Name: Fabricação de eletrodos e Implantação de Aplysia californica Para gravações multi-canal neural e muscular na Intact, Animais Livremente Behaving (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Aprenda a fabricar e implantar eletrodos multicanais para gravações neurais e musculares em Aplysia californica. Este método permite estudar o controle neuromuscular do comportamento alimentar em animais livres.

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Agradecemos o apoio do NIH (NS047073 para HJC). Nós também somos gratos a Catherine Kehl para ela primeiras experiências com o Kwik-Sil, que nos incentivou a usá-lo para a nossa aplicação.

1. Fabricação de eletrodos <ol><li> Para criar o eletrodo, use a tesoura para cortar um pedaço do esmalte revestido polegadas de diâmetro do fio de aço inoxidável 0,001 a cerca de 2 metros de comprimento. Anexar uma pequena bola de massa em cada extremidade do fio, dobre o fio ao meio, e gire as pontas para criar um par trançado, chamado eletrodo diferencial. </li><li> Fita ambas as extremidades do fio para evitar o desfiamento. Fazer quatro eletrodos diferenciais, usando uma cor diferente da fita para cada eletrodo diferencial para fins de identificação (Figura 1A). </li><li> Torção dois dos eletrodos diferenciais juntos, deixando duas polegadas sem torção em uma extremidade e uma polegada na outra extremidade. Repita com o restante par de eletrodos diferenciais (Figura 1B). </li><li> Torça os dois conjuntos de dois eletrodos diferenciais juntos, certificando-se que as extremidades permanecem sem torção. Segurar o conjunto de eletrodos e aplicar cola de silicone casa na junção de quatro eletrodos diferenciais, deixando as extremidades livres. Pendurar e permitir que a cola secar por pelo menos 4 horas (Figura 1C). </li><li> Para isolar os ramos, coloque o conjunto de eletrodos para baixo em uma superfície plana, como móveis um pedaço de madeira. Espalham as pontas e prenda-os com fita adesiva. Use um pequeno pedaço de plástico para elevar o conjunto de eletrodos pouco antes de ramos, e seguro que, com fita. </li><li> Em um microscópio de dissecação, utilize uma pinça para revestir os ramos com cola silicone. Os fins de 1 polegada tempo vai estar dentro do animal, para que eles devem ter uma camada muito fina de cola. Permitir que a cola secar por pelo menos 3 horas. </li><li> Encurtar o fim de 1 centímetro de comprimento de um eletrodo diferencial a dois centímetros. Em cada fio, retire um centímetro de silicone e esmalte. Enrolar um fio desencapado em um gancho para a gravação. Dobre o outro fio para cima e longe do gancho, o que servirá de fio terra. Repita o procedimento para os restantes três eletrodos. </li><li> Selecionar um dos quatro eletrodos na extremidade de 2 polegadas. Use uma pinça para raspar silicone e esmalte, expondo uma centímetros de fio de aço inoxidável nua em cada um dos dois fios. Conector de solda de ouro a cada um dos dois fios. Use um pedaço de fita de laboratório para garantir o fim e manter uma separação entre o solo e os pinos de gravação. Repita o procedimento para os restantes três eletrodos. </li><li> Anexar uma bola de 1-2cm da cola de silicone para o cabo, cerca de 1,5 cm da extremidade do gancho para ancorar os eletrodos dentro do animal. Deixe secar por pelo menos uma hora (Figura 1D). <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Fabricação Assembléia Electrode. (A) eletrodo único diferencial consiste de um fio dobrado e torcido, com suas extremidades presa com fita adesiva. (B) Dois eletrodos diferenciais torcidos juntos, deixando espaço sem torção nas extremidades. Fita de cor diferente ou outra marcação deve ser usado para identificar as extremidades. (C) Todos os eletrodos diferenciais quatro combinados em um único conjunto de eletrodos formando um único cabo, com filiais em separado dos eletrodos individuais em cada