Name: Pressão atmosférica Imagem Molecular de tecidos biológicos e Biofilmes por LAESI Espectrometria de Massa (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Aprenda a técnica LAESI para imagem molecular de tecidos biológicos e biofilmes por espectrometria de massa. Este método permite análise direta em condições nativas sem preparação química da amostra.

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Os autores são gratos pelo apoio financeiro deste trabalho pela National Science Foundation EUA sob Grant No. 0719232, pelo Departamento de Energia dos EUA (DEFG02-01ER15129), e pela Protea Biosciences, Inc. (Morgantown, WV). Os autores também gostariam de agradecer a Jessica A. Stolee por sua ajuda durante a filmagem do protocolo.

O protocolo a seguir descreve as principais etapas da ionização electrospray a laser de ablação (LAESI) experiência e oferece exemplos representativos de lateral e imagens tridimensionais (3D) para animais e amostras de tecidos de plantas. Detalhes adicionais experimental e técnicas podem ser obtidas em outro lugar. 1-6 1. Preparação de tecido e de montagem <ol><li> Se o corte é necessário, use um cryomicrotome para a secção de tecido em 1-10 mM fatias grossas de -10 a -20 ° C a menos que seja recomendado para um tipo de tecido particular. </li><li> Montar seções em uma superfície plana (por exemplo, quimicamente lâmina de vidro previamente limpo) diretamente sem modificadores químicos. Para os tecidos seccionados, descongele-mount as seções e segura o porta-amostras para um estágio de resfriamento Peltier, imediatamente após a descongelação de montagem para manter os tecidos congelados em todos os momentos durante a análise. Este passo é necessário para minimizar / impedir a migração molecular na seção. </li><li> Se necessário, use um dissipador de calor equipados com um ventilador de baixa potência para facilitar a remoção de calor do Peltier palco para manter o tecido congelado. </li><li> Em um ambiente úmido durante um período prolongado de tempo (1-2 horas), para inspecionar a condensação de água ou gelo sobre a superfície do tecido. Condensação de água no tecido negativamente afeta o desempenho de imagem em experimentos LAESI 1. </li><li> Se necessário, use um desumidificador sala ou colocar a amostra resfriada em uma câmara ambiental preenchido com um gás inerte (por exemplo, o gás nitrogênio seco) para evitar a condensação 1. </li></ol> 2. Otimização da Fonte Ion LAESI A fonte de íons LAESI consiste de um laser infravermelho médio, uma série de elementos de óptica para direção de luz e foco, assim como porta-amostras adicionais, componentes de refrigeração, estágios de tradução, e um sistema de entrega de solvente. Figura 1 mostra o arranjo típico destes elementos com relação à entrada da fonte de íons atmosférica pressão de um espectrômetro de massa. <ol><li> Como ilustrado na figura 1, a posição da amostra 15-20 milímetros abaixo do orifício do cone de amostragem espectrômetro de massa (d OR-FP). </li><li> Operar um laser meados de IR em 2,94 mm e comprimento de onda 10 Hz taxa de repetição. Atenuar a saída do laser para ~ 100 μJ energia / pulso. </li><li> Use uma combinação de espelhos de ouro e uma lente com foco transparente no comprimento de onda do laser (por exemplo, um plano-convexa CaF 2 ou ZnSe lente) para acoplar a energia pulso de laser para a amostra a incidência normal (ângulo de incidência ver direito com respeito à superfície da amostra na Figura 1). </li><li> Posição do feixe de infravermelho médio eixo 5-8 mm na frente do orifício do cone de amostragem espectrômetro de massa. </li><li> Ajustar a posição da lente com foco ea energia de pulso do feixe de laser para alcançar a remoção de tecido no ponto focal. As dimensões do volume ablated determinar o pixel (ou voxel em imagens tridimensionais) de tamanho para a aplicação de imagem. </li><li> Posição de um emissor nanospray em linha com o eixo de entrada do espectrômetro de massa e em uma distância da ponta de orifício para emissor de ~ 10 mm (ver Figura 1). </li><li> Para o electrospray, prepare solução de metanol 50% com 0,1% de ácido acético ou acetato de aditivo de amônio 0,1% para o modo de íon positivo ou negativo, respectivamente. Dependendo da amostra, outros solventes orgânicos, como acetonitrila, isopropanol, etc, pode substituir o metanol em concentrações apropriadas para a tarefa analítica. A estabilidade do electrospray é crucial para a imagem de sucesso. Dependendo da selecção do solvente, a taxa de fluxo ea tensão pulverização precisa ser ajustada para atingir pulverização estável. </li><li> Para reativa LAESI 6 em aplicações de imagem, a solução electrosprayed pode conter reagentes. </li><li> Use uma bomba de seringa para entregar a solução electrospray através do emissor electrospray a uma vazão de ~ 300 nL / min. </li><li> Se o orifício espectrômetro de massa é mantida a uma baixa tensão (&lt;500 V medidos contra o chão), gerar electrospray através da aplicação de alta tensão diretamente para o emissor electrospray (eg, 3000 V) ou através de uma união metal. Caso contrário, terra diretamente emissor electrospray ou através da união de metal para estabelecer electrospray. </li><li> Operar a fonte electrospray no cone jet-pulverização modo de geração de íon mais eficiente por LAESI. Para o efeito de variáveis ​​operacionais sobre os modos de pulverização e seus efeitos sobre os espectros de massa, ver discussões em outros lugares. 5,7,8 </li><li> Ajustar cuidadosamente as distâncias relativas da configuração LAESI para otimizar o rendimento LAESI ion, mantendo o feixe de laser, o emissor, e os eixos orifício no mesmo plano. Por favor, encontrar instruções detalhadas em outros lugares. 