Name: Extração de DNA a partir do Micróbios Gut da térmita (Zootermopsis Angusticollis) e Visualizing micróbios do intestino (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 27 s
Description: Aprenda a extrair DNA de micróbios do intestino posterior de térmitas e visualizar essa comunidade complexa. Este método revela interações microbianas essenciais para o metabolismo energético do hospedeiro.

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Síntese do procedimento para extração de DNA de cupins de todo o intestino: <ol><li> Cupins frio no gelo, retire gut usando uma pinça estéril e estabilizar amostras intestino em buffer. </li><li> Homogeneizar amostras em PVPP / SDS / buffer fenol. </li><li> Extrair e purificar o DNA de lisado bruto usando colunas Dneasy Qiagen. </li></ol> Protocolo: <ol><li> No gelo, retire a coragem de cupins trabalhador casta usando uma pinça estéril. </li><li> Transferir imediatamente a coragem e conteúdo a uma estéril, livre de nuclease tubo contendo 50 mL gelada 1x biologia molecular grau tampão TE (1 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 8,0). Congelar as amostras a -20 ° C, ou proceder diretamente com homogeneização. </li><li> Transferir as amostras de intestino e buffer para um estéril, livre de nuclease tubo parafuso 2 ml tampados pré-carregado com 500 mg de estéril de zircônia / sílica esferas (0,1 mm) e 700 mL de tampão TE contendo 1x 1% w / v polivinilpolipirrolidona (PVPP ). </li><li> Adicionar 50 ul de sulfato de sódio dodecil 20% (SDS) e 500 mL de fenol, para as amostras. </li><li> Homogeneizar (beat bead) na configuração mais alta utilizando três ciclos de 30 seg homogeneização e 30 seg de refrigeração em gelo. </li><li> Sedimentos material insolúvel por 1 min a 8.000 x g. </li><li> Purificar de 300 mL alíquotas da camada (superior) aquosa com colunas Qiagen Dneasy usando o método descrito para a purificação de lisado bruto. </li><li> Quantificar o conteúdo de ácido nucléico e amostras congeladas a -20 ° C para uso posterior. </li></ol>

