Name: Análise direta de células individuais por Espectrometria de Massa à pressão atmosférica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 19 s
Description: Aprenda a análise direta de células individuais por espectrometria de massa LAESI à pressão atmosférica. Este método permite investigar metabolitos e lipídios em células vegetais e animais sem preparação extensiva.

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Os autores agradecem o apoio financeiro das seguintes instituições: a National Science Foundation (Grant 0719232), o Departamento de Energia (Grant DEFG02-01ER15129), o WM Keck Foundation (Grant 041.904), ea George Washington University Fundo Enhancement Research. Os autores são gratos pelas fibras ópticas GeO2 baseado generosamente fornecida por sistemas de fibra de infravermelhos (Silver Spring, MD), bem como para a discussão inicial sobre o protocolo sobre gravação de fibra por Mark E. Reeves e Joan A. Hoffmann da George Washington University. Os autores também gostariam de agradecer a Jessica A. Stolee por sua ajuda durante a filmagem do protocolo.

1. Componentes ópticos <ol><li> Ablação a laser para o laser de ionização electrospray ablação (LAESI) espectrometria de massa (MS) é produzido por um laser de 5 ns pulso em comprimento de onda 2,94 mM. Um oscilador paramétrico óptico sintonizável impulsionada por um laser Nd: YAG (Opolette 100, Opotek Inc., Carlsbad, CA) é usado para ablação neste estudo. A taxa de repetição é selecionado entre 5 e 100 Hz. Este é um laser classe IV que após a exposição direta pode causar danos permanentes graves nos olhos ou da pele. A reflexão difusa do feixe de laser também podem ser perigosos para a pele ou olhos. Usar um óculos de laser adequados de protecção. </li><li> A fibra óptica feitos de germânio de vidro baseado no dióxido de infravermelho foi obtido a partir Fiber Systems, Inc. (Silver Spring, MD). Se houver Hytrel e poliimida revestimentos em fibra siga as instruções abaixo para removê-los a partir das extremidades. Heat 1-metil-2-pirrolidinona a 130-150 ° C em uma capela. Mergulhe as extremidades da fibra que você quer retirar este líquido em cerca de 1 min ou até que o revestimento começa a amolecer e descolar. Mergulhe o revestimento amolecida em metanol ou isopropanol por um minuto, e limpe qualquer revestimento restantes com um guardanapo que não solte fiapos. Após a remoção do revestimento, cleave ambas as extremidades da fibra com uma lâmina de safira (Kitco Fibra Óptica, Virginia Beach, VA) marcando e delicadamente tirando-los. </li><li> Para alcançar a nitidez desejada, quimicamente uma extremidade do etch ponta da fibra em 1% (v / v) de ácido nítrico (grau de reagente) solução. Verticalmente imergindo a extremidade da fibra selecionados para a solução de ácido a uma profundidade de 300 a 500 mm após o contacto inicial. Após aproximadamente 15 minutos de gravação, a dica vai separar-se espontaneamente a partir da superfície do ácido. Isso resulta em uma ponta da fibra afiada com ~ 15 mM raio de curvatura. Enxágüe com água deionizada para remover qualquer resíduo do ácido. </li><li> Montagem final gravado da fibra em um micromanipulador (MN-151, Narishige, Tóquio, Japão) e trazê-lo à proximidade (~ 20 mm) da superfície da célula para deposição de energia eficiente. </li><li> Segure a extremidade não-gravado da fibra óptica por um bare fibra chuck (BFC300, Siskiyou Corporation, Grants Pass, OR). Para o alinhamento óptico, o chuck fibra é montado em um tradutor cinco eixos (BFT-5, Siskiyou Corporation, Grants Pass, OR). A energia do laser (0,5 a 1 mJ) é acoplado na fibra por foco o feixe por um fluoreto de cálcio plano-convexo ou lente anti-reflexo ZnSe revestido (Infrared Produtos Ópticos, Farmingdale, NY) para o seu fim não-gravadas. Espelhos de ouro protegidas (PF10-03-M01, Thorlabs, Newton, NJ) são utilizados para orientar o feixe de laser meados de IR sobre a lente de foco. </li></ol> 2. Setup electrospray <ol><li> O sistema de electrospray pode ser construído usando os