extremidade, marcados com cores distintas da fita. (D) a forma final da montagem do eletrodo. À esquerda, há enrolado ganchos para gravações e fios de aterramento para cada eletrodo diferencial. À direita, pinos de ouro foram soldados aos fios para conexão com o amplificador. Uma bola de ancoragem de cola de silicone também foi colocado para o lado esquerdo da assembléia. </li></ol> 2. Preparação de animais para Implantação <ol><li> Selecione um animal saudável, que pesa cerca de 350-450g. Em resposta a pequenos pedaços de algas, o animal deve gerar mordidas em intervalos de 3 a 5 segundos. A cirurgia completa com implante de eletrodos deve levar cerca de uma hora. </li><li> Para anestesiar o animal, injetá-lo com 30% w / v isotônica MgCl 2. Para evitar a perda de hemolinfa e MgCl 2, o local da injeção podem ser revestidos em superglue antes de remover a agulha. <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Diagrama esquemático mostrando como o animal é fixado para a implantação de eletrodos, ea localização da incisão (indicado por um bar). </li><li> Coloque o animal anestesiado em uma bandeja de dissecação com o seu pé para baixo. De frente para a cabeça de animal em diante, deslocar a área de emalhar para o tal esquerda que o animal é parcialmente de lado, se inclinando para longe. Pino para baixo os tentáculos anterior (Figura 2). </li><li> Coloque a bandeja sobre o estágio de um microscópio de dissecação. Escorar a bandeja em um ângulo de 20 graus para elevar a cabeça e recolher o hemolinfa na cauda, ​​longe da incisão. </li><li> Com uma tesoura de dissecção, iniciar uma incisão ligeiramente para a direita do eyespot e estendê-lo 1 a 1,5 cm anteriormente. Use retratores anexado às bordas da bandeja para manter a incisão aberta (Figura 2; bar nota perto incisão eyespot indicando). </li><li> Para expor a massa bucal, utilize uma pinça para levantar a membrana transparente por baixoa pele e use a tesoura para cortar uma abertura correspondente a incisão principal. Tuck as bordas da membrana para os afastadores. </li></ol> 3. Implantação de eléctrodos <ol><li> Coloque o conjunto do eletrodo em um micromanipulador e movê-lo ao longo da incisão do animal. </li><li> O nervo radular é mais difícil acesso, e devem ser abordados em primeiro lugar. Existem duas opções para acessar o nervo radular. </li><li> A primeira opção, que é preferível, é olhar sob o gânglio bucal entre BN1 e BN2. Se um ramo do nervo radular é visível, use uma pinça de ponta fina dobrado em um gancho para levantar o ramo (Figura 3, alça de RN sob gânglio rotulados 1). </li><li> Se um ramo do nervo radular não é acessível acima do músculo, a segunda opção é para acessá-lo através de uma pequena incisão na I2 ao lado do tecido conjuntivo na base do gânglio vestibular (Figura 3, RN abaixo do músculo rotulados 2). A incisão na I2 deve passar por duas camadas de músculo I2. Segure a borda da incisão do músculo com uma pinça em linha reta e use a pinça para retirar enganchado um ramo RN. </li><li> Enquanto mantém o nervo com a pinça viciado, use um conjunto diferente de uma pinça para manipular o gancho eletrodo para o nervo. </li><li> Use o micromanipulador para levantar o gancho para que o nervo é levantado fora da massa bucal e desembaraçadas de quaisquer outros nervos ou tecido. Evite esticar o nervo. </li><li> Seque o eletrodo usando um Kim-Wipe ou sucção fora o excesso de líquido com uma seringa. Tensão de água pode causar a coragem de colapso sobre si mesmo, ou um selo de água para formar com o nervo. Em ambos os casos, a área deve ser completamente seca antes de cola é aplicada. </li><li> Aplique uma pequena bagatela de super cola onde a base do gancho entra em contato com a parte inferior do nervo. Aplique uma gota de solução salina ou Aplysia hemolinfa para definir a supercola. Quando a cola não é nada molhado deve ser movida como a obtenção de