<ol><li>Berthelet, M., Whyte, L. G., Greer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+Direct+Extraction+of+DNA+from+Soils+for+PCR+Analysis+using+Polyvinylpolypyrrolidone+Spin+Columns%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Rapid, Direct Extraction of DNA from Soils for PCR Analysis using Polyvinylpolypyrrolidone Spin Columns.</a> FEMS Microbiol. Lett. 138, 17-22 (1996).</li>
<li>Kudo, T., Ohkuma, M., Moriya, S., Noda, S., Ohtoko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Phylogenetic+Identification+of+the+Intestinal+Anaerobic+Microbial+Community+in+the+Hindgut+of+the+Termite%2C+Reticulitermes+Speratus%2C+without+Cultivation%5BTitle%5D)+AND+%22Extremophiles%22%5BJournal%5D)">Molecular Phylogenetic Identification of the Intestinal Anaerobic Microbial Community in the Hindgut of the Termite, Reticulitermes Speratus, without Cultivation.</a> Extremophiles. 2, 155-161 (1998).</li>
<li>Moré, M. I., Herrick, J. B., Silva, M. C., Ghiorse, W. C., Madsen, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Cell+Lysis+of+Indigenous+Microorganisms+and+Rapid+Extraction+of+Microbial+DNA+from+Sediment%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative Cell Lysis of Indigenous Microorganisms and Rapid Extraction of Microbial DNA from Sediment.</a> Appl. Environ. Microbiol. 60, 1572-1580 (1994).</li>
<li>Odelson, D. A., Breznak, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volatile+Fatty+Acid+Production+by+the+Hindgut+Microbiota+of+Xylophagous+Termites%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Volatile Fatty Acid Production by the Hindgut Microbiota of Xylophagous Termites.</a> Appl. Environ. Microbiol. 45, 1602-1613 (1983).</li>
<li>Ottesen, E. A., Hong, J. W., Quake, S. R., Leadbetter, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+Digital+PCR+Enables+Multigene+Analysis+of+individual+Environmental+Bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Microfluidic Digital PCR Enables Multigene Analysis of individual Environmental Bacteria.</a> Science. 314, 1464-1467 (2006).</li>
<li>Purdy, K. J., Embley, T. M., Takii, S., Newdell, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Extraction+of+DNA+and+rRNA+from+Sediments+by+a+Novel+Hydroxyapatite+Spin-Column+Method%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid Extraction of DNA and rRNA from Sediments by a Novel Hydroxyapatite Spin-Column Method.</a> Appl. Environ. Microbiol. 62, 3905-3907 (1996).</li>
<li>Salmassi, T. M., Leadbetter, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Genes+of+Tetrahydrofolate-Dependent+Metabolism+from+Cultivated+Spirochaetes+and+the+Gut+Community+of+the+Termite+Zootermopsis+Angusticollis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Analysis of Genes of Tetrahydrofolate-Dependent Metabolism from Cultivated Spirochaetes and the Gut Community of the Termite Zootermopsis Angusticollis.</a> Microbiology. 149, 2529-2537 (2003).</li>
<li>Schmitt-Wagner, D., Friedrich, M. W., Wagner, B., Brune, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogenetic+Diversity%2C+Abundance%2C+and+Axial+Distribution+of+Bacteria+in+the+Intestinal+Tract+of+Two+Soil-Feeding+Termites+%28Cubitermes+spp%29%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Phylogenetic Diversity, Abundance, and Axial Distribution of Bacteria in the Intestinal Tract of Two Soil-Feeding Termites (Cubitermes spp).</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 6007-6017 (2003).</li>
<li>Tsai, Y. L., Olson, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Method+for+Separation+of+Bacterial+DNA+from+Humic+Substances+in+Sediments+for+Polymerase+Chain+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid Method for Separation of Bacterial DNA from Humic Substances in Sediments for Polymerase Chain Reaction.</a> Appl. Environ. Microbiol. 58, 2292-2295 (1992).</li>
</ol>

Em nossa experiência, o DNA extraído das comunidades microbianas de espécies de madeira alimentando-cupim como nevadensis Zootermopis é suficientemente puro para o modelo de PCR, após uma rodada de extração e purificação. No entanto, alguns cupins, tais como lixo-alimentação e no solo alimentando-espécie pode ter uma maior concentração de ácidos húmicos em seu conteúdo intestinal e pode exigir a purificação adicional de DNA microbiano intestinal. O rendimento de DNA total das entranhas de 5 trabalhadores nevadensis Z. está na faixa de 10-30...

<table><tbody><tr><td>PVPP/SDS/fenol</td><td>Tampão</td><td></td><td></td><td>tampão de homogeneização</td></tr><tr><td>Kit DNeasy Tissue</td><td>Kit</td><td>Qiagen</td><td>77607</td><td>Utilizado de acordo com o protocolo para isolamento de DNA genômico de lisados brutos (Apêndice H, versão do manual do produto: julho de 2003)</td></tr><tr><td>TE</td><td>Tampão</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9285</td><td>tampão 1x (1 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, pH 8,0) a partir do concentrado 100x</td></tr><tr><td>esferas de zircônia/sílica</td><td>Materiais</td><td>Biospec Products</td><td>11079101z</td><td>0,1 mm</td></tr><tr><td>PVPP</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6755</td><td>polivinilpolipirrolidona a 1% p/v preparada a partir do reagente seco como suspensão 1x em tampão TE</td></tr><tr><td>Zootermopsis nevadensis</td><td>Animal</td><td></td><td></td><td>cupins</td></tr><tr><td>SDS</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4390</td><td>solução a 20% de dodecilsulfato de sódio em água, a partir do reagente seco</td></tr><tr><td>Fenol</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>77607</td><td>saturado com TE, ~73%</td></tr><tr><td>MiniBeadbeater-8</td><td>Ferramenta</td><td>Biospec Products</td><td>963</td><td></td></tr><tr><td>BSS</td><td>Solução Tampão de Sais, pH 7,2</td><td></td><td></td><td>Formulação por litro: 2,5 g K&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 1,0 g KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 1,6 g KCl, 1,4 g NaCl, 0,075 g CaCl, 1 g MgCl e 10 mL de uma solução 1 M de NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td></tr><tr><td>AxioPlan-2</td><td>Micrôscópio</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td>Equipado com objetiva de 40x, optivar de 1,6x e lentes oculares de 10x. As amostras foram observadas utilizando iluminação de contraste de fase</td></tr></tbody></table>

