Procedimento de transplante do epitélio mamário

Este vídeo demonstra os procedimentos para colher memória. Epitélio, limpe o coxim adiposo da memória e transplante epitélio exógeno para estudar o desenvolvimento da memória em camundongos de três semanas de idade; o crescimento da árvore epitelial da memória está confinado à vizinhança do mamilo, e o coxim adiposo é amplamente desprovido de epitélio da memória. À medida que o camundongo amadurece, a árvore epitelial cresce através do coxim adiposo.

Na sétima semana de idade, a árvore ductal epitelial se estende por todo o coxim adiposo. Se a pequena porção do coxim adiposo contendo epitélio for removida na terceira semana de idade, o epitélio endógeno nunca colonizará o coxim adiposo e o coxim é descrito como limpo, permanecendo assim na maturidade. O epitélio ou células epiteliais doadoras transplantadas, no entanto, têm o potencial de estender árvores ductais por todo o hospedeiro limpo.

Coxim adiposo. A histologia pode então ser utilizada para monitorar a progressão do desenvolvimento da memória em tecidos transplantados de animais transgênicos ou de teste. Olá, meu nome é Joseph Jerry, e estou no Departamento de Ciências Veterinárias e de Animais da Universidade de Massachusetts.

Olá, meu nome é Karen Dunphy. Trabalho no Laboratório Jerry. Hoje vamos realizar um transplante de epitélio mamário.

Utilizamos este procedimento para estudar a base molecular e celular da gênese de tumores de memória e um modelo para câncer de mama. Vamos começar. O primeiro passo do procedimento de transplante é colher o tecido epitelial de memória do camundongo doador.

Inicie lavando um camundongo fêmea recém-eutanasiado com etanol 70%, sem perfurar as membranas das SRUs da cavidade corporal ventral. Faça um corte mediano sagital através da pele, estendendo-se do púbis até o esterno. Em seguida, faça um corte oblíquo a partir da incisão inicial no púbis em direção a cada pata traseira.

Usando pinças curvas, segure as membranas das SRUs. Em seguida, usando pinças serrilhadas retas, segure a borda cortada da pele e retire cuidadosamente a parede do corpo das membranas das S cs.

Para expor a quarta glândula inguinal associada à face inferior da parede corporal, localize o linfonodo dentro da glândula associada na interseção de três vasos sanguíneos proeminentes na glândula associada, podendo ser percebido como um nódulo denso dentro do tecido adiposo. Com a ponta de uma tesoura oftálmica, corte o tecido adiposo ao redor do linfonodo. Em seguida, com o indicador do lado epidérmico da pele, aplique pressão para elevar o nódulo para fora do tecido adiposo e remova-o com uma pinça.

Com um par de pinças curvas, descarte o nódulo linfático. Agora, mantendo as margens da pele firmes, segure o lobo adiposo com a borda curva de um par de pinças curvas e gradualmente desprenda o lobo da parede abdominal. Seguindo a direção do lobo em direção à superfície dorsal do camundongo, remova toda a glândula em uma única peça.

Coloque a glândula salivar sobre um bloco de corte plástico estéril com uma pequena quantidade de meio, cerca de 200 microlitros sobre a superfície da glândula para mantê-la úmida. Em seguida, pique a glândula em pedaços de um milímetro com uma lâmina de barbear nova. Divida a glândula picada em quatro porções.

Em seguida, utilizando pinças, distribua entre quatro tubos criogênicos contendo meio de congelação. Coloque os tubos criogênicos em um congelador celular Nalgene com 250 mililitros de álcool isopropílico no compartimento externo. Em seguida, coloque o congelador celular a menos 70 graus Celsius por 24 horas.

Após 24 horas, transfira os frascos congelados de fragmentos de memória para nitrogênio líquido até o momento de serem necessários para o transplante. Cada frasco de criopreservação contém fragmentos suficientes de glândulas de memória para serem transplantados nos alvéolos livres de quatro a oito camundongos hospedeiros. Após verificar a profundidade da anestesia de um camundongo hospedeiro de três semanas por meio de uma pinça firme no dedo do pé, imobilize firmemente o camundongo com o lado ventral voltado para cima e as patas esticadas sobre uma plataforma cirúrgica, de modo que seu abdômen fique tenso.

Analgésico pré-operatório, bupivacaína ou buprenorfina deve ser administrado por via subcutânea. Desinfete a área cirúrgica com álcool e uma solução iodada usando pinça. Segure a pele alguns milímetros acima da pelve e levante-a do abdômen.

Corte cuidadosamente a pele, garantindo que a incisão inicial não fique muito próxima à uretra, onde a colocação de clipes cirúrgicos pode interferir na capacidade do camundongo de urinar. Em seguida, tomando cuidado para não perfurar as membranas das USR, faça um corte mediano sagital na pele, estendendo-se do púbis até o esterno.

