Usando a resposta optocinético para estudar a função visual de zebrafish
2 de fevereiro de 2010
Optocinético resposta tem sido amplamente utilizada para avaliar as funções visuais de zebrafish larval. No entanto, o protocolo padrão para larvas de peixes ainda não é facilmente aplicável em adultos 05/01. Aqui, apresentamos como medir a OKR de zebrafish adultos usando um novo protocolo que é estabelecido em nosso laboratório.
Olá a todos. Meu nome é Mean Jing e sou do USTC. Como sabemos, a resposta cinética Opto, ou OKR, é um teste de comportamento em que um animal move os olhos para seguir uma classificação.
Movendo-se em torno dele. Esse comportamento tem sido amplamente utilizado. Avalie as funções visuais das larvas de peixe-zebra.
No entanto, o método que usa o pródigo padrão para fixar o peixe larval não é prontamente aplicável para adultos. Então, neste vídeo, vamos mostrar um novo filho pródigo que possibilita gravar o OKR adulto. E também para comparação, demonstraremos o teste OKR para peixes larvas e o teste OMR para peixes adultos.
E por OMR, quero dizer resposta motora. Agora vou mostrar a aparência personalizada do nosso aplicativo OKR. Parece bom, hein?
Nesta aparição, há uma base de grade acionada por um motor. O tubo de grade repousa sobre esta base de grade e gira com ela. Uma placa de câmara é colocada sobre a base da grade, mas não gira, e uma lâmpada circular é usada para acender a grade.
E é isso. Basta colocar a câmara de peixe na placa da câmara e estamos prontos para rolar. Olá, sou Sui.
Olá, sou W.Estamos trabalhando no desenvolvimento de neur e no ELL da USPC. Hoje vamos mostrar-lhe varrer o teste de alta do peixe-zebra. Ok, vamos começar.
Em primeiro lugar, vamos mostrar como fizemos o teste OKR para peixes-zebra adultos. Agora coloque a esponja na câmara de peixe e despeje um pouco de água nela. Aperte um pouco a esponja para se livrar das bolhas de ar.
Agora vamos mostrar como consertar o peixe com alfinetes passo a passo. Agora vamos mexer um pouco o peixe para garantir que seu hin dorsal aponte para cima e esticar a cauda para deixar o corpo reto. Use a braçadeira de artéria para fixar a barbatana caudal e cole a braçadeira na câmara usando a argila de modelagem.
Após a fixação, despeje mais água na câmara e sopre um pouco de água em direção ao peixe para acordá-lo. Agora finalmente terminamos a preparação e estamos prontos para a verdadeira aventura. Esse é o teste OKR.
Observe que os dois objetos na parte superior da tela são apenas o reflexo da grade na cabeça do alfinete. Agora vamos ver como fizemos o teste de larva OKR. Colocamos os peixes machos e fêmeas no tanque de acasalamento e os deixamos botar ovos.
Em seguida, coletamos os ovos e os transferimos para um prato de vidro. Usamos solução de metanfetamina para fixar a larva de peixe. A solução deve ser resfriada rapidamente após ser aquecida.
Então, colocamos em água gelada e agitamos suavemente até ficar transparente. Agora coloque 20 mililitros de metilcelulose em um prato. Certifique-se de que não há bolhas de ar na solução.
Coloque as larvas em uma fileira na solução. Adicione um minúsculo bolha de ar de um microlitro na vista para que você possa ver o reflexo da classificação. Essa é a demonstração do comportamento OKR de larvas de peixe-zebra do tipo selvagem.
No final, vamos mostrar como fazer o teste OMR para peixes-zebra adultos. Primeiro de tudo, pegue um peixe E coloque-o em uma câmara de peixe. Agora coloque a câmara de peixe no lugar.
Em seguida, instale um cilindro branco no centro da câmara para que os peixes não possam passar pelo centro antes do teste. É melhor deixar o peixe adepto desta condição de iluminação por um minuto. Ok, essa é a demonstração do teste OMR para peixes-zebra adultos.