seguintes componentes: a união do metal com ponteira perfluoroelastômero condutores, conexões, tubos de manga, porta agulha (por exemplo, U-435, M215, F-331Nx, F-242x, 9013, respectivamente IDEX Health &amp; Sciences, Oak Harbor, WA), bem como tubos de sílica fundida (por exemplo, CT360-100-50-5, Nova Objetivo Inc., Woburn, MA). O emissor recomendado é feito de aço inoxidável e tem uma ponta cônica com um ID de 50 mm (por exemplo, MT320-50-5-5, Nova Objetivo Inc., Woburn, MA). </li><li> Prepare a solução de metanol a 50% com 0,1% de ácido acético (v / v) para o electrospray. A solução é bombeada a uma taxa de 200 a 300 nl / min por uma bomba de seringa (Harvard Apparatus, Holliston, MA), utilizando, por exemplo, um. Seringa 500 mL (81.222, empresa Hamilton, Reno, NV) </li><li> Aplicar alta voltagem entre 2.800 e 3.000 V para a união de metal por uma fonte de alimentação regulada (PS350, Stanford Research Systems Inc, Sunnyvale, CA) para gerar um electrospray estável. Certifique-se de todas as conexões elétricas estão seguras e blindado com a blindagem aterrada. Contato direto com expostos de alta tensão pode resultar em choque elétrico. </li></ol> 3. Manuseamento da amostra <ol><li> Obter o tecido vivo ou amostra de células a partir de uma fonte adequada e mantê-los como recomendado antes da análise. As lâmpadas Allium cepa para esta demonstração foram compradas de uma loja local. Cortar uma lâmpada longitudinalmente por um bisturi cirúrgico. Um segmento de poucos centímetros de uma escala foi seccionada em uma tira. Uma monocamada intacta do tecido interior da epiderme é removida. </li><li> A superfície molhada da epiderme é usado para montar o tecido sobre uma lâmina pré-limpeza de vidro de microscópio. Segure a lâmina por um detentor de propósito geral da placa (FP01, Thorlabs Inc., Newton, NJ) montada em um palco tradução de três eixos para o posicionamento. Adquirir os espectros de massa imediatamente após a montagem da amostra para evitar a degradação celular. </li></ol> 4. Sistema de Visualização <ol><li> Dois microscópios de longa distância são usados ​​para selecionar as células para análise e para manter a distância entre a ponta afiada de fibra ea superfície da célula. O último é montado sob 15 ° ângulo de -30 medido a partir da superfície. Este sistema consiste em along microscópio de vídeo à distância (7x zoom óptico de precisão, Edmund Optics, Barrington, NJ), com uma infinidade de 5x corrigido lente objetiva (M Apo Plano de 5x, Mitutoyo Co., Kanagawa, Japão) equipado com uma câmera CCD (Marlin F131, a Allied Vision Technologies , Stadtroda, Alemanha) para monitoramento e captura de imagem. </li><li> O microscópio segundo vídeo é montado em um ângulo reto com a superfície da amostra para visualizar as células a partir do topo. Este sistema fornece feedback visual para alinhar a ponta da fibra ao longo da célula selecionada para ablação e análise. Ele consiste de um zoom óptico de 7x de precisão (Edmund Optics, Barrington, NJ), equipada com uma infinidade 10x corrigido longa lente objetiva do trabalho à distância (M Plano de Apo 10x, Mitutoyo Co., Kanagawa, Japão) e uma câmera CCD. </li></ol> 5. Aquisição de espectros de massa <ol><li> Ligue o laser, o electrospray eo espectrômetro de massa, por exemplo, um sistema de tempo de vôo quadrupolo (Q-TOF Premier, Waters, Milford, MA). Otimizar a geometria da fonte de íons LAESI ajustando a posição do ponto de ablação e emissor electrospray em relação ao outro eo orifício do espectrômetro de massa para atingir intensidades máximas de íons. </li><li> Selecione a célula de interesse para análise usando o sistema de visualização top-view. Após a seleção, mova o estágio de amostra para levar a célula selecionada diretamente abaixo da ponta afiada da fibra óptica. Usando o microscópio de visão lateral reajustar a ponta-a-célula de distância da superfície para ~ 20 mM. </li><li> Pulsos de laser de fogo na célula selecionada através da ponta de fibra gravado. Este resultado na perfuração da parede celular