Name: Monitoramento Laboratório abrangente e Custo Efetivo de HIV / AIDS: um Modelo de Papel Africano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: Aprenda a implementar citometria de fluxo para monitoramento de HIV em laboratórios africanos com recursos limitados. Este método integra ensaios de CD4, CD45 e carga viral para diagnóstico eficiente.

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Agradecimentos especiais são devidos ao Laboratório Nacional de Saúde Serviço (LNH) da República da África do Sul para a organização nacional dos serviços de fluxo de HIV relacionadas diagnóstico (http: \ \ www.nhls.ac.za e http://www.plgcd4 . net). Os estudos apresentados foram realizados no Departamento de Hematologia e Medicina Molecular, Universidade de Witwatersrand (Joanesburgo, África do Sul, apoiada pelo Chefe de Departamento, Professor Wendy Stevens). Os autores não receberam apoio financeiro para esta publicação de sociedades comerciais ou agências de financiamento. As opiniões expressas são de responsabilidade dos autores sem necessariamente refletindo a opinião das instituições, da Universidade de Witwatersrand, ou o LNH Sul-Africano.

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<li>Donnell, D., Kiarie, J., Thomas, K., Baeten, J., Lingappa, J., Cohen, C., Celum, C. ART and risk of heterosexual HIV-1 transmission in HIV-1 serodiscordant African couples: A Multinational Prospective Study. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
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<li>Petti, C. A., Polage, C. R., Quinn, T. C., Ronald, A. R., Sande, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+medicine+in+Africa%3A+a+barrier+to+effective+health+care%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Laboratory medicine in Africa: a barrier to effective health care.</a> Clin Infect Dis. 42, 377-382 (2006).</li>
<li>Brown, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+health%3A+Great+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Global health: Great expectations.</a> BMJ. 334, 874-876 (2007).</li>
<li>Crisp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+the+World+Upside+Down%5BTitle%5D)+AND+%22Royal+Society+of+Medicine+Press%22%5BJournal%5D)">Turning the World Upside Down.</a> Royal Society of Medicine Press. , (2009).</li>
<li>Hecht, R., Bollinger, L., Stover, J., McGreevey, W., Muhib, F., Madavo, C. E., de Ferranti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+choices+in+financing+the+response+to+the+global+HIV%2FAIDS+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Aff%22%5BJournal%5D)">Critical choices in financing the response to the global HIV/AIDS pandemic.</a> Health Aff. 28, 1591-1605 (2009).</li>
<li>Lawrie, D., Coetzee, L. M., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+continuous+quality+control+incorporating+sample-to+sample+assessment+of+optical+alignment%2C+fluorescence+sensitivity+and+volumetric+operation+fo+flow+cytometers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A model for continuous quality control incorporating sample-to sample assessment of optical alignment, fluorescence sensitivity and volumetric operation fo flow cytometers.</a> Cytometry B Clin Cytom. 78, 201-208 (2010).</li>
<li>Loken, M. R., Brosnan, J. M., Bach, B. A., Ault, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+optimal+lymphocyte+gates+for+immunophenotyping+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Establishing optimal lymphocyte gates for immunophenotyping by flow cytometry.</a> Cytometry. 11, 453-459 (1990).</li>
<li>Glencross, D., Scott, L. E., Jani, I. V., Barnett, D., Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD45-assisted+PanLeucogating+for+accurate%2C+cost-effective+dual-platform+CD4%2B+T-cell+enumeration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">CD45-assisted PanLeucogating for accurate, cost-effective dual-platform CD4+ T-cell enumeration.</a> Cytometry. 50, 69-77 (2002).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Aggett, H. M., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+affordable+PanLeucogated+CD4%2B+testing+with+proactive+internal+and+external+quality+assessment%3A+in+support+of+the+South+African+national+comprehensive+care%2C+treatment+and+management+programme+for+HIV+and+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Large-scale affordable PanLeucogated CD4+ testing with proactive internal and external quality assessment: in support of the South African national comprehensive care, treatment and management programme for HIV and AIDS.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S40-S51 (2008).</li>
<li>Dalgleish, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CD4+%28T4%29+antigen+is+an+essential+component+of+the+receptor+for+the+AIDS+retrovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus.</a> Nature. 312, 763-767 (1984).</li>
