Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:36 min. • April 30th, 2023
- A radioimunoterapia pré-direcionada ou PRIT utiliza um imunoconjugado ou uma construção de anticorpo que se liga a um ligante radioativo enquanto apresenta uma alta afinidade por um antígeno de superfície celular específico do tumor. Para pré-segmentar, tome a concentração desejada desses anticorpos em uma seringa tratada com proteínas albumina séricas. O tratamento com soro evita a ligação desses anticorpos às paredes da seringa.
Em seguida, coloque um modelo de camundongo portador de tumor colorretal sob uma lâmpada de calor para dilatar a veia da cauda. Injete os anticorpos na veia dilatada. À medida que esses imunoconjugados atingem o local do tumor, sua alta afinidade com o antígeno de superfície celular específico do tumor promove seu acúmulo dentro do tecido.
Em seguida, tome uma dose apropriada do ligante radioativo. Administre o radioligante na veia da cauda dilatada do camundongo pré-alvo. Uma vez que essas moléculas atingem o local do tumor, elas se combinam com os anticorpos. A alta dose de radiação emitida durante o decaimento radioativo desses ligantes mata o tumor alvo, minimizando a exposição a células normais.
No protocolo a seguir, mostraremos a radioimunoterapia pré-direcionada usando anticorpos modificados por transcicloocteno e radioligantes tetrazeno marcados com lutécio-177 em um modelo de camundongo com câncer colorretal.
- Classifique camundongos nus atímicos fêmeas com xenoenxerto de câncer colorretal de modo que o volume médio do tumor em cada coorte seja aproximadamente igual. Para fazer isso, liste os números de identificação do animal, o padrão de entalhe da orelha e o volume do tumor em três colunas separadas de um programa de planilha. Classifique os dados do menor para o maior volume de tumor. Em uma quarta coluna, atribua a cada animal um número de gaiola.
Percorra as gaiolas em um padrão semelhante a uma cobra até que todos os animais sejam designados para a gaiola. Depois que as gaiolas forem atribuídas, classifique os dados pelo número da gaiola. Para injetar o imunoconjugado, retire doses de 150 microlitros de solução de huA33-TCO em seringas pré-tratadas com albumina de soro bovino a 1% em PBS e armazene essas seringas em gelo. Para injetar o radioligante, primeiro retire doses em 150 microlitros de solução salina estéril a 0,9% contendo 1,1 equivalência molar do Tz-PEG7-DOTA radiomarcado em relação à quantidade de huA33-TCO administrada.
Use paquímetros para medir o lado mais longo do tumor oblongo, bem como a largura, que é perpendicular ao comprimento. Pese cada mouse em uma balança para acompanhar o ganho ou a perda de peso ao longo do tempo. Por fim, calcule o volume usando a fórmula do volume de um elipsóide, assumindo que a altura é aproximadamente igual à largura.