Name: Seccionamento fina de Preparações Slice para Imunohistoquímica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Aprenda a técnica de corte fino em criostato para amostras de tecido cerebral de 400 micrômetros, utilizando estágio de congelamento em alumínio. Este método reprodutível facilita a imunohistoquímica em neurociência.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Prepare o molde da fita para a plataforma de outubro </li><li> Preencha o molde com outubro Congelar dentro criostato ou usando gelo seco esmagado. </li><li> Retire a fita em torno da plataforma outubro congelados. </li><li> Alinhe as marcas de congelamento e chuck estágio criostato de montagem e fechamento de mandril. </li><li> Secção da plataforma de outubro até a superfície é plana. </li><li> Remover ressurgiu plataforma de outubro e coloque em criostato estágio de congelamento. </li><li> Colocar a amostra de tecido (previamente criopreservados com glicerol 30% ou sacarose em PBS), em outubro </li><li> Preparar a coluna de congelamento com anel externo projetando cerca de 5 mm acima do topo da coluna formando bem para outubro </li><li> Atentamente a posição amostra de tecido para centro da superfície da coluna de congelamento e adicionar lentamente outubro até bem está cheia. </li><li> Surround coluna congelando com gelo seco esmagado. Tecido e outubro deve congelar completamente dentro de 20-60 segundos. </li><li> Com o aumento da preparação de temperatura, o anel externo podem ser removidos enquanto a amostra permanece congelado. </li><li> Deslizar para os lados da amostra off coluna congelamento e coloque em criostato. </li><li> Local de queda de outubro na superfície de outubro plataforma e espécime posição (tecido para baixo) aplicar uma pressão firme. Espécime vai congelar rapidamente na plataforma outubro </li><li> Chuck seguro em criostato de montagem palco com marcas alinhadas. </li><li> Secção através outubro superficial para a amostra de tecido. </li><li> Descongelar montar seções finas em lâminas de vidro e armazenar congelados ou à temperatura ambiente. </li><li> Immunoreactions pode ser realizada para o tecido montados em lâminas de vidro. </li><li> Reagente é agrupada em slide, pode ser suavemente agitado, e pode ser coberto se sensível à luz. </li><li> Fases posteriores da reação são facilmente realizados por deslize invertendo em recipiente de resíduos, wicking o slide, e então aplicar o reagente seguinte. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

O protocolo apresentado aqui fornece aos pesquisadores uma concisa, fácil de seguir esboço de como obter seções criostato fina de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro de novos estudos a serem realizados, tais como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Glicerol</td><td></td><td></td><td>30% Glycerol Solution in PBS w/v</td></tr><tr><td>Solução de Sacarose</td><td></td><td></td><td>30% Sucrose Solution in PBS w/v</td></tr></tbody></table>

seccionamento fina de preparações slice para imunohistoquímica

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Muitas investigações em neurociência, assim como outras disciplinas, envolvem o estudo pequeno, ainda peças macroscópicas ou secções do tecido que foram preservados, recém-retirado, ou cortado, mas manteve viável, como em preparações fatia de tecido cerebral. Subseqüentes estudos microscópicos deste material pode ser um desafio, como as amostras de tecido pode ser difícil de manusear. Demonstrado aqui é um método para a obtenção de seções criostato fina de tecido com uma espessura que pode variar 0,2-5,0 mm. Rotineiramente cortar 400 micron fatias de cérebro de espessura Vibratome série em 50-10 micron seções criostato coronal. As fatias são normalmente utilizados pela primeira vez para experimentos de eletrofisiologia e, em seguida, exigem uma análise microscópica da citoarquitetura da região a partir do qual as gravações foram observados. Construímos um dispositivo simples que permite a preparação controlada e reprodutível e posicionamento da fatia de tecido. Este dispositivo consiste de um cilindro de 5 cm de comprimento com um diâmetro de 1,2 cm, que serve como um estágio de congelamento da fatia. Um anel confortavelmente desliza sobre as paredes do cilindro em torno do fornecimento de fatia permitindo que o tecido a ser imerso em composto de congelamento (por exemplo, OCT). Este é, então, rapidamente congelados em gelo seco esmagado eo wafer resultante pode ser facilmente para a posição de corte do criostato. Seções finas podem ser descongelar montado em lâminas revestidas para permitir que novos estudos a serem realizados, como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica, como demonstrado aqui.

O presente método permite criostato reprodutíveis corte de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro. Nós utilizamos um estágio de congelamento simples de alumínio para facilitar a manipulação de tecido e um criostato padrão para produzir seções rotineiramente micron 10/05 de série a partir de 400 micron fatias de cérebro de espessura.

Seccionamento fina de Preparações Slice para Imunohistoquímica

Muitas investigações em neurociência, bem como em outras disciplinas, envolvem o estudo de fragmentos ou secções de tecido pequenos, porém macroscópicos, que foram ...