<li>Liu, Z., Cumberland, W. G., Hultin, L. E., Prince, H. E., Detels, R., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD38+antigen+expression+on+CD8%2B+T+cells+is+a+stronger+marker+for+the+risk+of+chronic+HIV+disease+progression+to+AIDS+and+death+in+the+Multicenter+AIDS+Cohort+Study+than+CD4%2B+cell+count%5BTitle%5D)+AND+%22J+Acquir+Immune+Defic+Syndr+Hum+Retrovirol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD38 antigen expression on CD8+ T cells is a stronger marker for the risk of chronic HIV disease progression to AIDS and death in the Multicenter AIDS Cohort Study than CD4+ cell count.</a> J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 16, 83-92 (1997).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2FCD38+activation+yields+important+clinical+information+of+effective+antiretroviral+therapy%3A+findings+from+the+first+year+of+the+CIPRA-SA+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">CD8/CD38 activation yields important clinical information of effective antiretroviral therapy: findings from the first year of the CIPRA-SA cohort.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S131-S140 (2008).</li>
<li>Coetzee, L. M., Tay, S. S., Lawrie, D., Janossy, G., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+research+tool+to+routine+test%3A+CD38+monitoring+in+HIV+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">From research tool to routine test: CD38 monitoring in HIV patients.</a> Cytometry B Clin Cytom. 76, 375-384 (2009).</li>
<li>Larsen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fragile+environments+of+inexpensive+CD4%2B+T-cell+enumeration+in+the+least+developed+countries%3A+strategies+for+accessible+support%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">The fragile environments of inexpensive CD4+ T-cell enumeration in the least developed countries: strategies for accessible support.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S107-S116 (2008).</li>
<li>Glencross, D. K., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Sanne, I., McIntyre, J. A., Janossy, G., Stevens, W. Longitudinal monitoring of CD38 activation can obviate costly viral load testing in 60% of patients on ART. 11th IUSTI World Congress, , (2009).</li>
<li>Bergeron, M., Lustyik, G., Phaneuf, S., Ding, T., Nicholson, J. K., Janossy, G., Shapiro, H., Barnett, D., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+currently+used+cytometers+facilitates+the+identification+of+pipetting+errors+and+their+volumetric+operation%3A+%22time%22+can+tell+all%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Stability of currently used cytometers facilitates the identification of pipetting errors and their volumetric operation: "time" can tell all.</a> Cytometry B Clin Cytom. 52, 37-39 (2003).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow+Cytometer+Alignment+Verification+Package+insert+of+Flow-CheckTM+Fluorospheres.+Volume+PN+4276179-LA%22">Flow Cytometer Alignment Verification Package insert of Flow-CheckTM Fluorospheres. Volume PN 4276179-LA</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2008).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow-SetTM+Fluorospheres+%28Flow+Cytometer+Standardization+Fluorospheres%29.+Package+insert+of+Flow-SetTM+Fluorospheres.+Volume+PN+6607007%22">Flow-SetTM Fluorospheres (Flow Cytometer Standardization Fluorospheres). Package insert of Flow-SetTM Fluorospheres. Volume PN 6607007</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Immuno-TrolTM+Cells.+Package+insert+of+Immuno-TrolTM+Cells.+Volume+PN+6607077%22">Immuno-TrolTM Cells. Package insert of Immuno-TrolTM Cells. Volume PN 6607077</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
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<li>Badri, M., Lawn, S. D., Wood, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+CD4+cell+counts+for+early+prediction+of+virological+failure+during+antiretroviral+therapy+in+a+resource-limited+setting%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Utility of CD4 cell counts for early prediction of virological failure during antiretroviral therapy in a resource-limited setting.</a> BMC Infect Dis. 8, 89(2008).</li>
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<li>Denny, T. N., Gelman, R., Bergeron, M., Landay, A., Lam, L., Louzao, R., Mandy, F. F., Schmitz, J., Spira, T., Wilkening, C., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+North+American+multilaboratory+study+of+CD4+counts+using+flow+cytometric+panLeukogating+%28PLG%29%3A+a+NIAID-DAIDS+Immunology+Quality+Assessment+Program+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A North American multilaboratory study of CD4 counts using flow cytometric panLeukogating (PLG): a NIAID-DAIDS Immunology Quality Assessment Program Study.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S52-S64 (2008).</li>
<li>Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+pattern+of+%22smart%22+flow+cytometry+%28S-FC%29+to+assist+the+cost-effective+diagnosis+of+HIV%2C+tuberculosis%2C+and+leukemias+in+resource-restricted+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">The changing pattern of "smart" flow cytometry (S-FC) to assist the cost-effective diagnosis of HIV, tuberculosis, and leukemias in resource-restricted conditions.</a> Biotechnol J. 3, 32-42 (2008).</li>
</ol>

Os direitos de patente internacional para o método de CD4 aqui descritos são detidos pelo LNH Sul-Africano e, atualmente, sob licença da BCI, Miami, Fl, EUA.

