Name: Diferenciação de células-tronco embrionárias em precursores oligodendroglial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Aprenda a diferenciar células-tronco embrionárias de camundongo em precursores oligodendrogliais usando moléculas pequenas. Este método gera células Olig2+NG2+ em 30 dias com alta eficiência.

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Este trabalho foi em parte suportado por concessões para WD de National Institutes of Health (RO1 NS059043 e RO1 ES015988), Multiple Sclerosis Society Nacional, Fundação Roche para Anemia Research, Medical Foundation Feldstein, e os Hospitais Shriners para Crianças. Gostaríamos de agradecer ao Dr. David Prazer e Jennifer Plane para sugestões. Declaramos a inexistência de interesses concorrentes relacionados para este artigo.

Procedimentos detalhados de geração de células precursoras de oligodendrócitos (OPCs) de células de camundongo GFP-Olig2-tronco embrionárias (mESCs): <ol><li> Rato linha celular ES GFP-Olig2 (G-Olig2), é comprado a partir do American Type Culture Collection (ATCC). O mESCs são rotineiramente várias passagens a cada 3 dias para uma camada de fibroblastos irradiados embrionárias de rato alimentador (MEF). As células MEF são banhados em 0,1% de gelatina revestido de seis bem placa de cultura de tecidos, pelo menos, um dia antes passaging CES. O meio de cultura MESC é meio modificado Dulbecco Águia (DMEM) (GIBCO) suplementado com 20% de soro fetal bovino (GIBCO), 2 mM L-glutamina, um piruvato de sódio mM, 0,1 mM β-mercaptoetanol /, 1% aminoácidos não essenciais ( NEAA), e 1.000 U / ml fator inibitório da leucemia. </li><li> colônias MES são tripsinizados (TrypLE, 5 min, 37 ° C) em células individuais e suspensas em knockout soro substituição médio (KSR), então as células são transferidas para um anexo Costar ultra-baixo de seis bem placa (Corning) em uma célula densidade de 50.000 células / cm 2. Nessas condições, mESCs formar corpos embrióides (EBs). Médio KSR consiste de-minimal meio essencial (-MEM) suplementado com 20% KSR, piruvato de sódio 1 mM, NEAA 1% e 0,1 mM β-mercaptoetanol /. </li><li> Do dia 4 ao dia 7, ácido retinóico (RA, 0,2 M) e purmorphamine (Pur, 1 M) são incluídos como mostrado na figura. 1A em KSR ou médio N2. O meio é N2-MEM contendo 1X suplemento N2, piruvato de sódio 1 mM, NEAA 1% e 0,1 mM β-mercaptoetanol /. O meio é alterado todos os dias. </li><li> No dia 8, EBs são desagregados utilizando TrypLE (5min, 37 ° C) e semeadas em 0,01% polyornithine revestido pratos em OPC meio que consiste em N2 médio e fator de crescimento de fibroblastos-2 (FGF-2, 20 ng / ml). O meio é trocada a cada dois dias. </li><li> As células são tripsinizados (TrypLE, 3 min, 37 ° C) e replated aproximadamente a cada semana, quando eles se tornam confluentes. No dia 30, mais de 80% das células mostram GFP/Olig2 expressão e são NG2-positivos, característica de OPCs. </li><li> Para gerar OPCs spiking, o Na + BacMam canal kit é usado para introduzir Na v 1.2 subunidade nestes OPCs MESC derivados. O reagente BacMam (1 ml componente, A) é misturado com PBS para um volume final de 5 ml. Então, o reagente BacMam mista é adicionado em MESC derivados cultura OPCs em um prato de cultura 60 mm (na confluência 50-70%) antes da lavagem com PBS. Após a incubação 2 hr, o reagente BacMam misto é removido e substituído por OPC meio suplementado com 1X enhancer. O enhancer é o componente B reconstituída em DMSO (componente C). Em seguida, após incubação 2 hr adicional de meio com enhancer é removido e substituído com o meio OPC completa. As células são analisadas 24 horas mais tarde. </li></ol> Resultados representativos: Seguindo o protocolo de diferenciação mostrado na figura. 1A, G-Olig2 mESCs foram inicialmente suspensos em meio KSR e para 4 dias para formar corpos embrióides (EBs) (Figura 1B). Então, tratadas seqüencialmente os EBs com AR e Pur. O EBS não apresentaram fluorescência da GFP no dia 4 e expressa de fluorescência da GFP forte em D8 (Figura 1B). Neste ponto do tempo, os EBs foram tripsinizados e banhado em meio suplementado com N2 fatores de crescimento FGF-2. Após o cultivo mais de 22 dias (D30), a porcentagem de células GFP + atingiu 80,3 ± 0,6%, de acordo com nossos resultados de citometria de fluxo. Como mostrado na figura. 1C, GFP + células sobrepostas com NG2 coloração consistente (96,4 ± 1,3% de células GFP positivas foram NG2 positivo, e 94,8 ± 1,5% de células positivas foram NG2 GFP positivas). Assim, estas células expressam GFP/Olig2 e NG2, definindo-os como OPCs. O OPCs MESC derivados (76 células) falhou ao fogo potenciais de ação sobre a despolarização (Fig. 2A). Após transdução com um baculovírus carregando a subunidade Na v 1.2, estes OPCs MESC derivados (94,1%, 16, de 17 células) poderiam ser classificados como spiking (Fig. 2B). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Diferenciação de GOlig-MESC em OPCs. Scheme (A) mostrando o protocolo do corpo embrióides (EB) e baseada em pequena molécula de diferenciação-driven. No D8, os EBs foram desagregados e banhados. As células foram várias passagens uma vez por semana, quando eles se tornaram confluentes. (B) D8, mas não D4 EBs, mostraram expressão GFP. (C) A imunocoloração de NG2 (vermelho) foi consistente com a GFP (verde) expressão em D30. DAPI (azul) foi utilizado para identificar os núcleos. Barra de escala: 20 mm. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Geração de OPCs spiking de nonspiking MESC derivados OPCs por vírus mediada Na expressão v canal. (A) O potencial de membrana foi realizada a -60 mV e MESC derivados OPCs não conseguiu acionar os potenciais de ação, mesmo quando a célula foi despolarizada a 0 mV. (B) Um exemplo de MESC derivados OPCdisparo do potencial de ação (destaque em vermelho) após a transdução viral.