5 </li><li> Com um microscópio óptico, determine as dimensões laterais da cratera ablação na amostra. </li><li> Para tridimensional experimentos com imagens LAESI, a realização da ablação com pulsos individuais e determinar a profundidade de um voxel usando, por exemplo, o modo de z-stack em microscopia óptica. 3 </li></ol> 3. Imagem Molecular e Análise de Dados No experimento de imagem, a amostra de tecido é movido no plano focal do laser em X e Y direções com tamanhos de passo maior do que ou iguais às dimensões do local de ablação. A resolução espacial é limitada pela focalização do feixe de laser incidente. <ol><li> Selecione a área de interesse na superfície da amostra e obter o (X, Y) coordenadas dos limites correspondentes. </li><li> Escolheu um algoritmo gridding (eg, adaptação de grade, imagem região selecionada, grade retangular, espiral, Z digitalização, etc) com o qual raster a superfície da amostra selecionada, com tempo de permanência em cada pixel sobre a área a ser trabalhada. </li><li> Use um estágio tradução de três eixos e software que é capaz de rastering a amostra de acordo com a grelha pré-determinado. </li><li> Calcule o tempo total necessário para geração de imagens. </li><li> Desativar os dados limite de tempo de aquisição do espectrômetro de massa. Se isso não for possível, definir o prazo de aquisição de dados com o valor calculado imagem tempo. </li><li> Iniciar a fonte de laser infravermelho médio uma taxa de repetição adequada para produzir a relação sinal-ruído suficiente no espectro de massa dentro do tempo de permanência em cada pixel para realizar um experimento de imagem LAESI lateral. Para a imagem latente molecular 3D, use uma taxa de aquisição de espectro maior do que a taxa de repetição do laser fonte com sucesso em massa analisar os íons gerados dentro de um único pulso de laser. Aguarde o sinal de partida para iniciar a seqüência ablação. </li><li> Ligue a fonte de electrospray. Certifique-se que não há solução suficiente durante todo o tempo necessário para geração de imagens. </li><li> Simultaneamente iniciar a aquisição de espectros de massa, a ablação a laser meados de IR, ea varredura de superfície. </li><li> Quando a execução de imagens terminar, parar a varredura de superfície, o lasing meados de IR, ea aquisição de dados. </li><li> Desabilitar a fonte laser. </li><li> Desligue a alta tensão. </li><li> Desligue a bomba de seringa. </li><li> Definir o espectrômetro de massa para o modo STANDBY. </li><li> Desligue o sistema eletrônico de refrigeração Peltier. </li><li> Fechar o fluxo de gás inerte, se usado. </li><li> Use um software para correlacionar as coordenadas absolutas dos pixels na imagem lateral ou os voxels na análise 3D com os espectros correspondentes. </li><li> Plotar a intensidade de sinal de íons para selecionar o valor m / z contra o coordenadas absolutas de análise para obter lateral e imagens 3D molecular. </li></ol> 4. Resultados representante A Figura 2 apresenta resultados representativos para alguns tipos de tecidos importantes e modalidades de imagem. Um painel retrata um caso para uma seção de tecido animal que tenha sido congelada durante o experimento para evitar a desidratação. 1 Além disso, a amostra foi localizado em um ambiente seco gás nitrogênio para evitar vapores de água ambientes de condensação na superfície da amostra. Uma seção de 100 m de espessura coronal de um cérebro de rato (Rattus norvegicus) foi fotografada com LAESI lateralmente. As regiões anatômicas do cérebro (veja a imagem óptica no painel A) apresentam boa correlação com a imagem molecular obtido para o PC plasmalógenos (O-33: 3) e / ou PE (O-36: 3) com m / z 728,559. Painel B mostra a imagem LAESI 3D de uma planta Zebra (Aphelandra squarrosa) tecido foliar. Porque as folhas possuem um mecanismo natural de defesa contra a desidratação, a amostra poderia ser interrogado no ambiente ambiente. 3 As imagens 3D obtidas molecular revelou uma variedade de padrões de distribuição de metabólitos primários e secundários. Entre outros, acacetin com m / z 285,076 foi detectada na maior contagem de íons nos setores amarelo da segunda e terceira camadas de cima com uma distribuição homogênea nos outros. Esta distribuição concordou com o padrão da variegação visto na imagem óptica. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Esquemática do sistema LAESI (ES, electrospray ponta emissor; OR, orifício do cone espectrômetro de massa de amostragem; FL, com foco da lente; FP, ponto focal; P, Peltier estágio de resfriamento; HS, dissipador de calor). Uma parte do material particulado expelido durante meados de IR de ablação (pontos vermelhos) funde com o electrospray para produzir gotas cobrado semeado com íons e moléculas da amostra (pontos verdes). Os íons liberados essas gotículas são analisados ​​e registrados pelo espectrômetro de massa. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Resultados representativos para Imagi lateral e 3D. ng com LAESI espectrometria de massa (A) O painel superior mostra a imagem óptica de um cérebro de rato (Rattus norvegicus) seção coronal ea imagem molecular obtido para o PC plasmalógenos (O-33: 3) e / ou PE (O-36 : 3) com m / z 728,559. A barra de escala em branco corresponde a 1 mm. Adaptado com permissão de (referência 1). Copyright 2010 American Chemical Society. (B) O painel inferior mostra a imagem 3D de uma folha de uma planta variegada Zebra (Aphelandra squarrosa). Acacetin com m / z 285,076 foi detectada na maior contagem de íons nos setores amarelo da segunda e terceira camadas de cima com uma distribuição homogênea nos outros. Reproduzido com permissão do (Referência 3). Copyright 2009 da Sociedade Americana de Química.

