Modelo de Ressecção Ileal Murina: Estudando o Metabolismo da Bílis Induzido por Ileectomia em Modelo Murino
JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 4:35 min • April 30th, 2023
- A circulação entero-hepática de ácidos biliares, ou BAs, mantém sua homeostase no corpo. As células hepáticas ou hepatócitos produzem BAs de onde se movem em direção ao íleo e são ativamente transportados dentro das células intestinais ou ileócitos. Dentro dos ileócitos, os BAs ativam a síntese do hormônio Fator de Crescimento de Fibroblastos, ou FGF. O FGF é transposto de volta para o fígado pela veia porta hepática e se liga aos receptores nos hepatócitos, enviando assim um sinal de feedback negativo a jusante para interromper a produção de BA.
A ressecção ileal é uma estratégia de tratamento comum para o câncer de cólon. Portanto, preparamos um modelo de ressecção ileal murina para obter informações sobre o papel do íleo no câncer de cólon.
Comece colocando um camundongo anestesiado em uma placa de dissecção e faça uma incisão abdominal na linha média. Em seguida, exponha o íleo e ressece o segmento ileal selecionado e suture as extremidades ileais juntas. Finalmente, retorne o intestino anastomótico na cavidade abdominal e suture o músculo inciso e a camada de pele.
Permita que o camundongo se recupere e analise os efeitos da remoção do íleo, que pode causar acúmulo excessivo de bile nos intestinos. No protocolo a seguir, prepararemos um modelo de ressecção ileal murina para estudar os efeitos do hormônio FGF ileal no metabolismo biliar.
- Comece confirmando o nível apropriado de sedação beliscando o dedo do pé e aplicando creme depilatório no abdômen do camundongo. Remova o cabelo com esponjas cirúrgicas e coloque o animal em uma mesa cirúrgica de pequenos animais com temperatura controlada ajustada para 37 graus Celsius. Aplique pomada nos olhos do animal e desinfete a pele exposta com um esfoliante sequencial de iodopovidona e etanol 70%.
Cubra a área cirúrgica do abdômen com gaze cirúrgica estéril e use um bisturi para fazer uma incisão na linha média do abdômen e cortar a camada muscular. Usando um aplicador com ponta de algodão para proteger os intestinos, abra totalmente os músculos abdominais do camundongo com afastadores para expor a cavidade abdominal.
A partir do ceco, mova cuidadosamente o íleo conectado e parte do jejuno para fora da cavidade abdominal e use uma sutura de seda 7-0 para ligar o ramo superior da artéria mesentérica superior. Quando a cor do tecido mudar de rosa para escuro, indicando uma oclusão completa, use uma tesoura para extirpar 50% ou 90% do íleo, dependendo dos parâmetros do experimento.
Lave o lúmen de ambas as extremidades ileais com solução salina a 0,9%. Depois de localizar o mesentério na lateral de ambas as extremidades ileais, alinhe os mesentérios em ambas as extremidades do tecido excisado e use um 8-0 sutura para unir as pontas. Suturar o lado contralateral do íleo para manter o íleo anastomosado de maneira natural e suturar os lados superior e inferior entre as duas suturas originais para unir completamente as duas extremidades ileais.
Após confirmar a ausência de vazamento do local da anastomose, retorne o ceco e o intestino delgado aos seus locais anatômicos originais e use uma agulha romba para lavar a área cirúrgica com solução salina morna a 0,9%. Feche a camada muscular abdominal com uma sutura 6-0 e alinhe a incisão da pele abdominal para fechar a pele e facilitar a cicatrização ideal da ferida.
Em seguida, transfira o mouse para uma unidade de terapia intensiva em uma gaiola de cama de papel em uma almofada de aquecimento com temperatura controlada para recuperação durante a noite com alimentos macios, além de comida e água normais.
Visão Geral
Este estudo investiga a circulação entero-hepática de ácidos biliares e seu papel no câncer de cólon por meio de um modelo murino de ressecção ileal. A pesquisa foca nos efeitos da remoção do íleo sobre o metabolismo biliar e a síntese do Fator de Crescimento de Fibroblastos (FGF).
Componentes Principais do Estudo
Área de Ciência
- Neurociência
- Biologia
- Gastroenterologia
Antecedentes
- A circulação entero-hepática é crucial para a homeostase dos ácidos biliares.
- O FGF desempenha um papel significativo na regulação da produção de ácidos biliares.
- A ressecção ileal é um tratamento comum para o câncer de cólon.
- Compreender o papel do íleo pode fornecer insights sobre o metabolismo biliar.
Objetivo do Estudo
- Preparar um modelo murino para ressecção ileal.
- Analisar o impacto da remoção ileal sobre o acúmulo de ácidos biliares.
- Estudar o papel do FGF no metabolismo biliar após ressecção.