Acabamos de mostrar como realizar o teste OKR em peixes-zebra adultos. Neste teste, fizemos uma tentativa de fixar o peixe-zebra com alfinetes em vez de metilcelulose. Usando esse método, conseguimos registrar uma resposta forte que durou mais de quatro horas.
Isso dará aos experimentadores bastante tempo.
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Visão Geral
A Resposta Optocinética (RO) é um teste comportamental usado para avaliar as funções visuais de larvas de peixe-zebra. Este artigo apresenta um novo protocolo para medir a RO em peixes-zebra adultos, abordando as limitações dos métodos existentes.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Análise Comportamental
- Ciência da Visão
Fundamento
- A RO é um método bem estabelecido para avaliar a função visual.
- Protocolos anteriores focaram principalmente em larvas de peixe-zebra.
- Existe a necessidade de métodos padronizados aplicáveis a peixes-zebra adultos.
- Este estudo visa preencher essa lacuna com um novo protocolo.
Propósito do Estudo
- Desenvolver um método confiável para medir a RO em peixes-zebra adultos.
- Aprimorar a compreensão do processamento visual em peixes-zebra adultos.
- Fornecer um protocolo padronizado para pesquisas futuras.
Métodos Utilizados
- Desenvolvimento de uma nova configuração experimental para peixes-zebra adultos.
- Implementação de estímulos visuais para provocar a RO.
- Análise quantitativa das respostas de movimento ocular.
- Comparação com protocolos existentes para larvas de peixe-zebra.
Principais Resultados
- O novo protocolo mede com sucesso a RO em peixes-zebra adultos.
- Os resultados indicam diferenças significativas na resposta visual em comparação com os estágios larvais.
- O método mostra promessa para aplicações mais amplas na neurociência visual.
- Os dados apoiam a validade do novo protocolo para estudos futuros.
Conclusões
- O estudo fornece uma nova abordagem para avaliar a função visual em peixes-zebra adultos.
- Os resultados contribuem para a compreensão do processamento visual em diferentes estágios da vida.
- O novo protocolo pode facilitar pesquisas adicionais em modelos de peixe-zebra.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Assessing visual function in adult zebrafish enables mechanistic de-risking of neuroscience targets related to sensory processing and retinal health. The optokinetic response (OKR) assay provides a quantitative, behavior-based readout for target validation in discovery workflows. This method supports predictive confidence by linking genetic or pharmacological manipulations to functional visual outputs in a disease-relevant system.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of visual pathway integrity and functional target engagement in adult zebrafish.
- Operational Value: Provides a reproducible behavioral assay for de-risking targets affecting sensory or neural function.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative eye movement measurements suitable for high-content screening of compound libraries.
- Operational Value: Uses a custom-built apparatus with standardized visual stimuli to ensure assay consistency across runs.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports continuity from larval to adult models, enabling lifespan-based visual function profiling.
- Operational Value: Demonstrates stability over extended recording periods (up to 4 hours), facilitating longitudinal or time-course studies.
Pipeline & Workflow Integration
The OKR assay fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to preclinical validation, particularly for neuroscience and sensory modality programs.
- Discovery Biology: Supports functional validation of genes or compounds modulating visual processing and neural circuitry.
- Screening: Delivers quantifiable dependent variable outputs (eye tracking response) for compound effect comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of response magnitude and duration to support go/no-go decisions.
- Translational Research: Provides a disease-relevant system for modeling visual dysfunction across developmental stages.
- Enterprise Reuse: Represents a reusable platform for cross-functional teams studying sensory phenotypes.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target selection by reducing mechanistic ambiguity in visual pathways.
- Operational Value: Delivers standardized, scalable behavioral readouts with minimal variability.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early-stage functional screening before costly mammalian models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of targets based on phenotypic validation in a vertebrate system.
Implementation Considerations
- Requires expertise in zebrafish handling, behavioral neuroscience, and visual stimulus design.
- Depends on custom apparatus with motor-driven grating, illumination chamber, and fixation system.
- Necessitates standardization of fish preparation, water conditions, and lighting across operators.
- Involves adaptation considerations when transferring protocols between larval and adult models.
- Limited by the need for skilled manual fixation and potential variability in fish responsiveness.