cola entre o fio eo nervo bloquearia a conexão elétrica. </li><li> Seque o gancho novamente. Mix cola Kwik-Sil em um bloco de gelo. </li><li> Use a ponta de um alfinete para aplicar uma pequena quantidade da cola Kwik-Sil, cobrindo completamente qualquer fio exposta do gancho, mas não o fio terra. </li><li> Permitir a cola para definir por aproximadamente 5 minutos, reajustando a cola se afasta das seções do gancho. A cola é definida quando ele adere já não quando tocado com o pino (Figura 4 mostra a configuração final). </li><li> Uma vez que o eletrodo nervo radular está definido, o músculo I2 pode ser acessado. Na área entre BN1 e BN2, use a pinça agarrado ao anzol e para separar duas bandas do músculo I2 do resto do músculo puxando para cima as bandas. Anexar o eletrodo usando o mesmo procedimento. </li><li> Nervos bucal 2 e 3 são facilmente acessados ​​e os eletrodos são fixados com o mesmo procedimento. </li><li> Uma vez que todos os eletrodos são conectados, deslize o conjunto de eletrodos dentro do animal até a âncora silicone. </li><li> Suturar a incisão fechada em torno do cabo eletrodo salientes, mantendo a âncora dentro do animal. Supercola os pontos para garantir uma boa vedação. </li><li> Insira as pontas de conector de ouro na outra extremidade do eletrodo em um pequeno bloco de isopor. Devolver o animal para o tanque principal em um recipiente de isolamento aerado para pernoite de recuperação. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Um diagrama do aparelho de alimentação Aplysia conhecida como a massa bucal. Mostrados são os nervos bucal (BN1, BN2, BN3), o nervo radular (RN), que sai do fundo do gânglio vestibular, então mergulha abaixo do músculo, ea localização sobre o músculo I2 onde o eletrodo está conectado. <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Esquema do eletrodo único anexado a um nervo (ou músculo) e colado no lugar. Note-se que a região de isolamento do gancho ondulado está em contato direto com o nervo (ou músculo), ancorado no lugar com supercola, e eletricamente isolados do meio fluido usando Kwik-Sil. Note também que a ponta do eletrodo deinsulated solo é exposto ao meio fluido. 4. Gravação <ol><li> Aclimatar o animal em um recipiente arejado quando estiver ligado ao equipamento de gravação de pelo menos 1,5 horas. Monitorar o sinal enquanto o animal está se aclimatando para verificar se todos os eletrodos estão funcionando e que os níveis de ruído são baixos. </li><li> Use uma câmera de vídeo para registrar o comportamento alimentar durante o uso do computador para gravar sinais dos eletrodos neural e muscular. Sincronizar o vídeo e as gravações do eletrodo usando um sinal de onda quadrada que controla um contador digital na visualização da câmera enquanto é simultaneamente registrada como um canal adicional no computador Axoscope. </li><li> Alimentação comportamentos são extraídas pelas técnicas dedescrito na Morton e Chiel 1993. </li></ol> Embora os animais invertebrados não exigem aprovação formal por um uso de animais institucional e da comissão de cuidados, temos assegurado que todos os tratamentos de Aplysia minimizar os danos e sofrimento para o animal, e que todas as técnicas cirúrgicas são feitas enquanto o animal está totalmente anestesiado. Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1791/1791fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. (A) de quatro canais simultâneos gravações de um músculo (o músculo transferidor I2), e de três nervos bucal (o nervo radular, RN, bucal do nervo 2, BN2 e nervo bucal 3, BN3) durante uma resposta de deglutição. (B) Um quadro ainda da gravação de vídeo simultâneas do animal livremente se comportando como se engole uma tira de alga precut (0,5 cm de largura), que foi marcado em intervalos de 0,5 cm, com faixas brancas para que seus movimentos podem ser facilmente visualizados como o animal se alimenta.