<ol><li>Nemes, P., Woods, A. S., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Imaging+of+Small+Metabolites+and+Lipids+in+Rat+Brain+Tissues+at+Atmospheric-Pressure+by+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Imaging of Small Metabolites and Lipids in Rat Brain Tissues at Atmospheric-Pressure by Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 82, 982-988 (2010).</li>
<li>Nemes, P., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+ablation+electrospray+ionization+for+atmospheric-pressure%2C+in+vivo%2C+and+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Laser ablation electrospray ionization for atmospheric-pressure, in vivo, and imaging mass spectrometry.</a> Anal Chem. 79, 8098-8106 (2007).</li>
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<li>Nemes, P., Barton, A. A., Li, Y., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+molecular+imaging+and+depth+profiling+of+live+tissue+by+infrared+laser+ablation+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Ambient molecular imaging and depth profiling of live tissue by infrared laser ablation electrospray ionization mass spectrometry.</a> Anal Chem. 80, 4575-4582 (2008).</li>
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<li>Nemes, P., Goyal, S., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conformational+and+noncovalent+complexation+changes+in+proteins+during+electrospray+ionization%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Conformational and noncovalent complexation changes in proteins during electrospray ionization.</a> Anal Chem. 80, 387-395 (2008).</li>
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<li>Shrestha, B., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+metabolic+profiling+of+single+cells+by+laser+ablation+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ metabolic profiling of single cells by laser ablation electrospray ionization mass spectrometry.</a> Anal Chem. 81, 8265-8271 (2009).</li>
<li>Cooks, R. G., Ouyang, Z., Takats, Z., Wiseman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ambient mass spectrometry.</a> Science. 311, 1566-1570 (2006).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Diferentes tipos de tecidos apresentam diferentes teores de água e resistência à tração, que, por sua vez, pode afetar as características de ablação das amostras. 9 Para atenuar esses efeitos, é desejável que os protocolos a fluência do laser, a manipulação da amostra, ea análise deve ser revisto quando se muda entre principais tipos de tecido. Única célula ou para investigações de alta resolução, a luz infravermelho médio pode ser acoplado em uma fibra óptica afiada em vez de uma lente de foco. 10 Ao posicionar a ponta de fibra nas proximidades das células selecionadas em um tecido, a análise LAESI pode ser executada em um nível de uma única célula. Como um rótulo sem fonte de íons para a espectrometria de massa de ionização do ambiente, 11 LAESI tem mostrado grande potencial para a investigação de processos bioquímicos nos tecidos. Com os benefícios adicionais de análise direta, lateral e de imagem 3D, LAESI é uma ferramenta para criação de perfis emergentes bioanalíticos, bem como aplicações de imagem.

