Escalonamento de dose: um método para desenvolver resistência a medicamentos em células cancerígenas

- Os inibidores de tirosina quinase, TKI, bloqueiam a ligação do receptor de quinase ao ATP, impedindo a fosforilação. Comece com o plaqueamento de células cancerígenas em meios de crescimento. Permita que eles atinjam densidade favorável e transfira as células para vários poços. Após o crescimento noturno, dispense diferentes concentrações de drogas em vários poços e deixe as células crescerem pela duração desejada. Adicione MTT, um corante solúvel em água, para medir a viabilidade celular. As enzimas mitocondriais convertem o MTT em formazan roxo insolúvel dentro das células vivas.

Pare a reação adicionando um agente solubilizante adequado e meça o formazano espectrofotometricamente. Este método é chamado de ensaio MTT. Plote um gráfico de células vivas indicadas por formazan em relação às concentrações de drogas. Calcule a concentração inibitória, IC₅₀, encontrando a concentração do medicamento que mata 50% das células usando o software.

Em seguida, cultive as células cancerígenas no meio de crescimento e distribua-as em três placas diferentes. Depois que as células atingirem a subconfluência, adicione 1/10 de diluição da concentração de IC₅₀. Permita que as células cresçam e re