extração de dna a partir do micróbios gut da térmita (zootermopsis angusticollis) e visualizing micróbios do intestino

Extracting DNA from the Gut Microbes of the Termite (Zootermopsis Angusticollis) and Visualizing Gut Microbes

Cupins estão entre os poucos animais conhecidos por terem a capacidade de subsistir unicamente por madeira de consumo. O trato intestinal de cupins contém uma população microbiana densa e ricos em espécies que auxilia na degradação da lignocelulose predominantemente em acetato, o nutriente chave alimentando o metabolismo de cupins (Odelson &amp; Breznak, 1983). Dentro destas populações microbianas são bactérias, archaea metanogênicas e, em alguns cupins (&quot;menor&quot;), eucarióticas protozoários. Assim, os cupins são sujeitos de pesquisa excelente para estudar as interações entre espécies microbianas ea inúmeras funções bioquímicas que desempenham em benefício de seus hospedeiros. A composição de espécies das populações microbianas nos intestinos de cupins, bem como os principais genes envolvidos em vários processos bioquímicos tem sido explorado através de técnicas moleculares (Kudo et al, 1998;. Schmit-Wagner et al, 2003;. Salmassi &amp; Leadbetter, 2003). Essas técnicas dependem da extração e purificação de alta qualidade ácidos nucléicos a partir do ambiente do intestino de cupins. A técnica de extração descrita neste vídeo é uma compilação modificada de protocolos desenvolvidos para a extração e purificação de ácidos nucléicos a partir de amostras ambientais (Mor et al, 1994;. Berthelet et al, 1996;. Purdy et al, 1996;. Salmassi &amp; Leadbetter, 2003;. Ottesen et al 2006) e que produz DNA a partir de material de cupim intestino posterior adequado para uso como modelo para a reação em cadeia da polimerase (PCR).

Este vídeo ilustra a técnica para a extração de DNA das espécies de micróbios residentes no intestino posterior de cupins. A preparação de uma lâmina de montagem molhada, o que é útil para visualizar a comunidade microbiana do intestino também é ilustrado, e um tour pela espécie ambiente rico intestino é dado.

Extração de DNA a partir do Micróbios Gut da térmita (Zootermopsis Angusticollis) e Visualizing micróbios do intestino

Os cupins estão entre os poucos animais conhecidos por possuírem a capacidade de subsistir consumindo exclusivamente madeira. O trato intestinal dos cupins contém uma densa e ...