<table><tbody><tr><td>Espectrômetro de massas</td><td>Waters</td><td>Q-TOF Premier</td><td></td></tr><tr><td>Laser de médio infravermelho</td><td>Opotek Inc. (Carlsbad, CA)</td><td>Vibrant IR</td><td></td></tr></tbody></table>

pressão atmosférica imagem molecular de tecidos biológicos e biofilmes por laesi espectrometria de massa

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

Métodos de ionização ambiente em espectrometria de massa permitem investigações analíticas para ser realizada diretamente em um tecido ou biofilme sob nativo como condições experimentais. Laser de ionização electrospray ablação (LAESI) é um tal desenvolvimento e é particularmente adequado para a investigação de água contendo espécimes. LAESI utiliza um feixe de laser infravermelho médio (2,94 de comprimento de onda mm) para excitar as moléculas de água da amostra. Quando o limiar de influência da ablação é excedido, o material da amostra é expelido na forma de partículas e estes projéteis viajar para dezenas de milímetros acima da superfície da amostra. Em LAESI, esta pluma de ablação é interceptada por gotas altamente carregadas para capturar uma fração do material de amostra ejetado e converter seus constituintes químicos em fase gasosa íons. Um espectrômetro de massa equipados com uma interface de origem atmosférica pressão íon é empregado para analisar e registrar a composição dos íons liberados oriundos da área sondada (pixel) da amostra. A interrogação sistemática sobre uma matriz de pixels abre caminho para a imagem latente molecular no modo de análise de microssonda. Um aspecto único do LAESI imagem espectrometria de massa é de perfis de profundidade que, em combinação com a imagem lateral, permite imagens tridimensionais (3D) molecular. Com as atuais resoluções lateral e profundidade de ~ 100 mm e ~ 40 mM, respectivamente, LAESI imagem espectrometria de massa ajuda a explorar a estrutura molecular de tecidos biológicos. Aqui, revisamos os principais elementos de um sistema LAESI e fornecer orientações para uma experiência bem sucedida de imagem.

Laser de ionização electrospray ablação (LAESI) é uma fonte de íons na atmosfera de pressão para a espectrometria de massa. No modo de imagem, um sondas de laser infravermelho médio das distribuições de moléculas através de uma secção de tecido ou de um biofilme. Esta técnica apresenta uma nova abordagem para diversos estudos bioanalíticos realizadas sob condições experimentais nativa.

Pressão atmosférica Imagem Molecular de tecidos biológicos e Biofilmes por LAESI Espectrometria de Massa

Os métodos de ionização ambiente em espectrometria de massas permitem que investigações analíticas sejam realizadas diretamente em um tecido ou biofilme sob condições semelhantes às nativas...

