Name: Sperm colheita e Inseminação Artificial de Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprenda a colher espermatozoides e realizar inseminação artificial em camundongos para estudos de biologia reprodutiva e pesquisa transgênica. Este método permite controle preciso do momento da fertilização em linhagens importantes.

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Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua percepção de valor, paciência e conhecimento sobre a reprodução de roedores.

Inseminação artificial A inseminação artificial é usado em vez de cruzamentos naturais para aumentar as chances de que todas as fêmeas têm ficará grávida. Dois do sexo masculino foi usado para cada um fêmeas superovuladas ou uma mulher conhecida por estar no cio. Os epidídimos caudae de camundongos machos adultos foram colocados em uma suspensão de leite 9% e cortados aberto com 18 agulhas. O esperma foi permitido nadar livremente por alguns minutos e depois o epidídimos foram tomadas a partir da mistura. A suspensão foi avaliada com um microscópio de confluência e espermatozóides móveis. A bitola 22 blunt 1 ½ polegada de comprimento agulha foi usado para administrar o esperma. A curva ° 120 foi colocado cerca de 3 / 4 ª a caminho da agulha. A agulha foi introduzida na vagina até a curva e 0,025 - 0.05mls injetado. Se um assistente é utilizado para segurar a fêmea na posição adequada, o uso de anestésicos não é necessário. Preparação <ol><li> Use 4 machos para 6 fêmeas </li><li> Euthanize machos no viveiro </li><li> Prepare cerca de 5 ml de leite de 9% de leite em pó </li><li> Colocar 1,5 ml em placa de Petri pequena </li><li> Cortar os canais deferentes e epidídimo </li><li> Coloque em 1,5 ml de leite de 9% </li><li> Usando duas agulhas 18, e usando movimento de corte de comprimento com agulhas, uma fatia de abrir o epidídimo e ducto deferente para liberar o esperma </li><li> Retire sobra de tecido e verificar se há espermatozóides em microscópio </li></ol> Injeção <ol><li> Use agulha sem corte em ângulo de 120 ° </li><li> Segure na mão do mouse e injetar mistura. Se desconfortável com uma pessoa segurando e injetáveis, duas pessoas podem ser usadas. Nenhum anestésico deve ser utilizado, como no se sabe como isso pode influenciar o procedimento. </li><li> Use 0,05 ml de esperma / leite mix por fêmea </li></ol> Destinatário fêmeas <ol><li> Fazer esfregaço vaginal em fêmeas receptoras (por esta altura as fêmeas destinatário devem estar em proestro / estro) </li><li> Fêmeas que não atingiram estro pelo 5 º dia provavelmente não deve utilizar </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 18 G</td><td>Ferramenta</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Leite em pó</td><td>Reagente</td><td>Qualquer fornecedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 1 mL</td><td>Ferramenta</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td>Ferramenta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Ferramenta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s</td><td>Reagente</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>Agulha romba 22 G</td><td>Ferramenta</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sperm colheita e inseminação artificial de ratos

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Roedores do gênero Peromyscus (ratos de cervos) são os mais prevalentes mamíferos nativos da América do Norte. Peromyscus espécies são usadas em uma ampla gama de investigação, incluindo toxicologia, epidemiologia, ecologia, comportamento, e estudos genéticos. Aqui eles fornecem um modelo útil para demonstrações de inseminação artificial. Métodos semelhantes aos apresentados aqui foram usadas anteriormente em estudos com ratos vários veados, mas nenhum protocolo detalhado foi publicado. Aqui demonstramos o método básico de inseminação artificial. Este método consiste na extração dos testículos dos roedores, em seguida, isolar os espermatozóides do epidídimo e canal deferente. O espermatozóide maduro, agora em uma mistura de leite, são colocados no aparelho reprodutivo da fêmea no momento da ovulação. Fertilização é contado como 0 dias para o sincronismo do desenvolvimento embrionário. Embriões pode ser recuperado no tempo desejado ponto-e manipulado. A inseminação artificial pode ser usado em uma variedade de espécies de roedores onde o tempo exato de embriões é crucial ou difícil de obter. Esta técnica é vital para as espécies ou variedades (incluindo a maioria Peromyscus) que não podem companheiro imediatamente e / ou onde o acasalamento é difícil de avaliar. Além disso, a inseminação artificial proporciona tempo exato para o desenvolvimento do embrião ou no mapeamento progresso do desenvolvimento e / ou trabalho transgênicos. Redução do número de animais pode ser usado desde a fecundação é garantida. Este método tem sido vital para promover o sistema Peromyscus, e esperamos beneficiar os outros também.

Este protocolo demonstra métodos para a extração de espermatozóides dos testículos dos machos e depois inseminação camundongos fêmeas. Este procedimento é útil quando o tempo preciso é necessário em estudos de desenvolvimento bem como o trabalho transgênicos.

Sperm colheita e Inseminação Artificial de Ratos

Roedores do gênero Peromyscus (camundongos-do-campo) são os mamíferos nativos mais prevalentes da América do Norte. Espécies de Peromyscus são utilizadas em uma ampla gama de pesquisas...