Aqui, sua reação a este ambiente não é, não é única. A maioria das pessoas, mesmo não cientistas, fica bastante impressionada. Sim. Diante da, a diversidade e complexidade.Olá, meu nome é Eric Matson e sou pós-doutorando no Departamento de Engenharia Ambiental e Científica do Instituto de Tecnologia da Califórnia. Meu trabalho, sob a orientação do Professor Jared Ledbetter, concentra-se nas interações microbianas e na diversidade de espécies que habitam o intestino posterior das térmitas. Em particular, estamos interessados em algumas das vias bioquímicas envolvidas e especialmente no processo de acetogênese, no qual esses microrganismos consomem gases hidrogênio e CO₂ e os convertem em acetato, um nutriente essencial para o metabolismo energético do hospedeiro térmita.Eu e outros pesquisadores do laboratório desenvolvemos conjuntos de primers específicos para analisar enzimas-chave nessa via metabólica. No entanto, para isso, precisamos gerar amostras de DNA limpas da comunidade microbiana, o DNA da comunidade, a fim de utilizá-las como alvos nesse processo. Assim, hoje quero demonstrar como dissecamos a espécie de cupim em questão, extraímos o DNA do intestino posterior e, em seguida, o purificamos para uso posterior em investigações.Hoje vamos nos concentrar em uma espécie de cupim, em particular chamada Zootermopsis nevadensis. Este é um cupim californiano de madeira úmida coletado localmente aqui, e é uma espécie bastante grande, o que facilita bastante as dissecações e extrações. Ok, então hoje já preparei alguns dos materiais necessários para o procedimento.Uma das primeiras coisas de que precisamos é uma certa quantidade de gelo para resfriar os insetos que serão dissecados. Também pré-resfriei um pouco de tampão TE, que contém um composto que ajudará a estabilizar o DNA assim que ele for liberado das células aqui dentro. Tenho frascos estéreis pré-carregados com microesferas de zircônia-silicato.Estas são microesferas de 0,1 milímetro e há cerca de meio grama ou algo assim aqui. É isso que realmente faremos: cisalhamento mecânico. E então tenho alguns reagentes envolvidos no procedimento de lise e purificação.Aqui tenho um frasco contendo 1% de polivinil Poli-1 ou PVPP no tampão. O PVPP é importante para remover ácidos húmicos das preparações de DNA, os quais podem inibir nossa análise de PCR dos resultados. E então tenho um pouco de sulfato de sódio ECCO, que é um surfactante que usaremos para ajudar na extração e na ruptura das células.E então, para realizar a dissecação dos cupins, tudo de que precisamos são algumas pinças estéreis. Essas têm pontas bastante finas e serão usadas para remover os intestinos. E, finalmente, para realizar a cisalhamento mecânico, temos aqui um dispositivo de batimento que gira a altas rotações por minuto e, juntamente com as microesferas de zircônia-silicato, promoverá a disruptura mecânica das células.Depois de coletarmos as térmitas no campo, trazemo-las para cá, ao laboratório. A maioria das térmitas de madeira úmida da Califórnia com as quais trabalhamos é muito suscetível à dessecação. Assim, um dos avanços que realizamos neste laboratório foi incorporar o uso de câmaras com umidade controlada, como esses aquários de 10 galões.Aqui dentro, coletamos as colônias individuais e as mantemos separadas nestas, nestas caixas. E na base do tanque há basicamente recipientes com diferentes soluções salinas. Este em particular contém uma solução de fosfato de potássio, que mantém a umidade relativa em torno de 95 a 96%, o que é ideal.E, com essas condições, conseguimos que os cupins realmente se reproduzissem em cativeiro, embora, quando queremos realizar um experimento, coletamos indivíduos frescos do campo. Mas nesta caixa é possível observar parte da madeira em que se alimentam. Esta é apenas pinheiro Ponderosa ou pinheiro Jeffrey que coletamos no local do ninho de cupins.E existem vários tipos diferentes de castas de cupins, incluindo os reprodutores machos e fêmeas. A maior parte da colônia é composta por cupins operários, além de um número de castas de soldados. Curiosamente, os soldados possuem peças