<ol><li>Xian, H., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dividing+Olig2-expressing+progenitor+cells+derived+from+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Dividing Olig2-expressing progenitor cells derived from ES cells.</a> Glia. 47 (1), 88-101 (2004).</li>
<li>Clair, A., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+ES-cell-derived+neural+cells+marked+by+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A subset of ES-cell-derived neural cells marked by gene targeting.</a> Stem Cells. 21 (1), 41-49 (2003).</li>
<li>Evans, M. J., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+in+culture+of+pluripotential+cells+from+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos.</a> Nature. 292, 154-156 (1981).</li>
<li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Shin, S., Xue, H., Mattson, M. P., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-dependent+Olig2+expression+in+motor+neurons+and+oligodendrocytes+differentiated+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Stage-dependent Olig2 expression in motor neurons and oligodendrocytes differentiated from embryonic stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16, 131-141 (2007).</li>
<li>Billon, N., Jolicoeur, C., Ying, Q. L., Smith, A., Raff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+timing+of+oligodendrocyte+development+from+genetically+engineered%2C+lineage-selectable+mouse+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Normal timing of oligodendrocyte development from genetically engineered, lineage-selectable mouse ES cells.</a> J Cell Sci. 115, 3657-3665 (2002).</li>
<li>Nishiyama, A., Lin, X. H., Giese, N., Heldin, C. H., Stallcup, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-localization+of+NG2+proteoglycan+and+PDGF+alpha-receptor+on+O2A+progenitor+cells+in+the+developing+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Co-localization of NG2 proteoglycan and PDGF alpha-receptor on O2A progenitor cells in the developing rat brain.</a> J Neurosci Res. 43, 299-314 (1996).</li>
<li>Ligon, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+NG2+neural+progenitor+cells+requires+Olig+gene+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Development of NG2 neural progenitor cells requires Olig gene function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 7853-7858 (2006).</li>
<li>Dawson, M. R., Polito, A., Levine, J. M., Reynolds, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-expressing+glial+progenitor+cells%3A+an+abundant+and+widespread+population+of+cycling+cells+in+the+adult+rat+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NG2-expressing glial progenitor cells: an abundant and widespread population of cycling cells in the adult rat CNS.</a> Mol Cell Neurosci. 24, 476-488 (2003).</li>
<li>Chittajallu, R., Aguirre, A., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-positive+cells+in+the+mouse+white+and+grey+matter+display+distinct+physiological+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">NG2-positive cells in the mouse white and grey matter display distinct physiological properties.</a> J Physiol. 561, 109-122 (2004).</li>
<li>Karadottir, R., Hamilton, N. B., Bakiri, Y., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiking+and+nonspiking+classes+of+oligodendrocyte+precursor+glia+in+CNS+white+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spiking and nonspiking classes of oligodendrocyte precursor glia in CNS white matter.</a> Nat Neurosci. 11, 450-456 (2008).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Células-tronco embrionárias (CES), isolado a partir de um embrião de blastocisto, podem se diferenciar em todas as linhagens de células do organismo 3, 4, provendo uma in vitro sistema modelo para estudar o desenvolvimento de mamíferos adiantados, incluindo especificação de oligodendrócitos. mESCs foram mostrados para se diferenciar em células precursoras de oligodendrócitos (OPCs) com o tratamento de sonic hedgehog (Shh) 5. Além disso, o Shh induzida diferenciação OPC a partir mESCs mantém o timing correto observado no desenvolvimento embrionário 6. Assim, a natureza da diferenciação in vitro de mESCs OPC é considerado para ser coerente com o que foi aprendido com desenvolvimento in vivo. Aqui, usando a pequenas moléculas RA eo Pur agonista Shh, conseguimos diferenciada do mESCs G-Olig2 em GFP + + Olig2 NG2 + OPCs com alta eficiência. OPCs, caracterizado pela expressão do proteoglicano NG2 7 e do fator de transcrição hélice-alça-hélice Olig2 8, gerar oligodendrócitos no SNC em desenvolvimento e maduras, onde constituem uma percentagem significativa (~ 5%) do total de células e são os principal tipo de célula em proliferação 9. Por quase duas décadas pesquisadores demonstraram Na canais V são expressos em uma subpopulação de OPCs e pode ser activado a despolarização 10, 11. Além disso, uma observação recente impressionante foi que em 9 no SNC de ratos situ substância branca, OPCs (~ 50%) gerados potenciais de ação quando despolarizada, dependendo da expressão de voltagem-dependentes de sódio (Na V) canais, e, portanto, poderia ser subdividida em spiking e nonspiking subpopulações. No entanto, as funções dessas propriedades spiking são ainda desconhecidos. Descobrimos que, eletrofisiologicamente, o MESC OPCs derivados diferenciada com o protocolo Shh-dependente, não eram o mesmo que o cérebro em OPCs situ. Depois de introduzir subunidade Na V 1.2, estas silêncio MESC derivados OPCs eram capazes de spiking. Assim, o spiking / nonspiking MESC derivados OPCs e protocolo de diferenciação descrito aqui pode facilitar (1) estudar as diferenças funcionais entre spiking e nonspiking OPCs, (2) fatores de triagem novo que poderia promover a expressão dos canais de sódio na OPCs MESC derivados, ( 3) desenvolver e optimizar o protocolo de diferenciação de OPCs de humano ESC ou células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs).

