Name: Indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Aprenda a induzir e pontuar clinicamente a encefalomielite autoimune experimental crônico-recidivante em ratos DA. Este modelo reproduz características da esclerose múltipla humana para pesquisa em neurociência.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Indução e monitorização de EAE crónica recidivante A emulsão é uma mistura 1:1 do antígeno em solução aquosa adicionado ao complementada adjuvante de Freund completo. É muito importante adicionar o antígeno ao adjuvante e não o contrário! Há uma grande quantidade de resíduos ao fazer e injetando uma emulsão. Sempre preparar 1,5 ou 2 vezes mais do que o que você precisa. Use argamassa autoclavado, pilão, seringas de vidro, e pontes. Todos os plásticos devem ser estéreis. A preparação pode ser feito em uma bancada de laboratório regular. 1. Preparação do adjuvante complementado Pesar 30 mg de Mycobacterium tuberculosis (Difco catalogo 231.141) e coloque em um pilão. Transformar em pó fino sem pressionar demasiado duro para evitar quebrar as bactérias. Adicionar 10 ml de adjuvante completo de Freund H37Ra (Difco catalogo 231.131) e misturar. Este adjuvante complementada agora contém 4 mg / ml Mycobacterium tuberculosis. Transferir para um tubo. 2. Preparação do homogenato medula espinhal Coletar medula espinhal de ratos DA (idade / sexo indiferente) e armazenar congelado a -80 ° C. Pesar os cabos congelados espinhal para ter o suficiente para mistura 1:1 (peso: volume) com o adjuvante suplementado. Picar a medula espinhal mais fino possível com uma lâmina de barbear, a transferência para a argamassa usada na seção 1, e fazer um colar com o pilão. 3. Preparação da emulsão <ol><li> Lugar complementada completa adjuvante de Freund em um tubo. Vortex em alta velocidade. Adicionar a queda da medula espinhal homogeneizado a gota enquanto vórtex. Quando todos os homogeneizado medula espinhal é adicionada vórtice, por mais 5 minutos. A mistura deve virar rosa claro. </li><li> Coloque a emulsão em uma seringa de vidro de 5 ml e vinculá-lo para outra seringa de vidro 5 ml usando uma ponte de 18G (Fisher catálogo # 14-825-17L). Enviar a emulsão de uma seringa para o outro até que se torne rígido (5-10 min). Se mais de 5 ml de emulsão é preparada, use várias seringas 5 ml NÃO use seringas maiores. </li><li> A emulsão pode ser armazenada nas seringas a 4 ° C por 3 semanas. Eu recomendo prepará-la pelo menos 12 horas de antecedência para verificar se ele não quebrar. Ele deve permanecer espessa e não separados em duas fases. A cor irá mudar durante a noite para uma luz amarela ou bege. </li></ol> 4. Imunização dos ratos <ol><li> Misture a emulsão nas seringas por alguns minutos e transfira para a seringa utilizada para a injeção. Injetar 200 mL por via subcutânea na própria base da cauda usando agulhas 23G e 3 ml seringas Luer-Lock em curto prazo anestesia. </li><li> Os destinatários são 7-9 semanas de idade ratas DA. Ficamos com nossos ratos de Harlan Sprague Dawley-. </li><li> Ratos devem ser observadas duas vezes por dia e pesados ​​diariamente. Os sinais clínicos são esperados 7-15 dias após a injeção da emulsão. </li></ol> Pontuação clínica: 0: sem doença 0.5: cauda limp distal Um: tail limp 2: paraparesia leve, ataxia 3: paraparesia moderada, as viagens ratos de vez em quando 3.5: um dos membros posteriores é paralisado, os outros movimentos 4: paralisia de membros posteriores completo 5: paralisia de membros posteriores e completa incontinência 6: dificuldade em respirar moribunda, não comer ou beber. Euthanize imediatamente.

CB e KGC são co-fundadores e consultores para Airmid Inc.

