Aparelho novo e Método para Reforço de Drogas

Este vídeo demonstra uma nova abordagem no estudo do abuso de drogas, combinando procedimentos tradicionais de preferência condicionada ao local e de automadministração. Primeiro, determina-se a preferência basal por dois ambientes operantes distintos. Em seguida, iniciam-se sessões de automadministração nas quais os ratos automadministram cocaína em apenas um dos ambientes operantes distintos.

Após o condicionamento, mede-se o tempo que os animais escolhem passar em qualquer um dos ambientes operantes; em seguida, podem ser medidas e correlacionadas as alterações no lugar, na preferência e nas taxas de automedicação com drogas. Olá, sou Allison Fiducia do laboratório da Dra. Christine Elle, da Faculdade de Farmácia, divisão de farmacologia e toxicologia da Universidade do Texas em Austin. E eu sou Christine Elle.

Hoje gostaríamos de apresentar a vocês um novo aparato que pode ser usado de várias maneiras diferentes para estudar reforço farmacológico e dependência em ratos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar os efeitos condicionados da automedicação de cocaína. Então, vamos começar.

Para iniciar os preparativos para experimentos de reforço farmacológico, treine primeiramente ratos machos para pressionar uma alavanca em troca de uma recompensa alimentar. Em seguida, construa cateteres intravenosos, que serão usados para a automedicação com drogas. Os cateteres são feitos de cânula de aço inoxidável e tubo Celeste e devem ser lavados com metanol e água.

Em seguida, deixe-os secar ao ar durante a preparação no dia da cirurgia e banhe-os em etanol 70%. Quando os cateteres estiverem prontos, os ratos são submetidos a um procedimento cirúrgico de cateterização da jugular para permitir a automedicação com drogas. Durante os experimentos, anestesie um rato com dois e meio a 4% de isoflurano.

Em seguida, depile a cabeça e o tórax, desinfete as áreas com solução de Betadine. Depois, coloque-o sobre uma gaze estéril após a cirurgia. Monitore a rata por várias horas antes de devolvê-lo à colônia animal.

Mantenha a perviedade do cateter com lavagem diária com 0,1 mililitros de uma solução de salina a 0,9%, heparina e mentol para preparar a cocaína utilizada nos experimentos, dissolvendo-a em uma solução salina isotônica nas concentrações apropriadas de dose de acordo com os pesos dos animais, com os animais e a administração do fármaco preparados. Vamos analisar o equipamento utilizado durante os experimentos. O equipamento utilizado durante os experimentos é composto por duas câmaras com alavanca simples, equipadas com luzes ambiente e de estímulo, e três conjuntos de feixes de luz fotoelétricos, que são usados para medir a atividade locomotora.

As câmaras são ligadas umas às outras por um corredor de plexiglás construído. O corredor é composto por duas paredes pretas com listras brancas e duas paredes metálicas, um teto de plexiglás transparente e um piso de plexiglás branco. As duas câmaras operantes possuem pisos em grades de aço instalados sobre fundos removíveis de gaiola metálica.

Sinais visuais e olfativos são colocados dentro da câmara operante para criar ambientes únicos e distinguíveis. Em um dos ambientes, o animal ameaçado terá acesso a injeções de cocaína. No ambiente alternativo, o animal ameaçado terá acesso apenas a injeções de solução salina.

Os estímulos visuais consistem em material de feltro branco ou preto fixado nas paredes frontal e traseira e sobre a parte superior da gaiola. Os estímulos olfativos são óleos essenciais de linhaça ou canela impregnando uma bola de algodão localizada sob o piso da câmara para roedores. Durante os experimentos, as respostas do Libra e os dados de atividade locomotora são registrados com um computador Med Pentium de 100 megahertz equipado com software med PC.

Agora que vimos o aparato experimental, vamos ver como coletar os dados. O procedimento experimental ocorre em vários dias, começando com testes de preferência basais que duram dois dias, seguidos por sessões de automedicação com drogas que duram oito ou 16 dias e terminando com um teste de preferência condicionada ao lugar. Para começar a coletar as medidas de preferência basal, coloque a rata na alameda central com acesso a ambas as câmaras operantes por 20 minutos.

Imediatamente após colocar a rata na câmara, ative simultaneamente o programa de software da câmera de vídeo no PC e o cronômetro. Após 20 minutos, retire a rata da câmara e coloque-a de volta na gaiola de origem. No dia seguinte ao último teste de linha de base, inicie as sessões de automedicação com drogas.

Primeiro, posicione os estímulos sensoriais e, em seguida, coloque um painel para bloquear o acesso do corredor central de plexiglass à câmara. Agora, conecte a entrada do cateter do animal à seringa de droga montada para iniciar a sessão. Primeiro, coloque o animal dentro da câmara.

Após fechar a porta da câmara operante, inicie o programa Med PC e o cronômetro para que a cocaína esteja disponível por uma hora. A cocaína é administrada utilizando um esquema de reforço de razão progressiva. Esse esquema exige um número progressivamente maior de respostas na alavanca para receber cada injeção subsequente de cocaína.

Cada injeção consiste em uma dose de 0,75 miligramas por quilograma em dias alternados. No ambiente alternativo, o esquema de razão progressiva também é utilizado para injeções de solução salina. Ao final de cada sessão de automadministração, desconecte o envoltório do tubo de administração da droga, remova-o da câmara e devolva-o à gaiola de origem.

No dia seguinte à última sessão de automedicação, realize o teste de preferência condicionada ao local. O procedimento para este teste é o mesmo utilizado nas medições basais. Agora, vejamos como avaliar e analisar os dados.

Durante a avaliação dos dados e a atribuição cega dos grupos pelo experimentador, determina-se o tempo que o animal passou em cada compartimento. O experimentador analisa a gravação em vídeo para contar as entradas e saídas entre os compartimentos durante um período de 15 minutos, iniciando cinco minutos após a colocação do animal no aparelho. Os mesmos procedimentos são utilizados para determinar a preferência basal e os escores do teste de condicionamento por preferência por lugar (CPP).

As diferenças entre as medições iniciais e os escores de CPP pós-condicionamento são utilizadas para determinar os efeitos do condicionamento farmacológico. Os escores de diferença pós-condicionamento são calculados subtraindo o tempo gasto no compartimento pareado com a substância inerte do tempo gasto no compartimento pareado com a droga durante o teste de CPP. Os escores de diferença basais são calculados de maneira semelhante e subtraídos dos escores de diferença de CPP.

Pode-se realizar análise estatística sobre as diferentes alterações nos escores do valor inicial até as sessões de teste para determinar os efeitos do condicionamento com drogas. É apresentado aqui um gráfico representativo dos escores iniciais e de teste do CPP. Os escores de teste do CPP foram significativamente maiores do que os escores iniciais, indicando preferência pelo ambiente associado à cocaína.

Após o condicionamento, a análise de correlação para as respostas totais de saída da droga e os escores da diferença no teste de PPL são ilustrados aqui. O grupo de longo prazo com cocaína foi o único grupo a apresentar uma correlação positiva significativa entre as respostas de saída da droga e os escores do teste de PPL. Acabamos de mostrar como combinar métodos tradicionais de condicionamento, preferência por lugar e automadministração para uma abordagem inovadora no estudo do reforço farmacológico em ratos.

Ao realizar este procedimento, é importante manter um bom controle de registros. É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.