<table><tbody><tr><td>MEFs</td><td>GlobalStem</td><td>GSC-6001G</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Invitrogen</td><td>12604</td><td></td></tr><tr><td>Ácido retinóico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-2625</td><td></td></tr><tr><td>Purmorphamina</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009634</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>EMD Millipore</td><td>GF003</td><td></td></tr><tr><td>BacMam Na&lt;sub&gt;V&lt;/sub&gt; 1.2</td><td>Invitrogen</td><td>B10341</td><td></td></tr></tbody></table>

diferenciação de células-tronco embrionárias em precursores oligodendroglial

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Oligodendrócitos são as células myelinating do sistema nervoso central. Para terapia celular regenerativa em doenças desmielinizantes, há um interesse significativo na derivação de uma população pura de linhagem comprometida células precursoras de oligodendrócitos (OPCs) para transplante. OPCs são caracterizadas pela atividade da Olig2 fator de transcrição e expressão de superfície de um proteoglicano NG2. Usando o GFP-Olig2 (G-Olig2) mouse com células-tronco embrionárias (MESC), linha repórter, nós otimizamos as condições para a diferenciação de mESCs em GFP + + Olig2 NG2 + OPCs. Em nosso protocolo, primeiro descrever a geração de corpos embrióides (EBs) de mESCs. Segunda, descrevemos o tratamento de MESC derivados EBs com pequenas moléculas: (1) ácido retinóico (AR) e (2) um ouriço sónico purmorphamine agonista (Shh) (Pur), sob condições de cultura definidas para direcionar a diferenciação EB na linhagem oligodendroglial. Por esta abordagem, OPCs pode ser obtido com alta eficiência (&gt; 80%) em um período de 30 dias. Células derivadas de mESCs neste protocolo são fenotipicamente semelhante a OPCs derivados de cultura de tecidos primários. O OPCs MESC derivados não apresentam a propriedade spiking descrito para uma subpopulação de OPCs cérebro in situ. Para estudar esta propriedade eletrofisiológicos, descrevemos a geração de spiking MESC derivados OPCs por ectopicamente expressando Na<sub&gt; V</sub&gt; 1,2 subunidade. As células spiking e nonspiking obtidos a partir deste protocolo vai ajudar a avançar os estudos funcionais sobre as duas subpopulações de OPCs.

Descrevemos uma molécula baseada em pequenas protocolo para a diferenciação de células-tronco embrionárias de camundongos em células precursoras de oligodendrócitos (OPCs). Este protocolo gera Olig2 + + NG2 OPCs com alta eficiência por 30 dias de diferenciação. Nós também descrevem um método para gerar &quot;spiking&quot; OPCs que pode disparar potenciais de ação.

Diferenciação de células-tronco embrionárias em precursores oligodendroglial

Os oligodendrócitos são as células mielinizantes do sistema nervoso central. Para a terapia celular regenerativa em doenças desmielinizantes, há um interesse significativo...