Agora, a partir do corte inicial, faça cortes oblíquos através da pele a partir da linha média, atravessando a pelve em direção a cada pata traseira. Usando pinças curvas, segure suavemente as membranas serosas da parede ventral do corpo. Em seguida, use pinças para tecidos para segurar a margem cortada da pele e puxe a parede do corpo para longe das membranas serosas.

Para expor a quarta glândula inguinal mamária, identifique a quarta glândula mamária. Identifique a quinta glândula mamária, cauterize o nó do mamilo e duas artérias que levam ao nó. Separe a quarta e a quinta glândulas, em seguida cauterize a margem da quinta glândula.

Em seguida, usando tesoura, corte transversalmente o coxim adiposo logo ventral ao nódulo para separar o coxim adiposo da quarta glândula mamária. Com pinça curva, segure firmemente a porção ventral do coxim adiposo e puxe-a para longe da parede abdominal. É recomendável prensar o tecido excisado entre duas lâminas identificadas e fixá-lo em fixador car noise.

Posteriormente, o tecido pode ser corado, montado e avaliado quanto a margens livres. Usando pinças, remova todos os vestígios da glândula da memória ao redor da região da porção removida do lobo adiposo. O animal está agora pronto para transplante de tecido ou células.

Tecido epitelial doador fresco ou congelado em nitrogênio líquido pode ser transplantado no alvolo adiposo esvaziado. Alternativamente, linhagens celulares epiteliais imortalizadas, linhagens celulares de tumor de memória ou células primárias podem ser transplantadas. Para detalhes sobre o preparo das células, consulte o protocolo escrito acompanhante para o transplante de fragmentos de epitélio. Preparado.

Este vídeo começa descongelando um tubo criogênico de epitélio e transferindo os fragmentos para uma placa de Petri contendo meio fresco. Para diluir o DMSO com tesoura, faça um bolso no epitélio da almofada de gordura limpa do camundongo receptor. Em seguida, usando pinças de agulha, coloque um fragmento de um milímetro de epitélio doador dentro do bolso.

Se necessário, segure o bolso fechado com pinça de tecido e retire a pinça da agulha para que o tecido permaneça no lugar. Segure as margens opostas da pele. Mantenha-as juntas com a pinça.

Levante-os afastando das membranas serosas da cavidade corporal ventral e feche com clipes cirúrgicos. Use dois clipes para fechar a incisão mediana sagital e um clipe para cada incisão oblíqua. Evite obstruir a uretra, se necessário.

Feche os espaços na pele no ponto de interseção das incisões mediano-sagital e oblíqua com um ponto cirúrgico. Coloque o camundongo em sua gaiola e mantenha a gaiola sob uma lâmpada de aquecimento até que o animal tenha se recuperado. Os clipes de ferida devem ser removidos após duas semanas.

Os seguintes slides mostram imagens representativas do que se pode esperar encontrar na glândula de memória do hospedeiro após o esvaziamento do coxim alimentado e o transplante do epitélio; esta imagem mostra o epitélio de memória endógeno removido de um camundongo com três semanas de idade. No procedimento de esvaziamento da glândula, observe as margens nítidas na borda cortada. Uma montagem inteira como esta deve ser preparada após cada procedimento para avaliar a presença de margens livres.

Esta imagem mostra o coxim adiposo clarificado do camundongo sete semanas após o procedimento de clareamento. Observe que todo o coxim adiposo está isento de memória, epitélio, hematina e asina. A coloração de um coxim adiposo clarificado sete semanas após o procedimento de clareamento também demonstra que a glândula está isenta de epitélio glandular.

Um montagem inteira representativa de um coxim adiposo clarificado transplantado com epitélio memorizado doador de um camundongo de 10 semanas de idade é mostrada. Observe que o epitélio transplantado produziu árvores ductais epiteliais normais, hematina e asina. Coloração de um coxim adiposo clarificado e do epitélio memorizado.

O transplante de epitélio na mesma idade revela a produção normal de ductos epiteliais a partir do epitélio exógeno. Aqui, hematina e asina, coloração de um coxim adiposo clarificado, mostram um transplante epitelial que se desenvolveu em um tumor mamário. Acabamos de mostrar como colher o epitélio mamário e realizar um transplante epitelial mamário.

Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de seccionar as conexões entre a quarta e a quinta glândula para cauterizar o nódulo e o mamilo, e remover todos os vestígios de epitélio endógeno. É necessário garantir que não haja nenhuma possibilidade de o epitélio endógeno crescer no leito adiposo esvaziado. Além disso, é aconselhável preparar um corte completo da porção removida da glândula mamária para verificar margens livres.

É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.