Meu nome é Amanda Dli, do laboratório do Dr. Paul Verana na Universidade da Califórnia em Irvine. Hoje vou demonstrar o procedimento de inseminação artificial. Isso envolve extrair o esperma do macho e, em seguida, introduzir esse esperma em uma fêmea em ovulação.A razão pela qual você pode querer fazer isso é porque o macho e a fêmea podem não acasalar no momento em que você precisa ou podem não acasalar de todo. Além disso, isso também pode ser usado com espermatozoides congelados se uma linhagem de camundongo for muito importante. Este procedimento é muito importante ser demonstrado, porque muitos manuais e revistas científicas não mostram o procedimento correto para manipular o camundongo.O camundongo pode ser manipulado e injetado por uma única pessoa, sem o uso de qualquer anestésico na fêmea. Isso implica que a fêmea não seja lesionada de maneira alguma e garante que a fertilização possa seguir o melhor caminho possível. As ferramentas de dissecação que utilizaremos são dois pares de pinças finas e um par de tesouras afiadas.Estes serão usados para isolar o melhor tecido ao longo dos testículos e da gordura alimentada. Uma vez concluído isso, usaremos a pinça para isolar o e

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Aqui demonstramos a recém-desenvolvida I • kit Cryo para mouse criopreservação de esperma. Duas células desenvolvimento embrionário palco com descongelado esperma foi melhorado consistentemente em cinco linhagens de camundongos com a utilização deste kit. Durante um período de 1,5 anos, 49 linhas de camundongos geneticamente modificados foram arquivados por criopreservação de espermatozóides com a Cryo kit • I e mais tarde recuperados com sucesso por fertilização in vitro.

Criopreservação do mouse Sperm and Recovery utilizando o I · Cryo Kit

A microinjecção de oócitos de rato é comumente utilizada tanto para a transgênese clássica ( ou seja, a integração aleatória de transgenes) e a segmentação de genes mediada por CRISPR. Este protocolo analisa os últimos desenvolvimentos em microinjeção, com ênfase particular no controle de qualidade e estratégias de genotipagem.

Geração de ratos geneticamente modificados através da microinjecção de oócitos

Liquefação do sêmen é necessária para que o esperma ser libertado do gel seminal. Este estudo fornece os procedimentos para a recolha de sémen de coito de pós o trato reprodutivo feminino e medir o tempo de liquefação do sêmen.

Coleção de pós acasalamento sêmen do trato reprodutivo feminino e medição de liquefação do sêmen em ratos

Aqui, apresentamos um protocolo para promover a integração do transgene e produção de ratos transgénicos fundador com eficácia elevada por uma simples injeção de um vetor de Lentivirus no espaço de um oócito fertilizado perivitelline.

Particulas de Lentivirus mediada produção de camundongos transgênicos: um método simples e altamente eficiente para estudo direto dos fundadores

Aqui, apresentamos um método modificado para criopreservação de embriões unicelulares, bem como um protocolo que acoplar o uso de embriões congelados e eletroporação para a geração eficiente de camundongos geneticamente modificados.

Uso de embriões congelados para produção de ratos geneticamente modificados

Muitos modelos de roedores de endometriose são limitados pela complexidade técnica, reprodutibilidade e/ou necessidade de animais imunocomprometidos ou ratos repórteres especiais. Apresentamos um sistema simplificado de indução de lesão utilizando qualquer camundongo experimental com um sistema de pontuação objetiva e independentemente verificável e sem necessidade de cirurgia de ovariectomia ou sobrevivência.

Um modelo de murina síndico de endometriose usando ratos naturalmente ciclistas

Aqui, descrevemos uma técnica simples destinada à geração eficiente de camundongos geneticamente modificados chamada CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Este método fornece reagentes de edição por eletroporação em embriões a uma eficiência próxima de 100%. Este protocolo é eficaz para mutações pontuais, pequenas inserções genômicas e deleções em embriões de mamíferos.

Edição Eficiente do Genoma de Camundongos por Eletroporação CRISPR de Zigotos

O método de manipulação cervical apresentado pode induzir pseudogestantes em camundongos sem a necessidade de fêmeas reprodutoras com machos vasectomizados. A indução da pseudogravidez é necessária para o sucesso da transferência não cirúrgica de embriões e da inseminação artificial não cirúrgica, ambas também apresentadas.

Indução de pseudogravidez em camundongos fêmeas sem a necessidade de machos vasectomizados antes da transferência não cirúrgica de embriões ou inseminação artificial

Aqui, apresentamos um método para realizar a injeção redonda de espermátides (ROSI) em camundongos, uma técnica com aplicações clínicas promissoras e utilidade para investigar os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento embrionário.

Injeção de espermátide redonda em camundongo

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de camundongo de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriões (ET), permitindo-nos observar mudanças relacionadas à idade no metabolismo da glicose que podem ser atribuídas à ICSI, fornecendo informações sobre seus potenciais impactos de longo prazo no desenvolvimento humano.

Monitoramento da glicose no sangue na prole de camundongos após injeção intracitoplasmática de espermatozóides

Aprenda a colher espermatozoides e realizar inseminação artificial em camundongos para estudos de biologia reprodutiva e pesquisa transgênica. Este método permite controle preciso do momento da fertilização em linhagens importantes.

Sperm colheita e Inseminação Artificial de Ratos

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