e da ejeção do citoplasma na forma de partículas. Depois postionization pela electrospray, os íons produzidos são coletados pelo espectrômetro de massa e espectros de massa são registradas. </li><li> Após a aquisição de dados, colocar o laser, o electrospray eo espectrômetro de massa no modo de espera ou desligá-los. Manter o A. ablated cepa amostra de tecido para a observação opcional por microscopia de luz. </li></ol> 6. Resultados representante Ablação bem sucedida de uma única célula resultados na explosão da parede celular e à recolha de um espectro de massa LAESI. Uma experiência mal sucedida geralmente não resulta em ablação e / ou nenhum espectro de massa. Para fins de demonstração, apresentamos os resultados da análise LAESI-MS de uma célula simples incorporada epidérmica de uma A. bulbo cepa. Figura 2a mostra uma imagem de microscopia óptica após a representante de amostragem de uma célula. A parede celular é perfurado ea extensão da perfuração é limitada pelas fronteiras com as células vizinhas. As células adjacentes parecem estar intactos. Figura 2b mostra um espectro de massa representante LAESI produzido a partir da célula. Uma grande variedade de íons são detectados a partir do A. cepa da célula e com base em suas massas precisas, padrões de distribuição de isótopos, e, em alguns casos, tandem espectros de massa, são tentativamente atribuído aos metabólitos endógenos. Os íons detectados a partir de uma única célula foram semelhantes aos observados na análise do mesmo tecido por convencionais LAESI-MS de várias células 13. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Esquemática de análise única célula por LAESI-MS. A meados de IR pulso de laser é acoplado em uma fibra óptica e entregue com a amostra colocada sobre lâmina de vidro. A ponta da fibra afiada focaliza a luz para dentro da célula-alvo e da energia depositada rajadas da célula. A pluma de ablação produzida (pontos vermelhos) é mesclada com uma pluma electrospray (pontos pretos) as gotas coalescem (pontos verdes), resultando em amostra de produção de íons específicos. Esses íons são analisados ​​e detectados pelo espectrômetro de massa (MS). Dois microscópios de longa distância de vídeo, Microscópio Microscópio 1 e 2, são utilizados para monitorar a distância entre a ponta da fibra e da superfície celular e selecionar uma célula para análise, respectivamente. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2a.jpg" alt="Figura 2a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2a"> Figura 2a marca. Ablação em uma única célula epidérmica de uma A. bulbo cepa. As células adjacentes não apresentam danos visíveis e, posteriormente, podem ser analisados ​​separadamente. <img src="/files/ftp_upload/2144/2144fig2b.jpg" alt="Figura 2b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2b"> Figura 2b Espectro de massa. Correspondentes à ablação de um único A. cepa de células epidérmicas mostra a presença de metabólitos primários e secundários.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O conteúdo de água no citoplasma da célula e resistência à tração da parede celular ou membrana são fatores críticos que regem a ablação de células isoladas durante LAESI-MS análise. A influência do laser tem que ser ajustada para atingir os limiares de ablação dos tipos de células diferentes. A influência do laser entregues depende da energia do pulso de laser e na distância entre a ponta da fibra e da superfície da célula. Minimizar a perturbação de células vizinhas durante a análise única célula é crítica. Manter a energia do laser no limiar de ablação limita o efeito de análise sobre as células adjacentes. Uma das aplicações possíveis é usando células individuais como os pixels naturais volumétrica (voxels) para produtos químicos de imagem por MS. Em comparação com a coleta de dados em uma grade retangular artificial, muitas vezes, química imagem de uma célula do tecido de cada vez é mais provável que mantenham a organização espacial das interações bioquímicas entre as células.

