Name: Transplante Limb-Hind ortotópico em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Aprenda o transplante ortotópico de membro posterior em ratos para estudar lesões de isquemia e reperfusão e eventos imunológicos de rejeição de aloenxertos. Este modelo padrão ouro auxilia pesquisadores a desenvolver estratégias de imunomodulação direcionada.

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Operação dos doadores e Limb Hind-Colheita <ol><li> Para o procedimento operatório um conjunto estéril de instrumentos de microcirurgia é utilizado. O cirurgião deve usar vestuário adequado, incluindo luvas estéreis, que devem ser alterados antes do início do procedimento cirúrgico. </li><li> O rato é anestesiados com injeção intraperitoneal de pentobarbital (50mg/kg IP) e colocado em posição supina em um campo de operação aquecida, o que facilita a temperatura do corpo estável animais durante todo o procedimento cirúrgico. </li><li> Antes da incisão na pele do campo da operação é higienizado três vezes com ambos, um desinfetante e álcool. Para evitar que as córneas animais de secagem para fora, os olhos são lubrificados com uma pomada oftálmica (Vidisic) antes da cirurgia. </li><li> A incisão na pele é feita através da virilha direita aproximadamente ao nível do ligamento inguinal. Os vasos femorais são dissecados livre com cautério bipolar e dissecção romba; ramos profundos são ligados com 8-0 seda. </li><li> 300 ul (50 UI) de heparina são injetadas pela veia peniana de anti-coagulação. </li><li> Vasos femorais são ligadas ao nível do ligamento inguinal e cortou distal à ligadura. </li><li> Do membro posterior é lavada com gelado (4 ° C) solução HTK (5ml), através da artéria femoral mais de 5 minutos. </li><li> Todos os grupos musculares estão fortemente divididos com uma tesoura e osteotomia é realizada com uma tomada elétrica rotativa viu no nível do terço distal do fêmur. </li><li> O membro colhida é então imerso em 20 mL de solução gelada HTK para preservação e armazenamento a frio até o transplante. </li></ol> Destinatário Operação e Transplante <ol><li> O rato é anestesiados com injeção intraperitoneal de pentobarbital supina e colocado no campo de operação. </li><li> A incisão na pele é feita através da virilha direita aproximadamente ao nível do ligamento inguinal. Os vasos femorais são dissecados livre com cautério bipolar e dissecção romba. </li><li> Vasos femorais estão ligados o mais distal possível, mas proximal para a decolagem navio epigástrica. Pinças vasculares são colocados ao nível do ligamento inguinal na artéria e veia. </li><li> Um cuff de polietileno é puxado sobre a artéria (diâmetro interno cuff: 0,912 mm, espessura da parede cuff: 0,010 mm, comprimento do manguito: 2,0 mm) e veia (diâmetro interno cuff: 1,151 milímetros; manguito parede de espessura: 0,010 mm, comprimento do manguito : 2,0 mm). A borda do lúmen do vaso é então puxado com um vaso dilatador e da artéria femoral e da veia são evertido em todo o corpo do manguito (aproximadamente 2mm) e fixada com uma ligadura de seda circunferencial 8-0. </li><li> Para abrir espaço para o membro doador do membro receptor é removido com dissecção aguda de grupos musculares e osteotomia é realizada em meados da década de fêmur. </li><li> O membro doador é retirado da solução HTK e transplante começa com osteossíntese do fêmur usando uma agulha de calibre 18 (comprimento: 1.5-2.0 cm) como uma haste intramedular. </li><li> Grupos musculares ventrais estão intimamente aproximada com Vicryl 4-0 Prolene ou suturas interrompidas. </li><li> Anastomoses vasculares são realizadas por puxar a veia e artéria doadora sobre a veia destinatários e complexo manguito. A ligadura de seda 8-0 circunferencial é novamente colocada para proteger a anastomose. </li><li> O grampo venoso é liberado seguido pelo clamp arterial, e reperfusão é visualizado pelo retorno da cor ao membro distal e pé, bem como o fluxo pulsátil através da artéria. </li><li> Os restantes grupos musculares dorsais são re-aproximação com Vicryl 4-0 Prolene ou suturas interrompidas. </li><li> A pele é fechada com vicryl 4-0 ou prolene suturas interrompidas. </li><li> O rato destinatário é colocado sobre uma almofada de aquecimento e acompanhada de perto até a recuperação. </li><li> Animais destinatário receber antibiótico profilático (cefazolina, 20 mg / dia, IM) e Buprenex (0,1 mg / kg, SC) por três dias após o transplante. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Décadas de pesquisa experimental e permitiu que o precederam transplante de mão bem-sucedido humanos no passado recente. Em 1978, Shapiro et al. desenvolveu um modelo de transplante ortotópico traseiras membro em ratos, bem adequado para estudar vários aspectos patológicos, fisiológicos e imunológicos, bem como o resultado funcional dos enxertos de tecido composto. Nós modificamos a parte mais desafiadora do processo, ou seja, a anastomose vascular, através da introdução de uma técnica não-cuff sutura. Quando comparada ...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparina Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução Custodiol HTK</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura para Adventícia</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pinça</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dilatadora</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de Poliamida</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