bucais, mandíbulas, projetadas para defender a colônia, e não para comer a madeira.Eles dependem das térmitas operárias para se alimentarem também. Assim, é possível observar nesta caixa térmitas operárias e de soldado, bem como alguns jovens que recentemente eclodiram dos ovos, em cativeiro.Então, selecionei cinco cupins operários do grupo que acabei de mostrar a vocês. E comecei resfriando-os em gelo aqui. Para me preparar para a dissecação, vou usar estas pinças e trabalhar com a ajuda de um microscópio estereoscópico, e espero que vocês consigam ver o grande volume do intestino que poderemos remover de cada um desses indivíduos.Basta virar o cupim de costas e, com uma pinça, segurar a extremidade da cabeça e, com a outra, apenas pinçar. Exatamente na ponta do abdômen aqui. E com uma única pressão, você deverá ver o trato intestinal sendo removido do organismo. Ok.E você pode observar o grande volume, cerca de 30% a 40% do peso do inseto, que na verdade está contido nesse ambiente ali. E você pode ver que ele é dividido em várias seções. Temos o intestino anterior, o intestino médio e, em seguida, o intestino posterior dilatado, que é a câmara muito grande que contém a maior parte da comunidade microbiana responsável pelas fermentações.Aqui removi os intestinos de cinco cupins operários. E agora o próximo passo é estabilizar os ácidos nucleicos contidos nesta comunidade em uma solução de tampão TE gelada. Neste ponto, eles podem ser congelados a menos 20 graus Celsius se você estiver trabalhando em campo.Ou podemos continuar diretamente com o procedimento de extração. Mas todas as células e o material de DNA ainda estão contidos no intestino. E vou colocá-los em 100 microlitros de tampão TE.Ok, antes de realmente iniciar a extração das amostras de intestino, preciso preparar o tampão que vou utilizar para romper as células e tecidos. Então, neste tubo em que já coloquei cerca de meio grama de microesferas de zircônia, vou adicionar 700 microlitros de PVPP. Este é o tampão TE a 1% e 50 microlitros de uma solução a 20% de SDS.É importante ressuspender o PVPP antes de adicioná-lo, pois ele é insolúvel em tampões aquosos. Neste momento, estamos prontos para adicionar o fenol à amostra, então vou usar uma pipeta para adicionar cerca de 500 microlitros ou mais ou menos isso. Ok. E com isso, estamos prontos para iniciar a extração. Sim.Com o fenol adicionado, estamos prontos para adicionar a amostra intestinal que dissecamos da térmita anteriormente, o que ajuda a macerar os tecidos um pouco. Isso costuma facilitar a transferência. E agora, com o fenol adicionado, estamos prontos para iniciar a disruptura mecânica com o dispositivo de agitação por esferas.A técnica que vamos utilizar consiste em três ciclos em velocidade máxima, durante 30 segundos, seguidos por 30 segundos em gelo. É importante incluir o passo no gelo para resfriar a amostra, pois ela tende a aquecer devido à fricção. Então, vou inserir a amostra no dispositivo de lise com esferas aqui e vou executar por 30 segundos. Ok.No final do procedimento, você deverá observar que a maior parte do tecido foi homogeneizada. Deverá haver pouquíssimos agregados restantes, e você notará que a mistura apresenta uma aparência espumosa, provavelmente devido ao SDS presente. Neste momento, estamos prontos para centrifugar e, em seguida, iniciar a extração e purificação reais do DNA a partir desta amostra.Agora que rompemos mecanicamente as células, vamos centrifugar para remover o material insolúvel. Fazemos isso colocando no centrifugador e usando 8.000 ×g por um minuto. E agora o que esperamos ver é que a maior parte do material solúvel se acumule próximo ao fundo do tubo.E o que nos interessa é a solução aquosa na parte superior. E é isso que realmente vamos adicionar ao kit de extração de DNA KaiGen, seguindo o procedimento para lisado bruto. Agora que temos a nossa amostra centrifugada, vamos coletar 200 microlitros por preparação do sobrenadante e vamos extrair o DNA utilizando apenas o kit KaiGen A-D-N-E-Z, seguindo o protocolo indicado para lisado bruto.Agora temos os 200 microlitros da amostra