<table><tbody><tr><td>Ácido acético</td><td>Fluka</td><td>45727</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fluka</td><td>65548</td><td></td></tr><tr><td>1-metil-2-pirrolidinona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M79603</td><td></td></tr><tr><td>Água</td><td>Fluka</td><td>39259</td><td></td></tr></tbody></table>

análise direta de células individuais por espectrometria de massa à pressão atmosférica

Direct Analysis of Single Cells by Mass Spectrometry at Atmospheric Pressure

Análise de produtos bioquímicos em células individuais é importante para a compreensão do metabolismo celular, ciclo celular, adaptação, estados de doença, etc Mesmo os tipos de células apresentam mesma composição bioquímica heterogêneos dependendo de suas condições fisiológicas e interações com o ambiente. Métodos convencionais de espectrometria de massa (MS) utilizados para a análise de biomoléculas em células individuais dependem de preparação da amostra extensa. Removendo as células do seu ambiente natural e processamento da amostra extensa pode levar a mudanças na composição celular. Métodos de ionização do ambiente permitem a análise de amostras em seu ambiente nativo e sem a preparação da amostra extensa. 1 As técnicas com base no infravermelho médio ablação a laser (meados de IR) de materiais biológicos em comprimento de onda 2,94 mM utilizar a excitação repentina de água que resulta em fase de explosão. duas técnicas de ionização ambiente baseado em meados de IR radiação laser, como laser de ionização electrospray ablação (LAESI) e pressão atmosférica infravermelho matrix-assisted laser de ionização de dessorção (AP-IR MALDI), têm demonstrado com sucesso a capacidade de analisar diretamente a água tecidos ricos e biofluidos à pressão atmosférica. 3-11 LAESI Em meados da década de IR pluma de ablação a laser que consiste principalmente de partículas neutras do aglutina amostra com gotas electrospray altamente carregada de produzir íons. Recentemente, em meados de IR ablação de células isoladas foi realizada através da apresentação da radiação meados de IR através de uma fibra gravado. A pluma gerada a partir deste ablação foi postionized por um electrospray permitindo a análise de metabólitos diversos em uma única célula por LAESI-MS. 12 Este artigo descreve o protocolo para a análise detalhada única célula usando LAESI-MS. O vídeo apresentado demonstra a análise de uma única célula epidérmica da pele de uma lâmpada Allium cepa. O esquema do sistema é mostrado na Figura 1. Um exemplo representativo de ablação única célula e espectrometria de massa LAESI da célula são fornecidos na Figura 2.

Análise única célula é realizada por espectrometria de massa de células vegetais e animais à pressão atmosférica usando uma fibra óptica afiada para provar as células para o laser de ionização electrospray ablação (LAESI) espectrometria de massa.

Análise direta de células individuais por Espectrometria de Massa à pressão atmosférica

A análise de substâncias bioquímicas em células individuais é importante para a compreensão do metabolismo celular, do ciclo celular, da adaptação, de estados patológicos, etc. Mesmo a mesma célula...

