Name: Detecção rápida de Homogêneos Ensaios Biológicos Usando o sistema de modulação Biossensoriais Magnetic (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 58 s
Description: Aprenda a detectar IL-8 rapidamente usando o sistema de biossensoriamento por modulação magnética (MMB). Este ensaio homogêneo elimina etapas de lavagem, utilizando micropartículas magnéticas e marcação fluorescente para identificar moléculas biológicas com alta sensibilidade.

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Este trabalho foi parcialmente financiado pelo Fundo Horowitz Isha.

IL-8 ensaio: <ol><li> A mistura de reação foram as seguintes quatro componentes em 100 mL de volume final de tampão de ensaio em suas respectivas concentrações. 10 ml de esferas magnéticas com anticorpo de captura menos 100 esferas / mL concentrações final, 2 l da IL-8 anticorpo biotinilado em 1 nano-gram/μl concentração final, 1 ml de estreptavidina proteína fluorescente em 20 nano-gram/μl concentração final, e 1 mL de IL-8-alvo em 0,48 pico-gram/μl. Os componentes são adicionados um por um para o tampão de ensaio e são em seguida agitado por 30 minutos. </li><li> A reação de controle é preparado da mesma maneira sem a IL-8 alvo. </li><li> As reacções são depois colocados sem qualquer separação ou etapa de lavagem na cubetas e inspecionados utilizando o sistema de MMB. </li></ol> Sistema de MMB: <ol><li> Coloque a cubeta na sua posição entre os dois pólos eletromagnéticos. </li><li> Operar o atual modulação e aguarde 30 segundos para permitir a agregação e condensação das esferas </li><li> Medir o sinal do amplificador lock-in usando um osciloscópio. </li></ol> Resultados representativos: Inspeção visual das contas agregadas apresentou uma nítida diferença entre a reação com o destino ea reação sem o alvo. Em todas as reações com o alvo, os grânulos formado um agregado único e denso que se movia dentro e fora do raio laser de forma unir. No entanto, em toda a reação sem o alvo, as contas eram menos agregadas e seu movimento era menos unir (ver Figura 1). <img src="/files/ftp_upload/1935/1935fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: inspecção visual de imunoensaio o sanduíche '(a) sem o alvo IL-8 (b) Com o objectivo de IL-8. O relógio de modulação pole (amarelo) eo sinal de saída PMT (magenta), enquanto a detecção de 0,48 IL-8 pico gram-alvo são apresentados na Figura 1 (a). A freqüência de modulação para cada pólo é a 2 Hz. No entanto, como era teoricamente esperado, quando as contas passar o feixe de laser, a PMT detecta a luz fluorescente e há um pico na tensão de saída PMT. Portanto, a frequência de demodulação é a 4 Hz. Quando o sinal de PMT eo relógio dobrou modulação (a 4 Hz) são alimentados para o bloqueio no amplificador, o detector de fase sensível detecta a sincronização e resultados com alta tensão (ver figura 2). <img src="/files/ftp_upload/1935/1935fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: (a) do relógio, a modulação (amarelo) eo sinal de PMT (magenta) quando a detecção de 0,48 pico gram-IL-8 alvo. (B) O bloqueio resultou em tensão do amplificador de dois exames diferentes. O bloqueio no amplificador não detectaram qualquer sinal quando a amostra controle foi testado. Este facto, juntamente com a diferença visual na agregação sugere que o sistema MMB pode identificar claramente a presença de IL-8 alvo.

<ol><li>Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+fluorescent-labeled+probes+at+sub-picomolar+concentrations+by+magnetic+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation.</a> Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).</li>
<li>Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+homogenous+detection+of+the+Ibaraki+virus+NS3+cDNA+at+pico-molar+concentrations+by+magnetic+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Rapid homogenous detection of the Ibaraki virus NS3 cDNA at pico-molar concentrations by magnetic modulation.</a> Biosensors and Bioelectronics. 25, 858-863 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bio-Rad+%22Human+angiogenesis+assay+panel%22%22">Bio-Rad "Human angiogenesis assay panel"</a>. , Bio-Plex Pro. Forthcoming.</li>
<li>Instruction Manual. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bio-Plex+Precision+Pro+Cytokine+Assay%22">Bio-Plex Precision Pro Cytokine Assay</a>. , Bio-Rad Laboratories. Hercules, CA. Forthcoming.</li>
</ol>

Em resumo, nós mostramos que o sistema MMB pode ser usado para detectar a presença de IL-8-alvo em baixas concentrações (0,5 pico gram-é o limite de detecção do Bio-Plex Precision ensaios de citocinas Pro [3,4]). A capacidade do sistema não se limita a IL-8 e pode ser usado para detectar outras proteínas. As vantagens do sistema de MMB são a capacidade de detectar o alvo rapidamente e sem qualquer separação ou lavagem. Assim, facilita o processo de detecção e permite que o sistema a ser utilizado em aplicações de campo.

