Ensaio de formação de esferas: um método in vitro para identificar células-tronco de câncer de pâncreas e terapias de triagem

- O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) contém um subconjunto de células-tronco cancerígenas (CSC) exclusivamente tumorigênicas. As CSCs são auto-renováveis, pluripotentes e capazes de formar tumores. Eles expressam proteínas antiapoptóticas e também contêm genes multirresistentes, tornando-os resistentes à quimioterapia. Para identificar células-tronco cancerígenas e estudar o efeito de drogas sobre elas, realizamos um ensaio de formação de esferas.

Primeiro, suspenda as células-tronco cancerígenas extraídas no meio de cultura de células desejado. Em seguida, semeie a suspensão celular em uma placa de vários poços e incube pela duração desejada. Adicione uma quantidade necessária de medicamento de interesse em alguns poços e placebo em outros poços como controle negativo. Incube as células pela duração desejada. As células-tronco cancerígenas formam colônias em forma de esfera sob um ambiente de cultura não aderente.

Após a incubação, pipete uma pequena quantidade de suspensão celular em um hemocitômetro e coloque-a em um contador de células automatizado. Agora, conte o número de esferas formadas. As células tratadas com drogas geralmente mostram uma redução substancial no ta