Métodos Utilizados
- Anestesiar o camundongo e preparar o local cirúrgico.
- Realizar uma incisão abdominal mediana para acessar o íleo.
- Ressecionar um segmento do íleo e suturar as extremidades.
- Monitorar a recuperação e analisar os efeitos metabólicos após a cirurgia.
Resultados Principais
- A ressecção ileal bem-sucedida foi realizada no modelo murino.
- A análise pós-operatória indicou acúmulo excessivo de bile.
- Os níveis de FGF foram afetados pela remoção do íleo.
- Obtiveram-se insights sobre o metabolismo da bile por meio deste modelo.
Conclusões
- O modelo de ressecção ileal murino é eficaz para estudar o metabolismo da bile.
- O FGF desempenha um papel fundamental na regulação por retroalimentação dos ácidos biliares.
- São necessárias pesquisas adicionais para explorar as implicações terapêuticas para o câncer de cólon.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O entendimento dos efeitos da ressecção ileal no metabolismo dos ácidos biliares fornece subsídios mecanicistas relevantes para a toxicidade gastrointestinal e estratégias terapêuticas contra o câncer de cólon. Esse modelo murino permite a avaliação pré-clínica do acúmulo excessivo de ácidos biliares e da desregulação da sinalização FGF, apoiando a validação de alvos na modulação da via entero-hepática. A abordagem auxilia na redução de riscos de hipóteses que associam ressecção intestinal à desregulação metabólica em contextos oncológicos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvos
- Valor Científico: Investigar o papel do íleo na homeostase dos ácidos biliares e na regulação por retroalimentação mediada por FGF.
- Valor Operacional: Permite a validação funcional de alvos intestinais envolvidos no transporte e metabolismo dos ácidos biliares.
- Valor Preditivo: Apoia a avaliação dos efeitos da modulação de alvos sobre o acúmulo excessivo de ácidos biliares e a toxicidade epitelial.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Prontidão do ensaio: Gera modelos de tecido relevantes para a doença para quantificar níveis de ácidos biliares e danos intestinais.
- Saída quantitativa: Facilita a medição da superacumulação de bile como leitura farmacodinâmica.
- Reprodutibilidade: O procedimento cirúrgico padronizado favorece a geração consistente de modelos entre estudos.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Relevância para a Doença: Modela a má absorção biliar induzida por ileectomia observada em pacientes submetidos a cirurgias gastrointestinais.
- Continuidade Translacional: Relaciona a interrupção da sinalização de FGF a alterações no metabolismo biliar no intestino murino.
- Avaliação de Risco: Contribui para o entendimento mecanicista da toxicidade intestinal após ressecção.
- Utilidade Pré-clínica: Apoia a avaliação de intervenções direcionadas à homeostase de ácidos biliares ou às vias de sinalização de FGF.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O modelo integra-se aos fluxos de trabalho de descoberta ao fornecer um sistema biologicamente relevante para estudar as consequências da ressecção intestinal na sinalização metabólica, particularmente no apoio ao cuidado oncológico e na avaliação da segurança gastrointestinal.
- Biologia da Descoberta: Testa hipóteses sobre a síntese ileal de FGF e seu papel de retroalimentação hepática na regulação dos ácidos biliares.
- Análises: Permite a quantificação do acúmulo de ácidos biliares e da histologia intestinal como pontos finais metabólicos essenciais.
- Pesquisa Translacional: Relaciona a ressecção ileal em camundongos a distúrbios relevantes para humanos no metabolismo biliar após cirurgia.
- Reutilização Empresarial: Estabelece um modelo cirúrgico reutilizável para estudar os efeitos da remoção de segmentos intestinais em diversas áreas terapêuticas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Fornece uma compreensão mecanicista da disregulação dos ácidos biliares e da perda de sinalização FGF após ressecção.
- Valor Operacional: Oferece um modelo padronizado e reprodutível para estudos de ressecção intestinal.
- Valor Estratégico: Orienta decisões de avanço ou interrupção do projeto ao revelar consequências metabólicas intestinais específicas do alvo.
- Impacto no Portfólio: Apoia o avanço com ajuste de risco ao identificar precocemente mecanismos de toxicidade mediados por ácidos biliares.
Considerações sobre a Implementação
- Exige experiência em técnicas cirúrgicas murinas e anastomose intestinal.
- Depende de infraestrutura cirúrgica estéril e capacidade de monitoramento pós-operatório.
- Necessita de protocolos padronizados para a extensão da ressecção ileal e manipulação dos tecidos.
- Envolve coordenação entre equipes cirúrgica, de metabolismo e de histologia.
- Limitado à fisiologia murina; devem-se considerar as diferenças entre espécies na cinética dos ácidos biliares.
Perguntas Frequentes sobre Biotecnologia Farmacêutica
Utilizando os ácidos biliares e multi-fluorados
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Última atualização: 22 agosto 2026