transplante limb-hind ortotópico em ratos

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Alógenos de tecido composto (CTA) agora representa uma opção terapêutica válida após a perda de uma mão, antebraço ou dígitos e tornou-se uma nova entidade terapêutica em cirurgia reconstrutiva. No entanto, a longo prazo de altas doses de terapia multi-droga imunossupressora é necessária para garantir a sobrevida do enxerto, com o risco de efeitos secundários graves que cabrestos mais ampla aplicação. Progressão neste campo pode depender de uma melhor compreensão da imunologia básica e isquemia e reperfusão em enxertos de tecido composto. Até o momento, o transplante ortotópico membro pélvico em ratos tem sido o modelo preferido para roedores reconstrutiva transplante (RT), no entanto, é um procedimento extremamente exigente, que requer técnicas de microcirurgia extraordinária para o reatamento da vasculatura, ossos, músculos e nervos. Nós introduzimos a técnica de anastomose vascular manguito a este modelo, oferecendo uma abordagem rápida e confiável para o transplante dos membros posteriores de ratos. Esta técnica simplifica e encurta o procedimento cirúrgico e permite que os cirurgiões com experiência microcirúrgica básico para conseguir realizar a operação com a sobrevivência alta e baixas taxas de complicação. A técnica parece ser adequada para imunológica, assim como lesão de reperfusão de isquemia (IRI) estudos.

Aqui nós descrevemos o rato ortotópico membro-hind procedimento de transplante, o que parece ser o padrão ouro<em&gt; In vivo</em&gt; Modelo para a pesquisa composta de tecido alotransplante.

Transplante Limb-Hind ortotópico em ratos

O alotransplante de tecido composto (ATC) representa agora uma opção terapêutica válida após a perda de uma mão, antebraço ou dedos, e tornou-se um novo ...