de intestino, e vou prosseguir utilizando o kit kyogen d easy seguindo o protocolo indicado para lisado bruto. Sempre que realizamos uma extração intestinal, é sempre uma boa ideia verificar o estado do conteúdo intestinal. Fazemos isso dissecando um cupim e apenas certificando-nos de que ele é representativo das estruturas que já observamos anteriormente.Na verdade, faremos isso visualmente, observando as células nesta comunidade microbiana. Exatamente na ponta do abdômen aqui. E com um polo, você deverá ver o trato intestinal.Então, esta é apenas uma solução salina tamponada que corresponde muito de perto à composição do fluido intestinal real da térmita. Vou apenas macerar um pouco isso e, em seguida, adicionarei à lâmina de microscópio para observarmos. Pronto, agora estamos prontos para observar isso ao microscópio.Sim, isso parece muito bom. Intestino de cupim. Há representantes dos três domínios reconhecidos da vida.Existem protozoários eucarióticos, existem organismos metanogênicos e também existem bactérias. E o nosso laboratório está predominantemente interessado na população bacteriana neste ambiente. Nomeadamente, os SPI kes neste tipo particular de cupim spire keets estão entre os membros bacterianos mais dominantes da comunidade.E nossa pesquisa atual mostra que, na verdade, eles participam em grande parte da redutiva de CO₂ à acetogênese. Assim, esses são apenas vários tipos diferentes de protozoários, e acredita-se que participem, nomeadamente, da quebra primária da madeira. Por isso, acredita-se que contenham xinanases e celulases que permitem aos seus enzimas o acesso a esses polímeros lenhosos.E, em seguida, eles fermentam esses compostos em monômeros de açúcares simples e polímeros que são posteriormente degradados por outros membros da comunidade. E esses protozoários também produzem acetato por si mesmos, mas um de seus subprodutos é hidrogênio e CO2, e esse hidrogênio e CO2 novamente são utilizados ou consumidos pelas populações de acetogênicos neste ambiente. E aqui você pode ver apenas uma grande concentração de organismos protozoários, provavelmente bem ao lado de uma espécie muito grande de trico e infa ali.É um dos maiores organismos presentes no intestino de cupins. Ao descer e observar áreas que não contêm essas grandes células de protozoários, você notará que o fundo, composto por esse tipo de fluido intersticial, também está repleto de espiquetas e outras células bacterianas. Assim, a complexidade não diminui nem mesmo nesses espaços.Uma das coisas que devo destacar é que o volume típico de uma amostra do intestino posterior, como a que analisamos aqui, varia de dois a cinco microlitros, dependendo do tamanho do cupim. Assim, a preparação em montagem úmida que fiz aqui representa, na verdade, uma diluição de pelo menos um para vinte desse ambiente. Portanto, essas espécies estão muito mais densamente concentradas no intestino intacto do que o que é representado aqui.Isso dá uma ideia da densidade, bem como da diversidade da vida nesse ambiente. Hoje mostrei como isolamos o DNA do intestino de cupins com essas amostras purificadas. Agora poderemos aplicar conjuntos específicos de primers direcionados.Isto é, vamos analisar genes que codificam uma desidrogenase, a desidrogenase de monóxido de carbono e a síntese de tetrahidrofolato formal, que são três dos conjuntos de iniciadores desenvolvidos em nosso laboratório. Estamos interessados em estudar a diversidade e as características específicas de sequência de vários desses genes diferentes nesse ambiente. Isso envolverá a amplificação por PCR dos diferentes genes, sua clonagem, sequenciamento e a construção de inventários gênicos.Com base nos resultados, podemos aprender algo sobre a natureza de algumas dessas interações e, especificamente, como essas vias são construídas nesses diferentes microrganismos por meio desse processo.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

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Investigando a comunidade microbiana no intestino grosso da térmita - Entrevista

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