O objetivo geral do experimento a seguir é gerar precursores de oligodendrócitos a partir de células-tronco embrionárias por meio de uma série de etapas de cultivo ao longo de 30 dias. Isso é alcançado inicialmente pela formação de corpos embrionários a partir de células ES de camundongo para iniciar a diferenciação celular. Como segundo passo, os corpos embrionários são tratados com as moléculas pequenas ácido retinóico e morfina pura, que induzem a diferenciação direcionada das células em uma liga den.Precursores de citos. Como terceira etapa, os corpos embrionários são dissociados em células individuais após mais 22 dias. Em cultura, aproximadamente 80% das células são OPCs.Em seguida, os OPCs derivados de MESC são transduzidos com vírus bao que carreiam a subunidade NAV 1.2 para gerar OPCs geradores de potenciais de ação. Os resultados obtidos demonstram a expressão do marcador de OPC e as propriedades de geração de potenciais de ação desses OPCs derivados de MESC, com base em microscopia de imunofluorescência e gravações eletrofisiológicas. Olá, sou Pong Chiang do laboratório da Dra. Ing, do Departamento de Biologia Celular e Anatomia Humana da Universidade da Califórnia em Davis. Também estamos vinculados ao Hospital Shriners para Crianças do Norte da Califórnia.Olá, sou Vial Raj, também do laboratório Deng. Hoje vamos mostrar um procedimento para a diferenciação de células-tronco embrionárias de camundongo em células precursoras de oligodendrócitos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar as propriedades de precursores de oligodendrócitos derivados de células-tronco embrionárias, com o objetivo de gerar células com maior potencial terapêutico.Então vamos começar. Hoje, células precursoras de oligodendrócitos ou OPCs serão geradas a partir da linhagem de células-tronco embrionárias de camundongo OG2 GFP. Essas células-tronco embrionárias precisam ser repassadas a cada três dias para mantê-las saudáveis em uma densidade ideal e para evitar diferenciação espontânea. Repasse.Células ESS quando estão com 70% de confluência sob uma capela de fluxo laminar. Remova o meio sobre a cultura. Lave com PBS e adicione tripsina aos olhos com dois mililitros de pré-aquecimento.Uma passagem em LE expresso por cinco minutos a 37 graus Celsius. Interrompa a reação e resuspenda as células em quatro mililitros de meio celular MES. Transfira as células para um tubo cônico de 15 mililitros e pelote-as a 1000 RP por cinco minutos.Resuspenda em meio de placa MESL, um décimo das células sobre uma camada de fibroblastos irradiados com metionina em meio para células MES. Após três dias, as células ES estão aproximadamente 70% confluentes e estão prontas para serem repassadas ou suspensas para formar corpos embrionários, induzindo assim a formação de corpos embrionários e iniciando a diferenciação. Tripsinize as colônias de células ES de camundongo como antes e, em seguida, resuspenda as células em meio com substituto de soro knockout ou meio KSR. Conte as células em um hemo TER, dilua a suspensão em KSR.Médio até 15.000 células por mililitro, plaque três mililitros em cada poço de uma placa de cultura ultrabaixa adesão com seis poços. Incube as células suspensas a 37 graus Celsius por quatro dias. Troque o meio completamente a cada dois dias.A partir do quarto dia, substitua o meio diariamente no quarto dia. Suplemente o KSR com 0,2 micromolar de ácido retinóico no quinto dia e com ácido retinóico e um micromolar de primor famine nos sexto e sétimo dias. Alimente os corpos embrionários com dois