,5-8,5 dpc.

<table><tbody><tr><td>Pinça microcirúrgica serrilhada, reta</td><td>Ferramenta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 pares</td></tr><tr><td>Pinças microcirúrgicas padrão #55 INOX</td><td>Ferramenta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 pares</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s (1x)</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri estéril de poliestireno Fisherbrand</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído a 4% em PBS</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica reta com ponta afiada</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Camundongas fêmeas grávidas</td><td>Animal</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio cirúrgico</td><td>Microscópio</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissecção de 6,5 embriões de camundongos dpc

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Análise dos padrões de expressão genética durante as fases iniciais do desenvolvimento embrionário de mamíferos pode fornecer pistas importantes sobre a interação gene função, célula-célula e mecanismos de sinalização que patterning guia embrionárias. No entanto, a dissecção do embrião de rato a partir da decídua, pouco após o implante pode ser um processo desafiador, e documentação passo-a-passo detalhado desse processo é inexistente. Aqui demonstramos como pós-implantação (6,5 dpc) embriões são isolados pela primeira dissecando o útero de um rato grávidas (detecção do plug vaginal foi designado coitum poist dias 0,5) e, posteriormente, dissecando o embrião da decídua materna. A dissecção da membrana Reichert é descrito, bem como a remoção do cone ectoplacental.

Isolamento de pós-implantação de embriões em estágio permite uma padronização para estudar e analisar genes de células de linhagem processos de decisão durante o desenvolvimento embrionário, mas dissecção adequada do embrião em estágio inicial pode ser um desafio. Este protocolo descreve um método para isolar muito primitiva raia-estágio-embriões (~ 6,5 dias pós coitum [dpc]).

Dissecção de 6,5 embriões de camundongos dpc

A análise dos padrões de expressão gênica durante os estágios iniciais do desenvolvimento embrionário de mamíferos pode fornecer pistas importantes sobre a função gênica, a interação célula-célula...

Meu nome é Kelly Shea e sou gerente do laboratório e também técnica de pesquisa no Laboratório Neilsen, o que é difícil porque muitas pessoas não sabem como distinguir as diferentes camadas teciduais. Então, o que você precisa fazer é essencialmente afastar todas as camadas teciduais para expor o embrião subjacente, que, neste momento, não é muito vascularizado. Por isso, é muito transparente e difícil de distinguir.Use pin&ccedil;as e tesouras bastante grossas. A primeira coisa que voc&ecirc; deve fazer &eacute; pin&ccedil;ar o animal ao redor da linha m&eacute;dia e fazer um primeiro corte. A partir desse ponto, basta puxar a pele para os lados, expondo o abd&ocirc;men do animal.Há uma fina camada do peritônio que você vai levantar com a pinça e, em seguida, cortar com a tesoura e afastar para trás. Você deve cortar ao longo da linha média do animal e separar os dois cornos uterinos, que estão conectados no centro. Pode-se cortar diretamente na base.Você provavelmente obterá muita gordura junto com ele. E retire todo o corneto uterino do animal. Coloque-o diretamente no PBS.Então, isso está no chifre. Estes são os locais de implantação, 1, 2, 3, 4, 5. O que você deve fazer é apenas separá-los.Você pode basicamente cort

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Biologia

A capacidade de células germinais embrionárias de se diferenciarem em células germinativas primordiais durante estágios iniciais de desenvolvimento é um modelo perfeito para abordar nossa hipótese sobre o câncer e infertilidade. Este protocolo mostra como isolar células germinativas primordiais das gônadas em desenvolvimento 10,5-11,5 dias após a embriões de camundongos coitum.

Isolamento e derivação de células embrionárias de rato Germinal

As projeções estereotipadas de aferentes sensoriais para a medula espinhal de roedores oferecem um sistema de fácil acesso experimental para o estudo de ramificação axonal através do rastreamento de axônios individuais.

DII-rotulagem de neurônios DRG para estudar em uma ramificação axonal Preparação Monte Whole of Mouse Embryonic Spinal Cord

Um protocolo para a separação da ectoderme embrionária facial e mesênquima é descrito. Usamos Dispase II para tratar embriões inteiros primeiro, dissecar todo proeminências faciais, e então separar o ectoderma facial e mesênquima.

Separação de Ectoderma embrionárias de camundongos Facial e mesênquima

Culturas neuronais embrionárias primárias dissociadas do hipocampo são úteis para investigar os mecanismos de sinalização envolvidos na morte dos neurônios. A sexagem dos embriões antes do isolamento e dissociação do hipocampo permite a preparação de culturas masculinas e femininas separadas, o que permite ao pesquisador identificar e investigar a sinalização celular específica do sexo.

Culturas neuronais estratificadas por sexo para estudar vias de morte celular isquêmica

O nó e placa notochordal são transitórios de organizadores no desenvolvimento de embriões de rato que podem ser visualizados usando várias técnicas de sinalização. Aqui, descrevemos em detalhes como realizar duas das técnicas para estudar sua estrutura e morfogênese: 1) microscopia eletrônica (SEM); e 2) monte todo imunofluorescência (WMIF).

Visualizando o nó e placa Notochordal em Gastrulating embriões de rato usando microscopia eletrônica e imunofluorescência de montagem inteira

Apresentamos os protocolos para examinar o desenvolvimento de coração de rato usando microscopia epifluorescente de montagem toda em embriões de rato dissecados de ventricular específica MLC-2v-tdTomato repórter bater-em ratos. Este método nos permite visualizar diretamente a cada estágio da formação ventricular durante o desenvolvimento de coração de rato sem métodos histoquímicos trabalho intensivos.

Análise do desenvolvimento de câmara cardíaca durante a embriogênese de rato usando toda montagem de epifluorescência

Aqui, fornecemos um protocolo de dissecção necessário para a imagem viva da gônada masculina Drosophila . Este protocolo permitirá a observação de processos celulares dinâmicos em condições normais ou após manipulação transgênica ou farmacológica.

Dissecção e Live-Imaging do Drosophila Gonad embrionário tardio

Aqui, descrevemos ferramentas e métodos computacionais que permitem a visualização e análise de dados de imagem tridimensionais e quadridimensionais de embriões de camundongos no contexto de alongamento axial e segmentação, obtidos pela tomografia de projeção óptica toto, e por imagens vivas e coloração de imunofluorescência de montagem total usando microscopia multifoton.

Abordagens de visualização e análise tridimensional para estudar alongamento axial de vertebrados e segmentação

Classicamente, o endocárdio do primordium da válvula embrionária de camundongo foi analisado usando cortes transversais, coronais ou sagitais. Nossa nova abordagem para imagens bidimensionais en face do endocárdio em regiões valvulogênicas permite a polaridade planar e a análise de rearranjo celular do endocárdio durante o desenvolvimento valvar.

En Face Preparação de Almofadas Endocárdicas para Análise de Morfogênese Planar em Embriões de Camundongos

Este artigo estabelece um pipeline para suspensões de células e núcleos únicos de alta qualidade de embriões de camundongos gastrulados para sequenciamento de células e núcleos únicos.

Sequenciamento de RNA de célula única de embriões de camundongos inteiros mutantes: do epiblasto ao fim da gastrulação

Aprenda a dissecar embriões de camundongos de 6,5 dpc para estudar padrões de genes e decisões de linhagem celular. Este método sistemático facilita pesquisas em biologia do desenvolvimento.

Dissecção de 6,5 embriões de camundongos dpc

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