Name: Manutenção de Wolbachia em Cell-livre Médio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Aprenda a purificar Wolbachia pipientis de células de Anopheles gambiae e cultivar essa bactéria endossimbionte em meio livre de células. Este método inclui lise com esferas de vidro, centrifugação diferencial e ensaio de viabilidade.

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Os autores não têm nada a declarar.

manutenção de wolbachia em cell-livre médio

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Neste protocolo de vídeo, os procedimentos são demonstrados a (1) purificar simbiontes Wolbachia para fora das células cultivadas mosquito, (2) usar um teste de fluorescência para verificar a viabilidade da Wolbachia purificada e (3) manter a Wolbachia agora extracelular na célula meio livre . Purificada Wolbachia permanecem vivos na fase extracelular, mas não replicar até re-inoculado em células eucarióticas. Wolbachia extracelular purificada desta forma irá permanecer viável por pelo menos uma semana à temperatura ambiente, e possivelmente por mais tempo. Purificada Wolbachia são adequados para micro-injeção, extração de DNA e outras aplicações.

Este vídeo descreve um método para purificar Wolbachia pipientis a partir de uma linhagem de células Anopheles gambiae e cultura do endossimbionte na célula meio livre. Um ensaio para a viabilidade da bactéria é demonstrada.

Manutenção de Wolbachia em Cell-livre Médio

Neste protocolo em vídeo, são demonstrados os procedimentos para (1) purificar simbiontes Wolbachia de células de mosquito cultivadas, (2) utilizar um ensaio fluorescente para...

Meu nome é Courtney Ston. Trabalho na Escola de Saúde Pública Johns Hopkins Bloomberg, no laboratório do Dr. Jason Rascon. Hoje realizaremos a purificação bacteriana de células de insetos cultivadas.Na verdade, é um procedimento muito simples. Começamos colhendo nossas células e, em seguida, rompemos fisicamente as membranas das células hospedeiras eucarióticas usando a lise com esferas de vidro. Depois, utilizamos centrifugação diferencial para separar as bactérias dos detritos celulares do hospedeiro.Em seguida, utilizamos uma série de etapas de filtração para remover ainda mais partículas de células hospedeiras, de modo que, ao final, restará apenas o pellet bacteriano purificado. Esta é, na verdade, uma das principais exigências. É uma cabine de cultura celular e é usada para manter tudo estéril, porque a cultura celular é muito suscetível à contaminação.Também precisamos de meio de cultura celular, das próprias células, e as cultivamos em frascos de plástico. Também precisamos de esferas de vidro de três milímetros, tubos cónicos de 50 ml, e de uma centrífuga capaz de realizar centrifugação em alta velocidade, aproximadamente 18.000 ×g, para formar o pellet das nossas bactéria

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Biologia

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Quantitativos e automatizada de alto rendimento de todo o genoma Telas de RNAi em C. elegans</em

Vampiric Isolamento de fluido extracelular a partir de<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Este vídeo apresenta um método para isolar e cultivar células embrionárias de C. elegans  in vitro para isolar e cultivar estérilmente.

Digestão enzimática e dissociação manual: um método para preparar embriões de C. elegans para cultura de células

C. elegans é normalmente cultivadas em placas de agar sólido ou em meio líquido semeadas com E. coli. Para evitar subprodutos bacterianos de confundir os estudos toxicológicos e nutricionais, utilizamos um meio líquido axênico, CEHR, para crescer e sincronizar um grande número de vermes para uma gama de aplicações a jusante.

A cultura Caenorhabditis elegans Em Axenic Liquid Media e Criação de transgênicos Worms por bombardeamento com micropartículas

Os mosquitos Aedes aegypti infectados com Wolbachia estão sendo liberados em populações naturais para suprimir a transmissão de arbovírus. Descrevemos métodos para traseira Ae. aegypti com Wolbachia infecções no laboratório para experiências e lançamento de campo, tomando as precauções para minimizar a seleção e adaptação de laboratório.

Manter o Aedes aegypti , mosquitos infectados com Wolbachia

Este protocolo descreve como estabelecer infecção viral na vivo em Drosophila melanogaster , usando o método de nano-injeção e técnicas básicas para analisar a interação vírus-hospedeiro.

Estabelecimento de infecção Viral e análise da interação vírus-hospedeiro em Drosophila Melanogaster.

Quatro métodos foram usados para detectar wolbachia intracelular, que se complementou e melhorou a precisão de detecção da infecção wolbachia da Aa23 e Aa23-T derivadas de Aa23 e Aa23-T curadas da infecção nativa wolbachia usando antibióticos.

Detectando wolbachia strain wAlbb em linhas celulares Aedes albopictus

Apresentamos aqui um protocolo otimizado para o cultivo de nematoides individuais isolados em meios sólidos em dispositivos microfabricados de múltiplos poços. Essa abordagem permite que animais individuais sejam monitorados ao longo de suas vidas para uma variedade de fenótipos relacionados ao envelhecimento e à saúde, incluindo atividade, tamanho e forma corporal, geometria do movimento e sobrevivência.

Cultura de Longa Duração e Monitoramento de Caenorhabditis elegans Isolados em Meio Sólido em Dispositivos Multipoços

Aqui, apresentamos um protocolo para cultura de isolados de nematoides individuais em meio sólido para rastreamento de parâmetros fisiológicos ao longo da vida e quantificação de fluorescência. Este sistema de cultura inclui uma barreira de ácido palmítico ao redor de poços de verme único para evitar a fuga de animais, permitindo o uso de intervenções aversivas, incluindo bactérias patogênicas e estressores químicos.

Cultura de Longo Prazo de Caenorhabditis elegans Individuais em Meio Sólido para Monitoramento Longitudinal de Fluorescência e Intervenções Aversivas

As linhagens celulares são úteis em estudos sobre organismos intracelulares que não podem ser cultivados fora de suas células hospedeiras. Embora as linhagens infectadas com Wolbachia tenham permitido muitas descobertas, a heterogeneidade dentro dessas linhagens pode levar a resultados experimentais variáveis. Apresentamos um protocolo para geração de clones unicelulares e culturas contínuas a partir de células JW18 infectadas com Wolbachia.

Geração de Culturas Monoclonais a partir de Wolbachia-infectada com Drosophila melanogaster JW18

Aprenda a purificar Wolbachia pipientis de células de Anopheles gambiae e cultivar essa bactéria endossimbionte em meio livre de células. Este método inclui lise com esferas de vidro, centrifugação diferencial e ensaio de viabilidade.

Manutenção de Wolbachia em Cell-livre Médio

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