Injeção na veia da cauda: um método para administrar células cancerígenas para estudos metastáticos em um modelo de camundongo

Comece adicionando tripsina em uma placa de Petri contendo células de câncer de mama marcadas para separá-las da superfície. Adicione meio contendo soro para interromper a ação da tripsina. Transfira a suspensão da célula para um tubo cônico e centrifugue-a para a célula de pellets.

Descarte o sobrenadante e ressuspenda as células em solução salina tamponada com fosfato. Coloque o tubo no gelo para desacelerar o metabolismo celular. Carregue esta suspensão celular contendo a quantidade necessária de células em uma seringa Luer lock e fixe uma agulha nela.

Coloque um rato em uma contenção de roedores com a cauda para fora. Mergulhe a cauda em água morna para dilatar as veias. Existem duas veias nos lados laterais e uma artéria no lado ventral da cauda. Limpe a cauda com álcool, insira a agulha e injete a suspensão celular.

Uma vez na corrente sanguínea, as células cancerígenas injetadas invadem órgãos, como os pulmões, e proliferam. Remova lentamente a agulha e use uma gaze estéril no local da injeção para aplicar pressão para parar o sangramento. Retorne o mouse à gaiola e garanta uma recuperação completa. No protocolo a seguir, demonstramos a injeção de células cancerígenas metastáticas marcadas em um modelo de camundongo para quantificar a metástase e a colonização do câncer de mama.

Aspire o meio e enxágue as placas celulares com 1X PBS. Tripsinize as células com 5 mililitros de tripsina por placa de 15 centímetros por dois a cinco minutos e transfira todas as células para um tubo cônico. Lave as células restantes da placa de cultura de tecidos com meio de crescimento completo suficiente para extinguir a tripsina. Adicione a lavagem ao mesmo tubo cônico. Conte as células usando um contador de células automatizado para determinar o número total de células.

Em seguida, centrifugue as células a 122 vezes G por três minutos e aspire o sobrenadante. Ressuspenda as células em 1X PBS na concentração desejada. Aqui, 25.000 células são injetadas em cada camundongo em 100 microlitros de PBS, de modo que as células ressuspensas estão em 250.000 células por mililitro. Mantenha as suspensões celulares congeladas até a injeção.

Trabalhando em um capuz no biotério, misture suavemente, mas completamente, as células invertendo o tubo ou usando uma seringa de 1 mililitro para garantir que sejam ressuspensas uniformemente. Agora, carregue uma seringa Luer lock de 1 mililitro com suspensão celular e expulse o excesso de bolhas de ar. Coloque uma agulha de calibre 30 de 1/2 polegada na seringa com o chanfro para cima e expulse as bolhas de ar.

Coloque suavemente o mouse em um limitador de roedores. A veia lateral da cauda deve estar visível e dilatada. Caso contrário, aperte suavemente a base da cauda e mergulhe a cauda em água morna da torneira para dilatar as veias. Use um lenço umedecido com álcool para limpar a cauda. Em seguida, insira a agulha na veia da cauda, com o lado chanfrado para cima, e injete 100 microlitros de suspensão celular. Se a agulha for inserida corretamente na veia, ela deve deslizar facilmente ligeiramente para frente e para trás, e não deve haver resistência quando o êmbolo é empurrado.

Injeções bem-sucedidas também devem resultar em um rubor, no qual a cor azul da veia fica branca por alguns segundos após a injeção. Remova lentamente a agulha e, usando uma gaze estéril, aplique pressão no local da injeção para parar qualquer sangramento. Retorne o mouse à gaiola e monitore por 15 minutos para garantir a recuperação total.