<ol><li>Lu, H., Chestek, C. A., Shaw, K. M., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+extracellular+stimulation+of+individual+neurons+in+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective extracellular stimulation of individual neurons in ganglia.</a> J. Neural Eng. 5, 287-309 (2008).</li>
<li>Morton, D. W., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+buccal+nerve+activity+that+distinguishes+ingestion+from+rejection+can+be+used+to+predict+behavioral+transitions+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">In vivo buccal nerve activity that distinguishes ingestion from rejection can be used to predict behavioral transitions in Aplysia.</a> J Comp. Physiol. A. 172, 17-32 (1993).</li>
<li>Warman, E. N., Chiel, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+for+chronic+single+extracellular+recording+in+freely+behaving+animals+using+pipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A new technique for chronic single extracellular recording in freely behaving animals using pipette electrodes.</a> J. Neurosci. Methods. 57, 161-169 (1995).</li>
<li>Ye, H., Morton, D. W., Chiel, H. J., J, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((nbsp%3BNeuromechanics+of+multifunctionality+during+rejection+in+Aplysia+californica%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">nbsp;Neuromechanics of multifunctionality during rejection in Aplysia californica.</a> J. Neurosci. 26, 10743-10755 (2006).</li>
</ol>

A principal inovação que fez estas gravações de sucesso é a combinação dos eletrodos em um único cabo. Duas gravações eletrodo tem sido utilizado antes, mas expandindo para quatro eletrodos individuais resultou na formação de aderências cirúrgicas, que muitas vezes impediu o animal de fazer movimentos de alimentação normal. Combinando os eletrodos em um cabo reduz a maior parte dos eletrodos dentro do animal, que por sua vez reduz a resposta imune e permite que o animal se mover mais livremente. <p class="jove_conte...

<table><tbody><tr><td>Fio de aço inoxidável com revestimento de esmalte</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>0.001D, revestimento h</td></tr><tr><td>Cola de silicone doméstica II</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adesivo Kwik-Sil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Supercola Duro Qwik-Gel</td><td>Henkel Corp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplificador modelo A-M Systems 1700</td><td>A-M Systems</td><td></td><td>Configurações do filtro: 100-1000 Hz para nervos, 10-1000 Hz para músculo I2</td></tr><tr><td>Axoscope 10.1</td><td>Molecular Devices</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinos conectores dourados</td><td>Bulgin</td><td>SA3148/1</td><td></td></tr><tr><td>Soquetes conectores dourados</td><td>Bulgin</td><td>SA3149/1</td><td></td></tr></tbody></table>

fabricação de eletrodos e implantação de aplysia californica para gravações multi-canal neural e muscular na intact, animais livremente behaving

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Gravar a partir de nervos e músculos da chave<em&gt; Aplysia</em&gt; Durante o comportamento alimentar nos permite estudar os padrões de controle neural em um animal intacto. Registra, simultaneamente, múltiplos nervos e músculos nos dá informações precisas sobre o momento da atividade neural. Métodos de gravação anterior ter trabalhado por dois eletrodos, mas o estudo de nervos ou músculos adicionais necessários combinando e média das gravações de vários animais, o que tornava difícil determinar detalhes de tempo e eliminação, devido à variabilidade da resposta à resposta e, a partir animal para animal. Implantação de quatro eletrodos indivíduo tem uma taxa de sucesso muito baixa, devido à formação de aderências que impeçam os animais de executar movimentos de alimentação normal. Nós desenvolvemos um novo método de fabricação de eletrodos, que reduz o volume dos eletrodos dentro do animal permitindo movimentos alimentação normal. Usando uma combinação de colas para fixar os resultados eletrodos em um isolamento mais confiável do eletrodo, que dura mais tempo, tornando possível recorde para períodos de até uma semana. A técnica de fabricação que descrevemos poderia ser ampliado para incorporar vários eletrodos adicionais, e seria aplicável a animais vertebrados.

A técnica é descrita para a implantação de quatro<em&gt; In vivo</em&gt; Eletrodos para monitorar o controle neuromuscular do comportamento alimentar em<em&gt; Aplysia californica</em&gt;.

Fabricação de eletrodos e Implantação de Aplysia californica Para gravações multi-canal neural e muscular na Intact, Animais Livremente Behaving

O registro de nervos e músculos fundamentais de Aplysia durante o comportamento alimentar permite-nos estudar os padrões de controle neural em um animal intacto.