O objetivo geral do experimento a seguir é ejetar o conteúdo de uma única célula viva e ionizar as biomoléculas liberadas para análise por um espectrômetro de massas à pressão atmosférica. Isso é alcançado mediante a seleção de uma única célula por meio de um microscópio de longa distância e a ablação da célula selecionada por um pulso a laser de comprimento de onda de 2,94 micrômetros, entregue através de uma fibra óptica afiada. A ablação de uma única célula resultará na formação de uma pluma microscópica de material particulado neutro para ionizar a pluma de ablação.É interceptado por uma eletrosspray. As gotículas carregadas do spray coalescem com as partículas da pluma de ablação originada da célula. As gotículas resultantes são semeadas com as moléculas da célula e produzem os íons correspondentes.São obtidos resultados que mostram um espectro de massas de uma única célula. O espectro contém inúmeras picos relacionados aos metabólitos e lipídios da célula. Olá, sou o Dr. Bin Drester do Laboratório Verese, do Departamento de Química da Universidade George Washington.Hoje vamos mostrar o procedimento para análise direta de células vivas individuais por espectrometria de massas à pressão atmosférica. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar metabólitos e lipídios de células individuais de plantas e animais. Então, vamos começar.A ablação a laser para ablação a laser, ionização por eletrosspray, espectrometria de massa ou MS preguiçosa é produzida por um pulso de laser de cinco nanosegundos em um comprimento de onda de 2,94 micrômetros. Óptica ajustável. Oscilador paramétrico sintonizável acionado por um laser de neodímio YAG é utilizado para ablação neste estudo.Para começar, monte a extremidade gravada de uma fibra óptica em um micromanipulador e aproxime-a da superfície celular. Para uma deposição eficiente de energia, segure a extremidade não gravada da fibra óptica com um porta-fibra descoberto para o alinhamento óptico. O porta-fibra é montado em um tradutor de cinco eixos.Cople a energia do laser à fibra focalizando o feixe com uma lente plano-convexa de fluoreto de cálcio ou de selênio de zinco com revestimento antirreflexo em sua extremidade não gravada, utilizando espelhos dourados protegidos para direcionar o feixe de laser do infravermelho médio até a lente de foco. Para manter a distância entre a ponta afiada da fibra e a superfície celular, utilize um microscópio de vídeo de longa distância montado em um ângulo de 15 a 30 graus medido a partir da superfície. Este sistema também é composto por uma lente objetiva corrigida ao infinito com aumento de cinco vezes, equipada com uma câmera CCD para monitoramento e captura de imagens.Um segundo microscópio de vídeo é montado em ângulo reto em relação à superfície da amostra para visualizar as células de cima e selecioná-las para análise. Este sistema fornece retroalimentação visual para alinhar a ponta da fibra sobre a célula selecionada para ablação e análise. Ele consiste em um conjunto óptico de zoom de precisão sete vezes com uma lente objetiva de longa distância de trabalho corrigida ao infinito de dez vezes e uma câmera CCD.O sistema de eletrosspray foi construído utilizando uma união metálica com perfluoro condutivo, elastômero, conexões ferais, tubos, porta de agulha com luva, bem como tubo de sílica FU. O emissor recomendado é feito de aço inoxidável e possui uma ponta afilada com 50 micrômetros de diâmetro; prepare uma solução de 50% de metanol com 0,1% de ácido acético para o eletrosspray. Bombeie a solução a uma taxa de 200 a 300 nanolitros por minuto por meio de uma bomba de seringa.Usando uma seringa de 500 microlitros, uma alta tensão entre 2, 803, 000 volts será aplicada à junção metálica por uma fonte de alimentação regulada. Para gerar um eletrosspray estável, certifique-se de que todas as conexões elétricas estejam seguras e protegidas com o blindagem, corretamente aterradas, pois o contato direto com alta tensão exposta pode resultar em choque elétrico. Obtenha a amostra de tecido ou célula viva de uma fonte apropriada e mantenha-a conforme recomendado antes da análise.Os bulbos de alho para esta demonstração foram adquiridos em uma loja local para o preparo da amostra. Corte longitudinalmente o bulbo de alho com um bisturi cirúrgico, seccionando um segmento de aproximadamente dois centímetros quadrados da escama de um bulbo de cebola. Em seguida, retire uma monocamada intacta do tecido epidermal interno. Utilize a superfície úmida da epiderme para montar o tecido em uma lâmina de microscópio de vidro previamente limpa.Segure a lâmina com um suporte de placa de uso geral, montado em uma plataforma de translação de três eixos para posicionamento. Imediatamente após montar a amostra, adquira os espectros de massa para evitar a degradação celular. Comece ligando o laser, a eletrosspray e o espectrômetro de massa.Otimize a geometria da fonte de íons lazy ajustando a posição do ponto de ablación em relação ao emissor de eletrosspray e à abertura do espectrômetro de massas. Para obter a máxima intensidade de íons, selecione a célula de interesse para análise utilizando o sistema de visualização em vista superior. Após a seleção, mova a platina da amostra para posicionar a célula selecionada diretamente abaixo da ponta afiada da fibra óptica.Usando o microscópio com vista lateral, reajuste a distância entre a ponta e a superfície da célula para aproximadamente 20 mícrons. Uma vez na posição correta, aplique pulsos a laser na célula selecionada por meio da ponta da fibra gravada. Isso resulta na perfuração da parede celular e na ejeção do citoplasma na forma de material particulado.Após a ionização posterior pelo eletrosspray, os íons produzidos são coletados pelo espectrômetro de massas e os espectros de massas são registrados. Após a aquisição dos dados, coloque o laser, o eletrosspray e o espectrômetro de massas em modo de espera ou desligue-os. Mantenha a amostra de tecido de Allium cepa ablacionada para observação opcional por microscopia óptica; a ablação bem-sucedida de uma única célula resulta na ruptura da parede celular e na coleta de um espectro de massas satisfatório.Aqui estão os resultados da análise MS preguiçosa de uma única célula epidérmica embutida de um bulbo de Allium SEPA, mostrando uma imagem representativa de microscopia óptica. Após a amostragem de uma célula, a parede celular é perfurada e a extensão da perfuração é limitada pelos limites com as células vizinhas. As células adjacentes parecem estar intactas.Aqui é mostrado um espectro de massa lazy representativo produzido a partir da célula. Uma grande variedade de íons é detectada a partir do alium sea por célula, e com base em suas massas exatas, padrões de distribuição de isótopos e espectros de massa em tandem, os íons são cuidadosamente atribuídos a metabólitos endógenos. Os íons detectados a partir de uma única célula foram semelhantes aos observados na análise do mesmo tecido por espectrometria de massa lazy convencional de múltiplas células.Acabamos de mostrar como analisar células vivas individuais por espectrometria de massas à pressão atmosférica. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar de usar proteção ocular para evitar exposição acidental a lasers de infravermelho da classe quatro. É isso aí.Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Microsonda eletroforese capilar espectrometria de massa para célula única Metabolomics em embriões de viver rã (Xenopus laevis)