Sou Robert Suha do Laboratório de Pesquisa Daniels Roski do Departamento de Transplante Visceral e Cirurgia Torácica da Universidade Médica de Innsbrook. Hoje vamos mostrar a vocês o procedimento de transplante de membro em rato, introduzindo uma técnica de mangueira para revascularização. Esta cirurgia de transplante de membro em rato é realizada pelos nossos residentes cirúrgicos, incluindo eu mesmo.Utilizamos este modelo animal para estudar lesões associadas à isquemia e reperfusão em um enxerto alogênico de tecido compósito. Além disso, empregamos este procedimento para investigar eventos imunológicos da rejeição de enxertos alogênicos de tecido compósito, bem como estratégias para prevenir a ocorrência de rejeição. Essas estratégias incluem a minimização ou até mesmo a eliminação da imunossupressão de manutenção por meio do uso de regimes imunomoduladores direcionados.O procedimento de transplante do membro posterior vermelho começa com a coleta do enxerto de tecido compósito doador, no qual o membro posterior direito é removido da rata doadora e armazenado em gelo. Em seguida, o membro posterior direito é removido da rata receptora para abrir espaço para o membro doador. O membro doador é então retirado do gelo e transplantado para a rata receptora.Neste modelo, as anastomoses vasculares são realizadas utilizando uma técnica de cânula. Para nossos experimentos, foram utilizados ratos machos Louis Reds pesando 250 gramas. A anestesia foi induzida por injeção intraperitoneal de pentobarbital a 50 miligramas por quilograma.O rato anestesiado é depilado e higienizado na região da virilha e do membro para o procedimento. É necessário um conjunto completo de instrumentos microcirúrgicos, incluindo pinças microcirúrgicas retas, tesouras, dilatadores de vasos e duas pinças curvas. Além disso, os instrumentos mais importantes são os grampos microcirúrgicos para vasos mostrados aqui.Para testar a profundidade da anestesia, utiliza-se o reflexo ao aperto do dedo do pé. O rato é colocado sobre uma plataforma estéril e fixado com os quatro membros em extensão total antes da incisão. O membro é afastado livremente de qualquer eixo aqui para prevenir contaminação.Uma incisão é feita ao longo da região inguinal direita, aproximadamente no nível do ligamento inguinal. Os vasos femorais aparecem imediatamente abaixo da pele e são dissecados com pinça bipolar e dissecação romba. Os vasos epigástricos são então dissecados e cauterizados.Um único laço como sutura de sustentação é colocado ao redor da veia e da artéria para permitir tração sem manipular diretamente os vasos com instrumentos após a separação. Os ramos profundos da artéria e da veia são ligados com sutura de seda 8-0 proximalmente e cauterizados distalmente antes da colheita do membro doador. São administradas 50 unidades de heparina pela veia peniana.Após um minuto, a atenção é voltada novamente para os vasos femorais. A artéria femoral é ligada o mais aproximadamente possível utilizando fio de seda 8-0, e o mesmo procedimento é repetido para a veia femoral. Ambos os vasos são então cortados distalmente à ligadura e o membro posterior é perfundido através da artéria com solução HDK heparinizada e gelada durante cinco minutos.Em seguida, todos os grupos musculares são cuidadosamente divididos com tesoura. A osteotomia é realizada com uma serra elétrica rotatória ao nível do terço distal do fêmur. O membro colhido é então submerso em 20 mililitros de solução HDK gelada para preservação e armazenamento sob refrigeração até o transplante.A operação no receptor começa de forma semelhante à operação no doador, com o isolamento e a dissecação dos vasos femorais. Após uma dissecação cuidadosa, os vasos são ligados utilizando fio de seda 8-0 o mais distal possível, mas proximal à emergência dos vasos epigástricos. Em seguida, prosseguimos com a montagem da veia do receptor no manguito, puxando o manguito poliuretano sobre o vaso.Uma única pinça é aplicada proximalmente ao manguito sobre a veia e ao cabo do manguito para garantir hemostasia completa. A ligadura na extremidade distal da veia é cortada e a veia é, então, evertida sobre o manguito. Uma ligadura 8-O é amarrada circunferencialmente ao redor do vaso e do manguito, fixando a veia receptora no lugar.O mesmo procedimento exato é realizado para a artéria com a braçadeira de diâmetro menor. O membro receptor é dissecado de maneira semelhante ao membro doador, com dissecação afiada dos grupos musculares e osteotomia realizada no terço médio do fêmur. Agora estamos prontos para transplantar o membro posterior.O membro doador é removido da solução HDK. O transplante começa com a osteossíntese do fêmur utilizando uma agulha de calibre 18 como haste intramedular. A ponta é cortada e a agulha restante é cortada entre um centímetro e meio a dois centímetros.Os grupos musculares ventrais são aproximados firmemente com quatro suturas interrompidas de Vicryl ou prolina para estabilizar o membro e preparar para a anastomose vascular. Para a anastomose com luva (cuff), a veia do doador é dilatada, puxada sobre a veia e luva do receptor e fixada com outra ligadura circunferencial de oito pontos. O mesmo procedimento é realizado para a artéria do doador.Finalmente, uma vez que ambos os vasos estejam estáveis, a braçadeira venosa é liberada, seguida pela braçadeira arterial. A reperfusão é imediata e facilmente visualizada pela volta da coloração do membro distal e do pé, bem como pelo fluxo pulsátil através da artéria. Os demais grupos musculares dorsais são reaproximados.A pele é fechada com pontos simples separados de Vicryl 4-0 ou prolina, e o transplante está completo no pós-operatório. O animal é aquecido em uma almofada térmica e recebe analgésicos e antibióticos. O animal é monitorado cuidadosamente por 48 a 72 horas em busca de sinais de sofrimento ou complicações cirúrgicas.A técnica de anastomose com manguito tem sido amplamente realizada em diversas áreas de pesquisa cirúrgica nas últimas décadas, desde modelos de transplante renal em organismos marinhos até modelos de transplante cardíaco heterotópico. Ela permite o estudo de vários aspectos da lesão isquêmica, lesões associadas à reperfusão, bem como fenômenos imunológicos. Após o nosso transplante.Aqui apresentamos a primeira aplicação dessa técnica única de anel para transplante de tecidos compostos de membro. Em um modelo animal pequeno, a técnica de anel reduz significativamente o tempo cirúrgico, a expertise microcirúrgica exigida pelo operador e a perda sanguínea intraoperatória quando comparada às técnicas convencionais de sutura para anastomose.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Nós apresentamos uma revisão fácil de estabelecer a técnica de dois manguito clássica para transplante hepático em ratos.