Há algumas considerações importantes para este protocolo. Genética de ratos DA diferem ligeiramente dependendo do criador, elas são compradas a partir de. Estas diferenças podem aumentar ou diminuir a susceptibilidade dos ratos à EAE de indução. Se o seu ratos são mais suscetíveis a EAE você vai querer reduzir a força da imunização usando não suplementadas adjuvante de Freund completo ou mesmo incompleta adjuvante de Freund. Você também pode considerar a redução da quantidade de emulsão injetada ou diluir o homogeneizado da medula e...

<table><tbody><tr><td>Adjuvante Completo de Freund&amp;rsquo;s</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Produzido pela Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Produzido pela Difco</td></tr><tr><td>Rato DA</td><td>Animal</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Fêmeas, com 7 a 9 semanas de idade.</td></tr><tr><td>Seringas de vidro - 5 ml</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Ponte metálica - 18G</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Seringas plásticas Luer Lok - 3 ml</td><td>Ferramenta</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas - 20G 1 1/2</td><td>Ferramenta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica do sistema nervoso central (SNC), que comumente afeta adultos jovens. É caracterizada por desmielinização e assustando glial em áreas disseminadas no cérebro e medula espinhal. Essas lesões alterar a condução nervosa e induzir a déficits neurológicos incapacitantes que variam com a localização das placas de desmielinização no SNC (por exemplo, paraparesia, paralisia, cegueira, incontinência). Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo para MS. EAE foi induzida acidentalmente em humanos durante a vacinação contra a raiva, usando vírus cultivados em coelho medula espinhal. Resíduos de injeção espinhal com o vírus inativado induziram a doença do SNC. Seguindo essas observações, o primeiro modelo da EAE foi descrita em primatas não-humanos imunizados com um CNS homogeneizado por Rivers e Schwenther em 1935. EAE desde então tem sido gerada em uma variedade de espécies e pode seguir cursos diferentes, dependendo da espécie / estirpe e imunizando antígeno utilizado. Por exemplo, imunizando ratos Lewis com proteína básica da mielina em emulsão com adjuvante induz um modelo aguda da EAE, enquanto o mesmo antígeno induz a uma doença crônica em cobaias. O modelo de EAE aqui descrito é induzida através da imunização contra ratos DA DA medula espinhal de ratos em emulsão em adjuvante de Freund completo. Ratos desenvolvem uma paralisia flácida ascendente dentro de 7-14 dias pós-imunização. Sinais clínicos seguir um curso remitente-recorrente durante várias semanas. Patologia mostra grandes infiltrados imunológico no SNC e placas de desmielinização. Considerações especiais para cuidar de animais com EAE são descritos no final do vídeo.

Este vídeo demonstra o placar de indução e clínicos de um modelo animal de esclerose múltipla: doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental em ratos DA. A doença, induzida pela imunização ratos com uma emulsão contendo medula espinhal de ratos inteiros e adjuvante de Freund completo, apresenta sinais clínicos semelhantes à doença humana.

Indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental

A esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica do sistema nervoso central (SNC) que afeta comumente adultos jovens. Ela é caracterizada por ...

Sou Christine Beaton. Sou pesquisadora assistente no laboratório de George Chen, do Departamento de Fisiologia e Biofísica da Universidade da Califórnia em Irvine. E o que vou mostrar a vocês nos próximos dias é como induzir e monitorar a EAE crônica recidivante, que significa Encefalomielite Autoimune Experimental em ratos DA.Este é um modelo animal para esclerose múltipla, ou melhor, um dos modelos animais para esclerose múltipla. Ele se caracteriza por uma paralisia flácida ascendente nesses animais e por características histológicas que se assemelham à doença humana. Portanto, isso levará vários dias.No primeiro dia, vou mostrar como preparar a emulsão genética com homogenato de medula espinhal vermelha ingênua em adjuvante completo de Freund. No segundo dia, vou demonstrar como imunizar as ratas contra a EAE, e então aguardaremos entre sete e 15 dias para observar os primeiros sinais clínicos nesses animais, momento em que mostrarei os diferentes estágios de progressão da EAE em diversos animais. Primeiramente, vou mostrar todos os reagentes e materiais necessários para preparar a emulsão.O que estou usando é o adjuvante completo de H 37 ra, mas, embora ele já contenha Mycobac

induction-clinical-scoring-chronic-relapsing-experimental-autoimmune

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neste vídeo demonstramos como isolar células mononucleares do sistema nervoso central de ratos com encefalomielite autoimune experimental.

