Método de gota suspensa: uma técnica para gerar esferoides de melanoma 3D

- Os esferoides são modelos tridimensionais de cultura de células in vitro que imitam a arquitetura tumoral in vivo e ajudam a estudar as interações intratumorais. Para configurar a cultura, primeiro prepare uma suspensão unicelular de células de melanoma em seu meio apropriado. Em seguida, coloque pequenos volumes dessa suspensão celular, suficientemente separados na superfície interna da tampa de uma placa de cultura estéril e não adesiva. Inverta cuidadosamente a tampa e coloque-a na base da placa de cultura contendo PBS para criar uma câmara de hidratação. Incubar a placa em condições adequadas.

A umidade do PBS evita a evaporação da mídia das gotas suspensas. Refresque as gotas substituindo alguns microlitros de mídia. Devido à tensão superficial, as gotículas mantêm sua forma esférica e permanecem suspensas na superfície interna da placa. As forças gravitacionais facilitam que as células permaneçam em suspensão sem se espalhar, mas se agregam para formar esferóides tridimensionais dentro das gotículas. Por fim, enxágue as gotículas com PBS para colher os esferoides. Colete-os em uma placa de cultura não adesiva.

No protocolo a seguir, demonstraremos a geração de esferoides tr