Name: Bioensaios de Resistência a Inseticidas Monitoramento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-30T16:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Aprenda a realizar bioensaios para detectar resistência a inseticidas em artrópodes pragas. Este método permite comparar concentrações letais e avaliar a eficácia de pesticidas no manejo integrado de pragas.

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Gostaríamos de agradecer a Cotton Incorporated Estado Programa de Apoio # 08-317MO, USDA / CSREES SR-IPM Grant 2009-34103-20018 e Landis Internacional para financiamento de pesquisas referentes a esta publicação.

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<li>Snodgrass, G. L., Scott, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+changes+in+pyrethroid+resistance+in+tarnished+plant+bug+%28Heteroptera%3A+Miridae%29+populations+during+a+three+year+period+in+the+delta+area+of+Arkansas%2C+Louisiana+and+Mississippi%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Seasonal changes in pyrethroid resistance in tarnished plant bug (Heteroptera: Miridae) populations during a three year period in the delta area of Arkansas, Louisiana and Mississippi.</a> J. Econ. Entomol. 93, 441-446 (2000).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A LC 50 valor pode ser usado para estabelecer como base a susceptibilidade de uma população-alvo (s). O valor destes dados pode estar em pesquisas de monitoramento futuro ou para o propósito imediato de comparar os resultados atuais para que de uma LC previamente determinado 50 para determinar a suscetibilidade da população-alvo mudou. LC 50 reais valores podem ser comparados entre as populações através da análise dos intervalos de confiança de 95%, se os limites superiores e inferiores não se sobrepõem, então é provável que a população tem experimentado uma mudança significativa na susceptibilidade e em algumas situações é uma indicação da resistência 33. A LC 50 s também pode ser usado para examinar as mudanças sazonais na inseticida esusceptibilitye 28, ou comparar as respostas entre as espécies ou inseticida AI s. Trabalho considerável também utilizar esses dados para comparar as respostas entre homens e mulheres de 10 ou entre adultos e imaturos, 10,34. Às vezes, intervalos de confiança são amplos ou não capaz de ser calculado. Para obter mais apertado intervalos de confiança de realizar o bioensaio com mais insetos e / ou mais concentrações.

<table><tbody><tr><td>Béquer de vidro de 50-100 ml </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frascos volumétricos com rolhas (pode-se usar frascos âmbar para pesticidas sensíveis à luz, como piretróides)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Frascos de cintilação de vidro de 20 ml com tampas sem revestimento interno</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Um método para colorir frascos (tinta ou canetas)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rolador comercial de cachorro-quente (elemento de aquecimento desconectado)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 frascos de lavagem (um modificado de modo que a abertura seja ampla para entrega rápida do líquido e outro com bico de abertura pequena para entrega lenta dos líquidos)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Barquinho de pesagem pequeno (certifique-se de que todos os materiais plásticos sejam resistentes à acetona)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acesso a uma balança com leitura de 0,001 g ou precisão superior.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetador repetidor</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pontas apropriadas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de vidro que se encaixam no frasco volumétrico.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Capa (usada para remover o cheiro de acetona)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Local para armazenar soluções de inseticida e frascos [geladeira (soluções), sala escura ou congelador, dependendo do produto químico (frascos)]</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bioensaios de resistência a inseticidas monitoramento

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Resistência de pragas a pesticidas é um problema crescente, pois os pesticidas são parte integrante de alto rendimento agrícola de produção. Quando poucos produtos estão marcados para uma praga individuais dentro de um sistema de cultivo particular, opções de controle químico são limitadas. Portanto, o mesmo produto (s) são usadas repetidamente e contínua pressão de seleção é colocada sobre a praga alvo. Há tanto os custos financeiros e ambientais associados ao desenvolvimento de populações resistentes. O custo de resistência a pesticidas tem sido estimado em aproximadamente US $ 1,5 bilhões por ano nos Estados Unidos. Este artigo irá descrever protocolos, atualmente usado para monitorar artrópodes (insetos, especificamente) populações para o desenvolvimento de resistência. O teste frasco adultos é usado para medir a toxicidade entrar em contato com inseticidas e uma modificação deste teste é utilizado para plantas inseticidas sistêmicos. Nesses bioensaios, os insetos são expostos a inseticidas grau técnico e respostas (mortalidade) registrados em um intervalo pós-exposição específica. Os dados de mortalidade são submetidos a análise de log probit Dose para gerar estimativas de uma concentração letal que fornece a mortalidade para 50% (CL 50) das populações-alvo e uma série de limites de confiança (CL) como estimativas da variabilidade dos dados. Quando estes dados são recolhidos para uma série de mosquiteiros suscetíveis populações, a LC 50 pode ser usado como dados de base para fins de acompanhamento futuro. Após as populações tenham sido expostos a produtos, os resultados podem ser comparados a uma LC previamente determinado 50 usando a mesma metodologia.

Este manuscrito demonstra e discute técnicas usadas para pesquisa susceptibilidade de pesticidas e detectar a resistência ao contato e pesticidas sistêmicos em pragas artrópodes.

Bioensaios de Resistência a Inseticidas Monitoramento

A resistência de pragas a pesticidas é um problema crescente, pois os pesticidas são parte integrante de uma agricultura de produção de alto rendimento. Quando poucos produtos...