Para realizar um experimento de imagem por espectrometria de massas lazy em um tecido biológico ou biofilme, o sistema lazy é preparado para operação robusta. O próximo passo é montar a amostra em um estágio de amostras e identificar as condições experimentais necessárias para a amostra em estudo. Em seguida, o experimento de imagem molecular lazy lateral é iniciado e os dados necessários são utilizados para obter as distribuições moleculares espaciais.Os resultados mostram a arquitetura molecular de tecidos biológicos e biofilmes. Sou o Dr. Peter Nemes do Laboratório de Pesquisa Vertus na Universidade George Washington. A principal vantagem da técnica lazy em relação a outros métodos, incluindo microscopia confocal, métodos ópticos e de imagem por espectrometria de massas como Maldi e sims, é que a análise da amostra pode ser realizada diretamente no tecido sob condições de pressão atmosférica, sem necessidade de tratamento da amostra.Monte diretamente as secções de tecido de interesse sobre uma superfície plana, como uma lâmina de vidro previamente limpa quimicamente e sem modificadores químicos. Prenda a amostra imediatamente a uma platina de resfriamento peltier, caso necessário, utilizando um dissipador de calor equipado com um ventilador de baixa potência para facilitar a remoção de calor da platina peltier. Em seguida, se estiver trabalhando em um ambiente úmido por um período prolongado de aproximadamente uma a duas horas, verifique a condensação de água ou gelo na superfície do tecido.A condensação de água no tecido afeta negativamente o desempenho da imagem em experimentos lazy. Se necessário, use um desumidificador de ambiente ou coloque a amostra chamada em uma câmara ambiental preenchida com um gás inerte, como gás nitrogênio seco, para prevenir a condensação. Após otimizar as condições para manter a amostra, trabalhe para otimizar a fonte de íons utilizada: a ablação a laser, a ionização por eletrosspray ou a fonte de íons lazy consiste em um laser de infravermelho médio, abreviado como mid ir, e uma série de elementos ópticos para direcionamento e foco da luz.O conjunto também inclui porta-amostras adicionais, componentes de refrigeração, estágios de translação e um sistema de eletrosspraiamento. Uma parte da matéria particulada expelida durante a ablação no infravermelho médio se aglomera com o eletrosspraiamento, produzindo gotículas carregadas contendo moléculas e íons da amostra. Os íons liberados dessas gotículas são analisados e registrados pelo espectrômetro de massas, cuja abertura está mostrada aqui.A configuração lenta é realizada antes de iniciar o experimento. Ajustes precisos dos parâmetros experimentais são necessários para acomodar a amostra escolhida e otimizar a fonte de íons. Comece posicionando a amostra de 15 a 20 milímetros abaixo da abertura do cone de amostragem do espectrômetro de massas.Opere o laser de médio infravermelho no comprimento de onda de 2,94 micrômetros e com taxa de repetição de 10 hertz. Atenuar a saída do laser para cerca de 100 microjoules por pulso. Utilize uma combinação de espelhos de ouro e uma lente focalizadora transparente no comprimento de onda do laser para acoplar a energia da luz laser à amostra.Na posição de incidência normal, posicione o eixo B do infravermelho médio, a cinco a oito milímetros à frente da abertura do cone de amostragem do espectrômetro de massas. Ajuste a posição da lente de focagem e a energia do pulso a laser para obter remoção de tecido no ponto focal até a profundidade desejada. As dimensões do volume ablacionado.Determine o tamanho do pixel para a aplicação de imagem. Posicione um emissor nanoESI em linha com o eixo de entrada do espectrômetro de massas, a uma distância entre a abertura e a ponta de aproximadamente 10 milímetros. Para a espectrometria por spray eletrostático, prepare uma solução de metanol a 50% com ácido acético a 0,1% para o modo de íons positivos ou acetato de amônio a 0,1%.No modo de íons negativos. A estabilidade do eletrosspray é crucial para um imageamento bem-sucedido. Dependendo da seleção do solvente, a taxa de fluxo e a voltagem de pulverização precisam ser ajustadas para se obter um pulverização estável.Para aplicações reativas, lentas e de imageamento, a solução de eletrosspraiamento pode conter reagentes. Utilize uma bomba de seringa para fornecer a solução de eletrosspraiamento através do emissor de eletrosspraiamento a uma taxa de fluxo de aproximadamente 300 