Ensaio de imunofluorescência: um método para identificar células tumorais capturadas em um fio médico

- Pegue um fio funcionalizado com uma pequena porção de ouro revestida com um hidrogel acoplado a anticorpos de interesse. Mergulhe a parte dourada do fio em um frasco contendo células tumorais. Feche-o com uma rolha de arame e incube-o em um rotador de tubo. As células tumorais circulantes ou CTCs que exibem antígenos de superfície se ligam aos anticorpos no fio. Enxágue o fio mergulhando em frascos contendo solução salina tamponada com fosfato ou PBS e seque ao ar. Agora mergulhe o fio em uma solução de acetona para fixar as células desidratando-as.

Em seguida, insira suavemente o fio através de uma ponta P200 com a parte funcionalizada dentro dela. Encha a fita com um anticorpo conjugado com um fluorocromo para submergir o fio. Esses anticorpos marcados se ligarão aos seus respectivos antígenos presentes nas células. Sele a abertura com um filme de laboratório e incube durante a noite no escuro a 4 graus Celsius. Em seguida, lave o fio com PBS para remover quaisquer anticorpos não ligados. Coloque o fio em um suporte de fio e view sob um microscópio fluorescente. As CTCs ligadas por anticorpos fluorescem no fio. No protocolo a seguir, capturaremos CTCs em um fio médico e as iden