O objetivo geral do experimento a seguir é determinar se o inseto desenvolveu resistência ao inseticida. Isso é alcançado preparando concentrações a serem testadas, dissolvendo o inseticida técnico em acetona para inseticidas de contato, conforme descrito por Plaid AL em 1987, ou em solução de água com mel para inseticidas sistêmicos, conforme descrito por Snores Etol em 2008.Como segundo passo, pipete 0,5 mililitros da solução inseticida em acetona em um frasco de vidro isolante de 20 mililitros e gire os frascos em um rolo aquecedor comercial com o elemento de aquecimento desligado ou pipete 0,5 mililitros da solução inseticida em água com mel sobre um pedaço de espuma floral colocado dentro de um frasco. Em seguida, colete o inseto desejado para o teste em frasco de adultos a fim de realizar o bioensaio, que monitora a resistência ao inseticida; os resultados obtidos indicam se o inseto desenvolveu ou não resistência ao inseticida com base na comparação da CL50 obtida por meio de análise probit com CL50 pré-existentes. Olá, meu nome é Audra Miller.Sou do Centro de Pesquisa Delta, Faculdade de Agricultura, Alimentos e Recursos Naturais da Universidade de Missouri, em Portageville, Missouri. Vou realizar um experimento no laboratório de entomologia da Dra. Kelly Kindle. Vou demonstrar o procedimento para detectar se está ocorrendo resistência a inseticidas.Agora vamos começar. É imperativo adotar as devidas precauções de segurança, como óculos de proteção, máscaras e luvas, entre outras. Ao manipular inseticidas, consulte a ficha de dados de segurança do material para obter as recomendações de equipamento de proteção individual adequado ao pesticida específico em teste.Para preparar uma solução estoque, ajuste conforme a pureza e pese o inseticida técnico de maneira adequada. No capuz de segurança, preencha parcialmente um balão volumétrico com acetona. Adicione o inseticida e enxágue o barquinho de pesagem com acetona dentro do balão.Encha o balão volumétrico até a linha de graduação com acetona, misturando-o invertendo-o várias vezes. Faça diluições seriadas conforme necessário, codificando as cores dos frascos para as concentrações usando tinta ou marcadores. Despeje aproximadamente metade do volume correspondente ao número de frascos a serem preparados em um béquer pequeno quando a solução não estiver em uso, e cubra-o para minimizar a evaporação.Use uma pipeta repetidora para adicionar 0,5 mililitros aos frascos. Trabalhe do menor para o maior grau de concentração, começando com o controle de acetona apenas, a fim de revestir o interior do frasco com o inseticida técnico. Coloque os frascos sobre um rolete comercial para cachorro-quente com o aquecimento desligado.Deixe os frascos girarem até que toda a acetona tenha evaporado. Examine individualmente cada frasco para garantir a secagem. Reúna os insetos a serem testados utilizando armadilhas de feromônios, redes de varredura ou qualquer outro método de captura em massa.Fornecer alimento e umidade aos insetos por oito a 24 horas. Selecionar espécimes saudáveis e ativos para o bioensaio, com 10 a 25 insetos por concentração de teste. Colocar os insetos nos frascos de modo que fiquem expostos a toda a faixa de concentrações, e não apenas a uma concentração por vez.Após o tempo apropriado de incubação, avalie a mortalidade com base em critérios de movimento coordenado, como a capacidade de se virar caso seja colocado sobre sua superfície dorsal ou de apresentar movimento coordenado quando levemente estimulado. Se o inseto conseguir se virar, mas cair logo em seguida, não há movimento coordenado, portanto deve ser considerado morto. Registre o número de indivíduos vivos e mortos e calcule a porcentagem de sobrevivência para todas as concentrações.Prepare os frascos com o inseticida técnico dissolvido em solução aquosa de mel a 10%. Pese o mel para preparar uma solução aquosa de mel a 10% em volume, transfira para um balão volumétrico e adicione o inseticida técnico à solução aquosa de mel, enxaguando o barquinho. Repita o processo de diluição em cereais, mas utilize solução aquosa de mel em vez de acetona. Corte um pedaço de espuma floral e coloque-o dentro do frasco Eloqua.Coloque 0,5 mL de solução sobre a espuma floral, encerrando os insetos com uma bola de algodão em vez de uma tampa. Realize o bioensaio da mesma maneira que faria com inseticidas de contato, corrigindo a mortalidade no controle. De acordo com Abbott, determine a concentração letal necessária para matar 50% de uma população e os intervalos de confiança de 95%.Isso pode ser realizado utilizando um programa de software como o SAS Proc probate ou o Polo Plus, por exemplo. Neste programa de exemplo para o SAS, dose representa a concentração utilizada no bioensaio. N é o número de indivíduos testados em uma determinada concentração e resposta é o número de indivíduos mortos. Encontre a probabilidade de 0,5 e este é o CL50 com limites de confiança de 0,1891 a 0,3273 microgramas por frasco. Se existirem dados de linha de base para o inseto testado ou um CL50 obtido a partir de uma população suscetível conhecida, o novo CL50 pode ser comparado ao CL50 dos dados de linha de base ou de populações suscetíveis.Se a LC50 basal fosse 0,1487 microgramas por frasco, com limites de confiança de 0,1167 a 0,1793 microgramas por frasco, poder-se-ia concluir que houve uma alteração significativa na resistência, pois os limites de confiança não se sobrepõem. No entanto, se a LC50 basal fosse 0,1487 microgramas por frasco, mas os limites de confiança fossem de 0,0958 a 0,1983 microgramas por frasco, não haveria um aumento significativo na resistência, pois os limites de confiança se sobrepõem. Este experimento pode ser usado para ajudar a determinar se a resistência ao inseticida é ou não a causa da falha do inseticida, mas lembre-se de que, ao trabalhar com inseticidas, você sempre deve usar os equipamentos de proteção adequados. Agora.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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