<table><tbody><tr><td>Conjunto Bio-Plex Pro Citoquina Humana IL-8</td><td>Bio-Rad</td><td>171-B5008M</td><td></td></tr><tr><td>Alvo recombinante humano IL-8</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>R202625</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonal biotinilado de camundongo anti IL-8 humano G265-8</td><td>BD Biosciences</td><td>554718</td><td></td></tr><tr><td>Proteína fluorescente conjugada à estreptavidina</td><td>Bio-Rad</td><td>Streptavidin PE</td><td></td></tr></tbody></table>

detecção rápida de homogêneos ensaios biológicos usando o sistema de modulação biossensoriais magnetic

Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System

A modulação do sistema magnético biosensoriamento (MMB) [1,2] de forma rápida e homogênea alvos biológicos detectados em baixas concentrações sem lavar ou etapa de separação. Quando a IL-8 alvo estava presente, um &quot;ensaio sandwich baseado esferas magnéticas associadas com IL-8 anticorpo de captura para estreptavidina acoplado a proteína fluorescente através da IL-8 alvo e um IL-8 biotinilado de anticorpos. O esferas magnéticas são manobrados em movimento oscilatório, aplicando um gradiente de campo magnético alternado através de dois pólos eletromagnéticos. As proteínas fluorescentes, que são ligados às esferas magnéticas são condensados ​​para a área de detecção e seu movimento dentro e fora de um feixe de laser ortogonal produz um sinal periódico fluorescente que é demodulado usando a detecção síncrona. O sistema de modulação biosensoriamento magnética foi usada anteriormente para detectar as seqüências de codificação das proteínas não estruturais do vírus Ibaraki 3 (NS3) DNA complementar (cDNA) [2]. As técnicas que são demonstradas neste trabalho para manipulação externa e condensação das partículas pode ser usado para outras aplicações, por exemplo, entrega de medicamentos magneticamente acoplada<em&gt; In-vivo</em&gt; Ou aumentando o contraste para<em&gt; In-vivo</em&gt; Aplicações de imagem.

Magnética modulação do sistema biosensoriamento é utilizada para rapidamente, com sensibilidade e simplesmente detectar ensaios biológicos, tais como moléculas de DNA e proteínas.

Detecção rápida de Homogêneos Ensaios Biológicos Usando o sistema de modulação Biossensoriais Magnetic

Um sistema de biosensoriamento por modulação magnética (MMB) [1,2] detectou rápida e homogeneamente alvos biológicos em baixas concentrações, sem a necessidade de qualquer lavagem ou...

A BIOSENSORES de modulação magnética ou MMB é uma técnica nova para a detecção de moléculas biológicas. Aqui é apresentado um ensaio de prova de princípio no qual a interleucina oito é detectada quando a interleucina oito, também chamada de IL oito, é adicionada a uma mistura de reação contendo microesferas magnéticas revestidas com anticorpos por meio de anticorpo anti-IL oito e estreptavidina marcada com fluoróforo. Um sanduíche molecular é criado, ligando efetivamente a molécula fluorescente à microesfera magnética.A reação é colocada em um vete e em um campo magnético alternado. Gradientes são aplicados por meio de dois polos eletromagnéticos, que movimentam as esferas em um movimento oscilatório. O movimento periódico da esfera com proteínas fluorescentes, entrando e saindo de um feixe de laser ortogonal, produz um sinal fluorescente que é coletado por um PMT e demodulado.Utilizando um amplificador com detecção por transposição de fase, o movimento das microesferas pode ser visualizado com uma câmera CCD no lugar do movimento síncrono do PMT, observado em amostras onde as microesferas magnéticas foram ligadas a proteínas fluorescentes por meio da IL-8. Olá, sou Adia do Laborat

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Descreve-se um método de ensaio de sensor electroquímico para a detecção bacteriana rápida e identificação. O ensaio envolve uma matriz de sensores funcionalizada com as sondas de DNA para o RNA de captura de oligonucleótidos (rRNA) sequências específicas das espécies ribossomal. Sandwich de rRNA alvo de hibridação com a sonda de captura e uma sonda detectora de peroxidase de rábano ligada ao oligonucleótido de DNA produz uma corrente mensurável amperométrica.

Bacteriana Detecção e Identificação Utilizando sensores eletroquímicos

Este vídeo demonstra um sistema microfluídico para um imunoensaio baseado em nanopartículas magnéticas. O sistema de detecção utiliza um dispositivo microfluídico que incorpora uma armadilha magnética em seus canais. Imunocomplexos pré-formados, compostos por nanopartículas magnéticas revestidas com antígeno ligadas a anticorpos primários e secundários conjugados com peroxidase, são introduzidos nos canais. Os imunocomplexos são capturados na armadilha magnética porosa após a aplicação de um...

Um imunoensaio baseado em nanopartículas magnéticas usando um dispositivo microfluídico

Este vídeo demonstra a detecção bacteriana quantitativa multiplexada empregando microesferas de poliestireno magnético carboxilado tingidas em conjuntos distintos. O procedimento engloba a formação de complexos de bactérias, separação magnética e análise baseada em fluxo, permitindo a quantificação precisa e simultânea de várias bactérias no mesmo poço de reação.

Detecção Bacteriana Quantitativa Multiplexada usando Microesferas Magnéticas Marcadas com Corante

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Frequência mistura Scanner Detecção magnética for Imaging Partículas Magnéticas em amostras Planar

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Levitação magnética Juntamente com imagem Portátil e Análise para a doença Diagnostics

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Detecção ultra-sensível de biomarcadores usando um Imprinting Molecular baseado Biosensor capacitivo

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Quantificação de Densidades Celulares e Propriedades Antigênicas usando Levitação Magnética

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Aprenda a detectar IL-8 rapidamente usando o sistema de biossensoriamento por modulação magnética (MMB). Este ensaio homogêneo elimina etapas de lavagem, utilizando micropartículas magnéticas e marcação fluorescente para identificar moléculas biológicas com alta sensibilidade.

Detecção rápida de Homogêneos Ensaios Biológicos Usando o sistema de modulação Biossensoriais Magnetic

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