Para montar o conjunto de eletrodos para gravações in vivo multicanal, quatro eletrodos diferenciais são criados e torcidos juntos, com os eletrodos diferenciais individuais se ramificando separadamente. Nas extremidades, o animal anestesiado é fixado e uma incisão é feita ao lado da mancha ocular. Os nervos e músculos-alvo são localizados e os eletrodos são fixados em uma gota de supercola na base do gancho, sendo então isolados com selante de cura rápida.Olá, sou Miranda Collins do laboratório do Dr. Halal Thiel do departamento de biologia da Kiss Western Reserve University. Hoje vou mostrar um procedimento para montar e implantar eletrodos para gravações in vivo em SIA, Califórnia. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar o controle neuromuscular da alimentação e do SIA.Vamos começar. Para criar o eletrodo, use uma tesoura para cortar um pedaço de fio de aço inoxidável com revestimento de esmalte, com diâmetro de 0,001 polegada, com cerca de dois pés de comprimento. Fixe uma pequena bola de massa plástica em cada extremidade do fio.Dobre o fio ao meio e enrole as pontas para criar um par trançado chamado eletrodo diferencial. Prenda com fita as duas pontas do fio para evitar que se desfaçam. Confeccione quatro eletrodos diferenciais utilizando uma cor diferente de fita para cada eletrodo diferencial.Para fins de identificação, torça dois dos eletrodos diferenciais juntos, deixando duas polegadas sem torção em uma extremidade e uma polegada na outra extremidade. Repita com o par restante de eletrodos diferenciais. Torça ambos os conjuntos de dois eletrodos diferenciais juntos, certificando-se de que as extremidades permaneçam sem torção.Segure o conjunto do eletrodo e aplique cola de silicone doméstica na junção dos quatro eletrodos diferenciais, deixando as extremidades livres. Pendure e deixe a cola secar por pelo menos quatro horas. Para isolar os ramos, deite o conjunto do eletrodo sobre uma superfície plana e móvel, como uma tábua de madeira.Use um pequeno pedaço de plástico para elevar o conjunto do eletrodo logo antes da bifurcação e fixe-o com fita adesiva. Espalhe as extremidades e fixe-as com fita. Ao microscópio estereoscópico, use pinças para revestir as ramificações com cola de silicone.As extremidades de um polegada de comprimento ficarão dentro do animal, portanto devem ter uma camada muito fina de cola. Deixe a cola secar por pelo menos três horas. Encurte a extremidade de um polegada de um eletrodo diferencial para dois centímetros em cada extremidade do eletrodo.Use uma pin&ccedil;a para raspar o silicone e o esmalte de ambos os fios. Para expor um cent&iacute;metro de fio descoberto, enrole um fio descoberto em forma de gancho para grava&ccedil;&atilde;o. Em seguida, direcione o outro fio para cima e para longe do gancho para servir como fio terra; na extremidade de dois polegadas de comprimento, solde um pino conector dourado em cada fio.Use um pedaço de fita para fixar a extremidade e manter espaço entre os pinos de terra e de gravação. Repita esses passos para que haja ganchos e conectores dourados em todos os quatro eletrodos diferenciais. Aplique uma bola de cola de silicone de um a dois centímetros de comprimento ao cabo, a cerca de 1,5 polegadas da extremidade com gancho.Para fixar os eletrodos dentro do animal, deixe-o secar por pelo menos uma hora, selecione um animal saudável que pese entre 350 e 450 gramas em resposta a pequenos pedaços de alga marinha. O animal deve gerar mordidas em intervalos de três a cinco segundos. A cirurgia completa com a implantação dos eletrodos deve levar cerca de uma hora.Coloque o animal anestesiado em uma bandeja de dissecação com o pé voltado para baixo, de frente para a cabeça do animal. Posicione a região das brânquias à sua esquerda, de modo que o animal fique parcialmente de lado, inclinado para longe, com os tentáculos anteriores fixados. Coloque a bandeja sobre a platina de um microscópio estereoscópico.Coloque a bandeja em um ângulo de aproximadamente 20 graus para elevar a cabeça e coletar o hemolinfa na cauda, longe da incisão. Usando tesoura de dissecação, faça uma incisão ligeiramente à direita da mancha ocular e estenda-a de um a 1,5 centímetros em direção à cabeça. Use seus tratores. Prenda nas bordas da bandeja para manter a incisão aberta.Para expor a massa bucal. Use pin&ccedil;as para levantar a membrana transparente sob a pele e use tesoura