nanolitros por minuto. Se a abertura do espectrômetro de massas for mantida em uma tensão baixa, por exemplo, abaixo de cerca de 500 volts medidos em relação à terra, gere o eletrosspraiamento aplicando uma tensão elevada, por exemplo, 3000 volts diretamente ao emissor de eletrosspraiamento ou por meio de uma união metálica.Opere a fonte de eletrosspray no modo de pulverização em jato cônico para gerar íons de forma mais eficiente; ajuste cuidadosamente as distâncias relativas da configuração preguiçosa para otimizar o rendimento de íons preguiçosos, mantendo o feixe de laser, o emissor e os eixos do orifício no mesmo plano, utilizando um microscópio óptico. Determine as dimensões laterais da cratera de ablação na amostra para experimentos de imageamento tridimensional preguiçoso. Realize a ablação com pulsos individuais e determine a profundidade de um vóxel utilizando, por exemplo, o modo de pilha Z na microscopia óptica.Agora que as condições de montagem do tecido e a fonte de ionização foram otimizadas, prossiga para a imagem molecular no experimento de imageamento. A amostra de tecido é movimentada no plano focal do laser nas direções x e y com tamanhos de passo maiores ou iguais às dimensões do ponto de ablatação. A resolução espacial é limitada pelo foco do feixe de laser incidente.Selecione uma área de interesse na superfície da amostra e obtenha as coordenadas XY dos limites correspondentes. Escolha um algoritmo de grade para varrer a superfície da amostra com um tempo de permanência selecionado em cada pixel sobre a área a ser imageada. Utilize um estágio de translação XYZ e um software capaz de mover a amostra de acordo com a grade predeterminada.Em seguida, calcule o tempo total necessário para a aquisição de imagens. Inicie a fonte de laser do infravermelho médio em uma taxa de repetição adequada para produzir uma relação sinal-ruído suficiente para os íons selecionados no espectro de massa dentro do tempo de permanência em cada pixel. Para realizar um experimento de imagem lateral lenta, ligue a fonte de eletrosspray.Certifique-se de que há solução suficiente para o tempo total necessário para a aquisição de imagens. Agora, inicie simultaneamente a aquisição de espectros de massa, a ablação com laser de médio infravermelho e a varredura da superfície, coletando os dados. Quando a aquisição de imagens for concluída, pare a varredura da superfície, o laser de médio infravermelho e a aquisição de dados.Desative a fonte do laser, desligue a alta tensão, desligue a bomba de seringa e coloque o espectrômetro de massas em modo de espera. Além disso, desligue a eletrônica de resfriamento do palt e feche o fluxo de gás inerte. Se utilizado.Por fim, plote o sinal de intensidade iônica para um valor MZ selecionado em função das coordenadas absolutas de análise para obter imagens moleculares laterais ou tridimensionais. Estas são imagens representativas de imagens laterais lentas de uma seção coronal de 100 micrômetros de espessura de um cérebro de rato. A seção foi congelada durante o experimento e mantida em um ambiente de gás nitrogênio seco.As regiões anatômicas do cérebro apresentam boa correlação com a imagem molecular obtida para dois plasmodia com MZ 2 78 0,59. Este é um experimento de imagem molecular em 3D utilizando tecido foliar de planta-zebra analisado no ambiente ambiente entre outros metabólitos primários e secundários. O ASCE com MZ 2 85 0,076 foi detectado em contagens iônicas mais altas nos setores amarelos da segunda e terceira camadas a partir do topo, com uma distribuição homogênea.Nos outros, essa distribuição concordou com o padrão da variação observada na imagem óptica. H após seu desenvolvimento. A técnica preguiçosa abriu caminho para pesquisadores na área de química analítica e B estudarem a composição molecular e a organização espacial de tecidos e biofilmes com teor de água apreciável.Não se esqueça de que trabalhar com um laser de infravermelho médio e uma fonte elétrica de pulverização pode ser extremamente perigoso. Sempre siga os protocolos padrão de segurança com laser e aplique proteção adequada a todas as conexões elétricas durante este procedimento.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Análise única célula é realizada por espectrometria de massa de células vegetais e animais à pressão atmosférica usando uma fibra óptica afiada para provar as células para o laser de ionização electrospray ablação (LAESI) espectrometria de massa.

