Modelos de camundongos com metástase espontânea: uma plataforma para estudar o potencial metastático de células de câncer colorretal injetadas ortotopicamente

- Comece com uma cultura de proteína fluorescente verde, ou GFP, expressando organoides de câncer colorretal. Colha os organoides. Trate com uma solução enzimática de descolamento celular para dissociar os organoides em uma suspensão unicelular. Centrifugar para separar o sobrenadante contendo enzimas. Remova o sobrenadante. Ressuspenda as células cancerígenas colorretais que expressam GFP usando um meio artificial contendo matriz extracelular. Carregue a suspensão celular em uma seringa e mantenha-a no gelo para evitar a solidificação da matriz à temperatura ambiente.

Em seguida, prepare um camundongo anestesiado na posição supina. Puxe suavemente a camada mucosa do reto através da abertura anal. Agora, injete a suspensão de células cancerígenas que expressam GFP preparada na camada submucosa retal contendo a rede de vasos sanguíneos. Permita que o mouse se recupere.

Dentro de alguns dias, um tumor primário que expressa GFP se desenvolve no local da injeção. Com metástase espontânea, essas células tumorais se desprendem e entram na circulação. Eventualmente, as células extravasam para órgãos distantes e proliferam para formar tumores metastáticos positivos para GFP. No protocolo a