Transplante hepático ortotópico experimental em ratos

O transplante hepático em ratos é um modelo indispensável experimental para a pesquisa biomédica. Aqui apresentamos nossos procedimentos cirúrgicos para transplante ortotópico do fígado do rato com a reconstrução da artéria hepática utilizando um enxerto parcial de 50%.

Procedimentos cirúrgicos para um modelo de rato de Transplante de Fígado parcial ortotópico com reconstrução arterial hepática

Este novo modelo de transplante de membro posterior ortotópico em ratos, aplicando uma técnica manguito não sutura para a anastomose super-microvascular, fornece uma ferramenta poderosa para in vivo pesquisa imunológica mecanicista relacionadas com alotransplante composta vascularizado (VCA).

Ortotópico Hind Limb Transplantation no mouse

O allograft composto vascularized oferece benefícios Life-alterando aos receptores da transplantação, mas as causas biológicas da rejeição da corrupção e do vasculopatia permanecem mal compreendidas. O modelo cirúrgico do roedor apresentado aqui apresenta um modelo de transplante reprodutível e clinicamente relevante, permitindo que os pesquisadores avaliem eventos de rejeição e potenciais estratégias terapêuticas para prevenir sua ocorrência.

Modelo Osteomyocutaneous Heterotopic modificado da aleta do Hindmembro no rato para a pesquisa de Allotransplante composta Vascularized translacional

Este protocolo apresenta um modelo robusto e reprodutível de alotransplante composto vascularizado (VCA) voltado para o estudo simultâneo de imunologia e recuperação funcional. O tempo investido em técnica meticulosa em um transplante ortotópico do membro traseiro da coxa direita com anastomoses vasculares costurados à mão e coaptation neural produz a capacidade de estudar a recuperação funcional.

Dando o próximo passo: um modelo de transplante ortotópico ortotópico de coaptation ortotópico para maximizar a recuperação funcional em ratos

Descrevemos um modelo de transplante de coração abdominal heterotópico em ratos, implicando modificações nas estratégias atuais, que levam a uma abordagem cirúrgica simplificada. Além disso, descrevemos um novo modelo de rejeição pela injeção in-ear de células musculares cardíacas vitais, permitindo novas análises imunológicas de transplante em ratos.

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Este artigo apresenta um protocolo de transplante de retalho osteomyocutâneo heterotópico em ratos e seus resultados potenciais no acompanhamento a médio prazo.

Modelo de transplante de hindlimb heterotópico parcial em ratos

Este protocolo descreve uma técnica aprimorada para transplante ortotópico de pulmão esquerdo em ratos, com foco na redução da dificuldade operacional e na melhoria das taxas de sobrevida.

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Este protocolo demonstra como realizar uma amputação abaixo do joelho em ratos e realizar imediatamente a inervação muscular direcionada (iTMR) para investigar estratégias de tratamento e prevenção da dor relacionada à amputação e para melhor compreender os mecanismos da dor associados à amputação.

Modelo de amputação do membro posterior do rato abaixo do joelho e reinervação muscular imediata direcionada

Apresentamos um modelo reprodutível de camundongo de alotransplante composto vascularizado de membros posteriores para pescoço, heterotópico. Esse protocolo supermicrocirúrgico, envolvendo anastomoses de vasos de 0,3 a 0,5 mm, integra guiagem com filamento de náilon e algemamento venoso. Ela oferece uma plataforma confiável para estudos translacionais sobre tolerância, lesões por isquemia-reperfusão e mecanismos imunológicos em alotransplante composto vascularizado.

Transplante Heterotópico de Membro Posterior para Pescoço no Camundongo: Um Modelo Supermicrocirúrgico de Alotransplante Composto Vascularizado

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