Isolamento de células mononucleares do Sistema Nervoso Central de ratos com EAE

O vídeo demonstra a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo injetando uma combinação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina e Mycobacterium tuberculosis inativado. O modelo permite que os pesquisadores estudem os mecanismos da doença e testem intervenções terapêuticas.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

Este manuscrito descreve os métodos de indução e pontuação do modelo experimental de encefalomielite autoimune (EAE), juntamente com a avaliação da distribuição de células imunes e níveis de citocinas de mRNA em linfonodos, baço, sangue e medula espinhal usando citometria de fluxo e PCR quantitativo, respectivamente, em várias fases da doença.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em camundongos e avaliação da distribuição da doença dependente de células imunes em vários tecidos

Aqui, apresentamos os protocolos para investigar o comprometimento da unidade neurovascular durante encefalomielite auto-imune experimental in vivo. Abordamos especificamente como determinar a permeabilidade da barreira hemato - encefálica e gelatinase atividade envolvida na migração de leucócitos através da limitans da glia.

Visualizando o comprometimento das barreiras endoteliais e Glial da unidade Neurovascular durante encefalomielite auto-imune Experimental In Vivo

Este manuscrito apresenta um protocolo para induzir encefalomielite autoimune experimental ativa (EAE) em camundongos. Um método de isolamento e caracterização dos linfócitos infiltrados no sistema nervoso central (SNC) também é apresentado para mostrar como os linfócitos estão envolvidos no desenvolvimento da doença autoimune cns.

Análise Citométrica de Fluxo de Infiltração linfócito no Sistema Nervoso Central durante Encefalomielite Autoimune Experimental

O presente protocolo descreve a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo utilizando glicoproteína de oligodendrócitos de mielina e monitorando o processo da doença usando um sistema de pontuação clínica. Os sintomas experimentais relacionados à encefalomielite autoimune são analisados usando tomografia microcomputadorizada de fêmur de camundongo e teste de campo aberto para avaliar o processo da doença de forma abrangente.

Indução e Diversos Indicadores de Avaliação da Encefalomielite Autoimune Experimental

A encefalomielite autoimune experimental (EAE) serve como modelo animal de esclerose múltipla. Este artigo descreve uma abordagem para pontuar inflamação medular, desmielinização e lesão axonal em EAE. Adicionalmente, um método para quantificar os níveis de luz solúvel dos neurofilamentos no soro de camundongos é apresentado, facilitando a avaliação da lesão axonal em camundongos vivos.

Pontuação de Inflamação, Desmielinização e Lesão do Axônio do Sistema Nervoso Central na Encefalomielite Autoimune Experimental

A encefalomielite autoimune experimental é um dos modelos murinos de esclerose múltipla mais utilizados. No protocolo atual, camundongos C57BL/6J de ambos os sexos são imunizados com peptídeo glicoproteico oligodendrócito de mielina, resultando principalmente em paresia ascendente da cauda e membros. Aqui discutimos o protocolo de indução e avaliação da EAE.

Modelagem da Esclerose Múltipla em Dois Sexos: Encefalomielite Autoimune Experimental Induzida por MOG35-55

A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal de esclerose múltipla (EM), que compartilha com a doença humana uma resposta autoimune humoral robusta. Aqui, relatamos um protocolo ELISA simples e flexível para quantificar autoanticorpos no soro de camundongos imunizados com EAE.

Quantificação de anticorpos autorreativos em camundongos após encefalomielite autoimune experimental

Aprenda a induzir e pontuar clinicamente a encefalomielite autoimune experimental crônico-recidivante em ratos DA. Este modelo reproduz características da esclerose múltipla humana para pesquisa em neurociência.

Indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental

Explorar mais vídeos