para cortar uma abertura, seguindo o corte principal. Dobre as bordas da membrana para dentro dos retratores.Coloque o conjunto de eletrodos em um micromanipulador e mova-o sobre a incisão do animal. A fixação de cada um dos quatro eletrodos levará cerca de 10 a 15 minutos; primeiramente será demonstrado o acesso aos nervos, seguido pela fixação do eletrodo ao nervo final. No entanto, na prática, cada nervo deve ser conectado a um eletrodo antes que o próximo nervo seja exposto.O nervo ular é o mais difícil de acessar e deve ser abordado primeiro. Existem duas opções para acessar o nervo ular. A primeira opção, que é a preferível, é procurar sob o gânglio bucal entre o BN um e o VN dois.Se um ramo do nervo ular for visível, use uma pinça de ponta fina dobrada em forma de gancho para levantar o ramo. Se um ramo do nervo ular não estiver acessível acima do músculo, uma segunda opção é acessá-lo por meio de uma pequena incisão no músculo I dois, junto ao tecido conjuntivo na base do gânglio bucal. A incisão no músculo I dois deve atravessar duas camadas do músculo I dois para fixar um eletrodo ao I dois.Use a pinça em forma de gancho para levantar e separar duas faixas do músculo I que dá acesso ao nervo bucal dois aqui. O nervo bucal três está aqui e será usado para demonstrar a fixação do eletrodo. Todos os eletrodos são fixados da mesma maneira demonstrada agora no nervo bucal três.Uma vez que o nervo esteja preso na pinça, use outro par de pinças para manipular um gancho do eletrodo sobre o nervo utilizando o micromanipulador. Levante o gancho de modo que o nervo seja elevado e afastado da massa bucal. Limpe quaisquer outros nervos ou tecidos levantados, o mínimo possível, meio centímetro ou menos.Para evitar o estiramento excessivo do nervo, use uma toalha de papel kim para secar o eletrodo e a área adjacente do nervo. Um alfinete de inseto é usado para aplicar a cola, fixando o eletrodo com uma pequena quantidade de supercola no ponto em que a base do gancho está em contato com a parte inferior do nervo. Aplique uma gota de salina alysia ou hemolinfa para curar a supercola.Em seguida, seque o gancho na mistura de uma bolsa de gelo. Cole rapidamente. Isso mantém a cola maleável por cerca de 30 minutos.Pode ser necessário realizar misturas adicionais ao longo da cirurgia. Use o alfinete para insetos para cobrir completamente qualquer fio exposto do gancho com uma pequena quantidade de selante rápido. Evite o fio terra.Deixe a cola secar por cinco minutos. Reajuste a cola. Se ela se soltar do gancho, espere até que a cola esteja seca antes de acessar o próximo nervo.Após a fixação de todos os eletrodos, deslize o conjunto de eletrodos para dentro do animal até o ancoradouro de silicone. Suture a incisão ao redor do cabo de eletrodo que está saliente. Mantendo o ancoradouro dentro do animal, use cola cirúrgica para fixar os pontos e garantir uma boa vedação.Insira as pontas conectoras douradas na outra extremidade do eletrodo em um pequeno bloco de isopor. Devolva o animal ao tanque principal em um recipiente de isolamento arejado para recuperação durante a noite. Acostume o animal em um recipiente arejado enquanto conectado ao equipamento de gravação por pelo menos 1,5 hora.Monitore o sinal enquanto o animal se aclimata para verificar se todos os eletrodos estão funcionando e se os níveis de ruído são baixos. Use uma câmera de vídeo para registrar o comportamento alimentar enquanto utiliza o computador para registrar os sinais dos eletrodos neurais e musculares. Sincronize as gravações de vídeo e dos eletrodos usando um sinal de onda quadrada que controla um contador digital na imagem da câmera, ao mesmo tempo em que é registrado simultaneamente como um canal adicional no computador.No escopo, quando o animal está se alimentando, haverá rajadas de atividade nos nervos e músculos. Aqui está um exemplo de um padrão de deglutição com atividade de EMG de I dois e ENG de RN BN dois e BN três. Acabamos de mostrar como fabricar e implantar eletrodos multicanal para registrar a atividade neural e muscular durante o comportamento alimentar em sias livres para se mover.Ao realizar este procedimento, certifique-se de manipular o nervo com cuidado e de vedar completamente os ganchos de gravação de modo que nenhum trecho do fio fique exposto. Obrigado por assistir e boa sorte em seus experimentos.

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