Uma plataforma integrada da manipulação da pilha é desenvolvida para o uso conjuntamente com uma instalação de espectrometria maciça da único-ponta de prova para a análise em linha de pilhas individuais da suspensão circunstâncias ambientais.

Plataforma integrada da manipulação da pilha acoplada com a único-ponta de prova para a análise da espectrometria maciça das drogas e dos metabolitos em únicas pilhas da suspensão

Este protocolo apresenta uma plataforma integrada de espectroscopia-massa raman (EM) que é capaz de alcançar a resolução unicelular. A espectroscopia raman pode ser usada para estudar a resposta celular aos medicamentos, enquanto a EM pode ser usada para análise direcionada e quantitativa da captação e metabolismo de medicamentos.

Uma plataforma integrada de espectroscopia e espectrometria de massa para estudar a absorção, metabolismo e efeitos de drogas unicelulares

Neste protocolo, descrevemos como preparar células de mamíferos para análise proteômica unicelular via espectrometria de massa usando reagentes e equipamentos comercialmente disponíveis, com opções para pipetagem manual e automática.

Preparação de Proteômica de Célula Única para Análise de Espectrometria de Massa usando Lise de Calor Congelante e um Transportador Isobárico

Este protocolo visa preservar metabólitos celulares para espectrometria de massa de célula única (SCMS), combinando lavagem de solução salina volátil, têmpera rápida de nitrogênio líquido, liofilização e armazenamento de -8 °C. Isso demonstra que a extinção do nitrogênio líquido é essencial para manter os perfis de metabólitos, enquanto o armazenamento refrigerado prolongado deve ser minimizado para evitar alterações metabólicas.

Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas

Este protocolo descreve a imagem por espectrometria de massa de célula única de células OVCAR-8 usando ionização por eletrospray por dessorção acoplada a espectrômetros de massa Orbitrap para análise metabolômica de alta resolução espacial.

Imagem por Espectrometria de Massa de Célula Única usando Ionização por Eletrospray por Dessorção Acoplada a Espectrômetros de Massa Orbitrap

Este vídeo demonstra a preparação de uma ultra-fina camada de matriz / analito para a análise de peptídeos e proteínas por Matrix Assisted Laser-ionização dessorção Espectrometria de Massa (MALDI-MS).

MALDI preparação da amostra: o método de Camada Ultra Thin

Aprenda a análise direta de células individuais por espectrometria de massa LAESI à pressão atmosférica. Este método permite investigar metabolitos e lipídios em células vegetais e animais sem preparação extensiva.

Análise direta de células individuais por Espectrometria de Massa à pressão atmosférica

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