meios, suplementados com 0,2 micromolar de ácido retinóico e um micromolar de primor famine. Após oito dias em cultura, a maioria dos corpos embrionários expressa GFP e está pronta para ser dissociada com tripsina, e as células devem ser contadas como anteriormente.Em seguida, reconstitua-os a 3,5 × 10⁵ células por mililitro. Em meio OPC, reconstitua três mililitros da suspensão em meio OPC. Usando placas de 60 milímetros revestidas com poliornitina, aproximadamente a cada semana, as células ficarão confluente e terão esta aparência; passe as células como antes, com uma tripsinização de três minutos.30 dias após a suspensão inicial de ressus. Em meio KSR, as células apresentam características de células precursoras de oligodendrócitos para gerar OPCs com despolarização. Utilize OPCs derivadas de ESL de camundongo que estejam entre 50 e 70% confluentes.Troque o meio por um XPBS para lavar as células. Para introduzir o canal de sódio sensível à voltagem. Subunidade alfa 1.2.Utilizamos o kit do canal de sódio back MAM. Misture um mililitro do componente A do back MAM com quatro mililitros de um XPBS. Remova a lavagem com PBS e adicione o componente diluído.Incubar a 37 graus Celsius por duas horas. Substitua o agente de repouso pela média OPC enriquecida com os componentes B e C conforme descrito no kit. Instruções: incubar por mais duas horas a 37 graus Celsius.Após a incubação, substitua o meio enriquecido por meio OPC fresco. Após mais 24 horas de cultivo, os OPCs derivados de ESL podem ser analisados quanto à atividade de disparo neste ponto temporal. Os EBS não apresentam qualquer fluorescência GFP.Os EBS apresentam forte expressão de GFP e estão prontos para o cultivo por desagregação cerca de 30 dias após a suspensão inicial de ressus. No meio KSR, a maioria das células é imunopositiva para a coloração NG2, o que é consistente com a expressão de GFP. No entanto, ao contrário dos OPCs cerebrais, esses OPCs derivados de células MES não geram potenciais de ação, mesmo quando as células são despolarizadas até zero milivolts.Após a introdução da subunidade NAV 1.2 por transdução viral, essas CPO derivadas de células MES ficam excitadas e disparam potenciais de ação. Acabamos de mostrar como diferenciar células-tronco embrionárias de camundongo em CPOs e gerar CPOs com despolarização por meio de transdução viral. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar de armazenar adequadamente o ácido retinóico, a morfina e o FGF dois e sempre usar alíquotas frescas, descartando qualquer excesso de ácido retinóico após o uso.Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

differentiation-embryonic-stem-cells-into-oligodendrocyte

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este protocolo descreve a derivação de gliais Precursores restritos a partir de medulas espinais fetais e mantido in vitro, quer para transplantação ou para o estudo da linhagem oligodendrocytic.

Derivação da glia Precursores restritos de camundongos E13

Primário, fetais humanos derivado do cérebro, as células progenitoras multipotenciais...

Progenitor derivado Sistema de Cultura oligodendroglial Cérebro Fetal Humano

Este vídeo demonstra um protocolo detalhado para isolar as paredes laterais do ventrículo do cérebro de camundongo adulto e realizar a dissociação enzimática do tecido para obter células únicas. Essas células são então submetidas a condições específicas de cultura que aumentam seletivamente a proliferação de células-tronco neurais e promovem sua diferenciação em co-culturas de oligodendrócitos e astrócitos.