Olá, meu nome é Jun Park, pesquisador visitante da Harvard Medical School, e também sou estudante de medicina na Faculdade de Medicina da Universidade Y, Hospital Severance, EO, Coreia. Estes são os materiais para o corte em seções finas de preparações em fatias. Estou preparando um molde com fita, quatro plataformas de OCT.Estou moldando com OCT e congelando dentro do criostato ou usando olhos secos triturados para remover o TAFE ao redor da plataforma congelada de OCT. Estou mostrando as marcas de alinhamento no giz de congelamento e na plataforma de montagem do criostato e travando no giz. Estou realizando cortes através da plataforma de OCT.A superfície de Ontario é plana. Estou removendo a plataforma OCT recapeada e colocando-a no estágio congelante do criostato. Estou colocando esta amostra em OCT, e esta amostra foi previamente criopreservada com 30% de glicerol ou sacarose em PBS.Esta é a etapa para preparar a coluna de congelamento com o anel externo projetando cerca de cinco milímetros acima do topo da coluna em formação. O poço para OCTI é cuidadosamente posicionado no centro da superfície da coluna de congelamento e o OCT é adicionado lentamente até que o poço esteja ch

thin-sectioning-of-slice-preparations-for-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O vídeo a seguir descreve como preservar a morfologia de um tecido com fixação de formalina e inclusão em parafina.

Preservação de tecido embebido em parafina fixada em formalina (FFPE): um método para estudar a morfologia do tecido

Este protocolo de nível introdutório descreve os reagentes, equipamentos e técnicas necessárias para completar a coloração imuno-histoquímica de cérebros de roedores, usando marcadores para microglia e elementos neuronais como exemplo.

Primer para imunohistoquímica em tecido criosseccionada cérebro de um rato: Exemplo de coloração para Microglia e Neurônios

O protocolo de imunofluorescência indirecta descrito neste artigo permite a detecção e a localização de proteínas na glândula mamaria do rato. Um método completo é dada para preparar amostras da glândula mamaria, a efectuar imuno-histoquímica, para as secções de tecido imagem por microscopia de fluorescência, e para reconstruir imagens.

Imunofluorescência Indireta em cortes congelados de Rato glândula mamária

Muitos tipos de tumores cerebrais humanos estão localizados em regiões específicas do cérebro e são difíceis de cultivar em cultura. Este protocolo aborda o papel do microambiente tumoral e investiga novos tratamentos medicamentosos analisando células tumorais cerebrais primárias fluorescentes que crescem em uma fatia de cérebro de camundongo organotípica.

Um tumor cerebral / Slice organotípicas Co-cultura Sistema de Estudos de Tumor Microenvironment e alvejado droga Terapias

Aqui, nós fornecemos um, de baixo custo fácil, e protocolo de tempo-eficiente para corrigir quimicamente o tecido cerebral dos primatas com fixador acroleína, permitindo a preservação a longo prazo que seja compatível com imunohistoquímica pré-incorporação para microscopia eletrônica de transmissão.

Preparação do Tecido Cerebral primata não humano para Pré-incorporação de imuno-histoquímica e Microscopia Electrónica

Aqui, apresentamos um protocolo para melhorar o corte de parafina. Este método combina flutuante usando uma simples câmara termostática para evitar o processo de transferência exigido pelo método convencional e de corte. Como resultado, a eficiência e o número de cortes de parafina intactas foram grandemente melhoradas.

O corte e o método flutuante para tecido parafina para seccionamento

Nós fornecemos um método para a geração, cultivo e análise sistemática de fatias de organotypic derivadas de tumores de pulmão murino. Descrevemos também como otimizar para espessura da fatia e como selecionar as concentrações de drogas para tratar a fatias de tumor.

Estabelecimento e análise do Tumor fatia Explants como um pré-requisito para o teste de diagnóstico

Um protocolo para preparar culturas de fatias flutuantes do cérebro humano adulto é apresentado. O protocolo é uma variação do método de cultura de fatia amplamente utilizado usando inserções de membrana. É simples, rentável, e recomendado para a execução de ensaios de curto prazo destinadas a desvendar mecanismos de neurodegeneração por trás de doenças cerebrais associadas à idade.

Culturas de fatias flutuantes de curto prazo do cérebro humano adulto

A técnica de flutuação livre permite que os pesquisadores realizem colorações histológicas, incluindo imuno-histoquímica em seções de tecido fixas para visualizar estruturas biológicas, tipo de célula e expressão e localização de proteínas. Esta é uma técnica histoquímica eficiente e confiável que pode ser útil para investigar uma infinidade de tecidos, como cérebro, coração e fígado.

Coloração histológica usando seções de tecido flutuantes livres

Este protocolo descreve um método confiável para obter criosseções de alta qualidade de olhos inteiros de coelho. Ele detalha os procedimentos de dissecção, fixação, incorporação e seccionamento do olho do coelho, que podem ser facilmente adaptados para uso em qualquer estudo que utilize imuno-histoquímica em olhos maiores.

Obtenção de criosecções de alta qualidade de olho de coelho inteiro 

Aprenda a técnica de corte fino em criostato para amostras de tecido cerebral de 400 micrômetros, utilizando estágio de congelamento em alumínio. Este método reprodutível facilita a imunohistoquímica em neurociência.

Seccionamento fina de Preparações Slice para Imunohistoquímica

Explorar mais vídeos