Análise direta de células individuais por Espectrometria de Massa à pressão atmosférica

Secundário de ionização electrospray espectrometria de massa (SESI-MS) permite a detecção de compostos orgânicos voláteis (VOCs) sem a necessidade de qualquer pré-tratamento da amostra. Este protocolo fornece instruções para a caracterização (dentro de minutos) rápida de VOCs bacteriana usando SESI-MS.

Caracterizando Voláteis bacteriana secundária usando ionização Espectrometria de Massa (SESI-MS)

Dessorção de espectrometria de massa com ionização por electropulverização (DESI-MS) é um método pelo qual as amostras do ambiente, incluindo os tecidos biológicos, pode ser trabalhada com a preparação da amostra mínima. Por rastering a amostra abaixo da sonda de ionização, esta técnica baseada em pulverizador fornece resolução espacial suficiente para discernir as características moleculares de interesse dentro de cortes de tecido.

Imagem de tecidos biológicos por dessorção ionização electrospray Espectrometria de Massa

Espectroscopia de decomposição induzida por laser realizada em órgão fina e tecido do tumor detectado com sucesso elementos naturais e gadolínio injetado artificialmente (Gd), emitidos a partir de nanopartículas à base de Gd. Imagens de elementos químicos atingiu uma resolução de 100 um e sensibilidade quantitativa sub-mM. A compatibilidade da instalação com microscopia óptica padrão enfatiza seu potencial para fornecer várias imagens de um mesmo tecido biológico.

Induzida por laser Breakdown Spectroscopy: Uma Nova Abordagem para Mapeamento e Quantificação de nanopartículas em Organ Tissue

Aqui, apresentamos protocolos para realizar imagens de espectrometria de massa ambiente (MSI) de tecidos e análise de MS de célula única viva (SCMS) in-situ usando a sonda única, que é um dispositivo multifuncional miniaturizado para análise de MS.

Aplicações da sonda Individual: Imagem Espectrometria de Massa e Análise única célula sob condições ambientais

Uma fonte de imagem de espectrometria de massa (MSI) operada à pressão atmosférica foi desenvolvida acoplando dessorção a laser de infravermelho médio e pós-ionização por eletrospray. A matriz de gelo exógena foi usada como matriz de absorção de energia para facilitar a dessorção ressonante do material relacionado ao tecido. Este manuscrito fornece um protocolo passo a passo para a realização de IR-MALDESI MSI de camundongos neonatais de corpo inteiro.

Whole-body Espectrometria de Massa de imagem por infravermelhos matriz assistida por laser de Dessorção Ionização por Electrospray (IR-MALDESI)

Um protocolo para caracterizar a composição química do ar exalado em tempo real usando nanoelectrospray secundário ionização acoplada a espectrometria de massa é demonstrada de alta resolução.

Análise de respiração em tempo real usando o Nanoelectrospray secundário ionização acoplada a espectrometria de massa de alta resolução

Este protocolo descreve um método reprodutível e confiável para preparação de formol fixada tecido destinado a espectrometria de massa de imagens baseada em sublimação.

Preparação ideal de formol fixada amostras para peptídeo baseado Matrix assistida por espectrometria de massa de ionização/dessorção Laser Imaging fluxos de trabalho

Um novo método de preparação da amostra foi desenvolvido para acomodar coculture célula e tecido para detectar a troca de pequena molécula usando espectrometria de massa de imagens.

Capturando a molécula pequena comunicação entre os tecidos e células usando a imagem latente de espectrometria de massa

O objetivo deste protocolo é fornecer orientação detalhada sobre a preparação da amostra ao planejar experimentos usando MALDI MSI para maximizar a detecção metabólica e molecular em amostras biológicas.

Preparação de amostras para perfil metabólico usando imagem de espectrometria de massa MALDI

Aprenda a técnica LAESI para imagem molecular de tecidos biológicos e biofilmes por espectrometria de massa. Este método permite análise direta em condições nativas sem preparação química da amostra.

Pressão atmosférica Imagem Molecular de tecidos biológicos e Biofilmes por LAESI Espectrometria de Massa

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