Obtenção de uma cultura mista de oligodendrócitos e astrócitos a partir de células-tronco neurais de camundongos adultos

Este vídeo demonstra o processo de geração de células precursoras de oligodendrócitos (OPCs) a partir de células-tronco embrionárias humanas, seguido pela maturação de OPCs em oligodendrócitos. Esse processo de geração de oligodendrócitos abre vários caminhos para melhorar a pesquisa e o tratamento de doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Alzheimer.

Diferenciando células-tronco embrionárias humanas em oligodendrócitos

Este vídeo demonstra o estabelecimento de uma co-cultura de neurônios induzidos humanos (iNs) e células precursoras de oligodendrócitos induzidos (iOPCs). Os iNs são misturados com iOPCs em uma co-cultura e depois incubados para apoiar a maturação de ambos os iNs em neurônios e iOPCs em oligodendrócitos. Os neurônios formam conexões sinápticas com outros neurônios e oligodendrócitos, enquanto os oligodendrócitos desenvolvem bainhas de mielina ao redor dos axônios dos neurônios.

Um método de co-cultura para modelar interações neurônio-oligodendrócitos

Os oligodendrócitos são as células mielinizantes do sistema nervoso central. Este protocolo descreve um método para o isolamento e cultivo de seus precursores, células progenitoras de oligodendrócitos, a partir de córtices de ratos, bem como um método quantitativo rápido e confiável para avaliar a oligodendrogênese in vitro em resposta a fatores experimentais.

Preparação de culturas de Rat Oligodendrocyte progenitoras e quantificação de Oligodendrogenesis Usando Scanning Fluorescência Dual-infravermelho

Este protocolo descreve um método para gerar progenitores interneurônio cortical e pós mitóticas interneurônio precursores de células-tronco embrionárias rato usando um método modificado de corpo-a-monocamada do embryoid. Estes precursores/progenitores pode ser usado em vitro fluorescente classificada e transplantado para o neocórtex neonatal para estudar a determinação do destino ou usado em aplicações terapêuticas.

Diferenciação de células estaminais embrionárias de rato em Cortical interneurônio precursores

Descrevemos o isolamento de Fima de oligodendrócitos mouse principal, que permite o isolamento das células para cultura em vitro rápido e específico.

Isolamento de Fima rápida e específica de oligodendrócitos primário de Mouse

Apresentado aqui é um protocolo para a geração de uma cultura unicelular de células-tronco embrionárias humanas e sua diferenciação subseqüente em células progenitoras neurais. O protocolo é simples, robusto, escalável e adequado para rastreamento de medicamentos e aplicações de medicina regenerativa.

Diferenciação neural eficiente usando a cultura unicelular de células-tronco embrionárias humanas

As interações neurônio-glial na neurodegeneração não são bem compreendidas devido a ferramentas e métodos inadequados. Aqui, descrevemos protocolos otimizados para obter neurônios induzidos, células precursoras de oligodendrócitos e oligodendrócitos de células-tronco pluripotentes humanas e fornecemos exemplos dos valores desses métodos na compreensão das contribuições específicas do tipo celular na doença de Alzheimer.

Geração de neurônios humanos e oligodendrócitos a partir de células-tronco pluripotentes para modelagem de interações neurônio-oligodendrócitos

Descrevemos a produção de culturas mistas de astrócitos e células precursoras oligodendrocytes derivadas de células-tronco neurais fetais ou adultas se diferenciando em oligodenrócitos maduros, e modelagem in vitro de estímulos nocivos. O acoplamento com uma técnica de triagem de alto conteúdo baseada em células constrói um sistema de triagem de drogas confiável e robusto.

Análise de diferenciação e maturação de rastreamento de alto conteúdo das culturas celulares precursoras do Oligodendrocyte, derivadas de células-tronco-tronco-tronco-de-alto teor

Aprenda a diferenciar células-tronco embrionárias de camundongo em precursores oligodendrogliais usando moléculas pequenas. Este método gera células Olig2+NG2+ em 30 dias com alta eficiência.

Diferenciação de células-tronco embrionárias em precursores oligodendroglial

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