Geração de Mamosferas Primárias: Uma Técnica para Determinar a Potência Celular

Uma única célula-tronco do câncer de mama dá origem a um aglomerado de células chamado mamosfera primária. Para obtê-los, primeiro cultive uma linhagem de câncer de mama até 70% a 80% confluente, para garantir que as células estejam em fase de crescimento. Adicione Tripsin-EDTA para separar as células do frasco e adicione um meio com soro para interromper a ação da Tripsin.

Agora, pegue as células em um tubo e centrifugue para obter o pellet celular. Ressuspenda o pellet no meio da mamosfera sem soro e passe a suspensão por um filtro de tampa de filtro de células, para obter uma suspensão de célula única. Esta suspensão consiste em células-tronco, células progenitoras e células diferenciadas que apresentam diferentes expressões proteicas.

CD44 e CD24 são proteínas de superfície celular características das células-tronco do câncer de mama. Eles são positivos para expressão de CD44 e negativos para CD24. Isole as células da suspensão celular usando fluorescência ou classificação celular ativada por magnetismo. Em seguida, pegue uma alíquota e uma coloração azul de tripano nas células e calcule o número de células viáveis por mililitro usando uma lâmina de hemocitômetro para encontrar