Nos últimos anos os programas de caridade-driven e conceder-alocado têm ajudado o estabelecimento de algumas práticas excelentes clínicos em áreas com recursos limitados do planeta com a carga alta HIV. Os programas de ART tem sido bem sucedido na redução da mortalidade e estão agora a ser iniciado com CD4 maior contagem 2,3. Já existem indícios de que estas novas medidas irão diminuir a propagação da infecção pelo HIV de 4,5, apesar da falta de uma vacina contra o HIV-específicas. Em nosso vídeo documento, que quando a monitorização de pacientes em TARV, estas técnicas podem ser mais bem focada e se tornar mais rentável do que a observada na prática de rotina realizados em laboratórios ocidentais (Lista 1). Tal abordagem Africano liderada pode muito bem ser essencial para apoiar a modernização de serviços de laboratório no momento em que a infecção pelo HIV, tratados com ART, está se tornando uma doença crônica. Esse monitoramento da ART requer CD4 preciso contar e carga viral tecnologia relacionada, uma tarefa mais exigente do que simplesmente realizar uma contagem de CD4 para colocar os pacientes em grupos arbitrários, a fim de ajudar uma decisão sobre o início ART 16. Com a ajuda destes diagnósticos, ou seja, utilizando o teste CD8/CD38, é possível reduzir os custos relacionados com o VL de monitoramento em&gt; 60% dos pacientes em TARV 16,19. É também importante enfatizar que é o teste CD8/CD38 16,17, e não a contagem de CD4 de 37 anos, que é provável para pegar os primeiros sinais de rebotes VL e / ou a falta de adesão do paciente em tomar a medicação. Um elemento essencial de um serviço rentável coordenada central é a disponibilidade de uma rede de grande escala nacional ou regional apoiada por peritos e conselheiros acadêmicos que estão familiarizados com os aspectos técnicos e médicos da operação. Isso é demonstrado pelas atividades da rede de LNH Sul Africano e os esquemas de CD4-PLG.net treinamento 33, 36, que oferecem educação, incentivo e avaliação de qualidade para os centros menores e estes também podem incluir &#39;point-of-care&#39; serviços. Importante, as operações de laboratórios centrais e de ponto-de-cuidado são complementares. Enquanto o primeiro tem o duplo papel de proporcionar um custo-benefício operação de serviço em larga escala, bem como o treinamento básico / avançado para os laboratórios periféricos 33,38, este último contribui para verificar a disseminação do ART recrutando pacientes HIV + que são elegíveis para ART a partir de uma base maior, incluindo clínicas rurais. Aqui alguma cautela é necessária porque point-of-care diagnóstico pode ser muito mais caro e não garante automaticamente a precisão de 38. Portanto, é sensato manter o sistema de dois níveis e facilitar a coordenação entre as duas listas, sem permitir que ambos os braços a diminuir. Em conclusão, no campo do monitoramento de diagnóstico do manejo clínico de doenças infecciosas necessária uma redução de custos pode ser alcançada pelos serviços apt que usam menos caro e mais bem coordenada tecnologia moderna com uma qualidade melhorou significativamente 13,39. Bem organizada nacionais (e regionais) prestações de serviço de diagnóstico deve ser melhor suportado 6-8, evitando um cenário quando praticamente toda a concessão de apoio é desperdiçado em métodos caros e / ou inexperiente, logo que estes são importados de países ricos sem um cuidado pré- escrutínio construtiva preventiva. Da mesma forma, uma concepção mais flexível de ensaios clínicos terapêuticos com a plena participação dos médicos locais e pessoal de saúde deve levar à redução de desnecessariamente frequentes e / ou demasiado ambiciosos testes de laboratório 3. Esta política daria mais chance de uma maior valorização do disponíveis resultados precisos de diagnóstico em uma avaliação coordenada clínico / laboratorial de pacientes em TARV. Estes diagnósticos inteligente também pode ser pioneiro para os países pobres em recursos 8 nas áreas da tuberculose e leucemias usando uma plataforma de fluxo existente familiares citometria 40.

monitoramento laboratório abrangente e custo efetivo de hiv / aids: um modelo de papel africano

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Apresentamos o vídeo sobre assistência anti-retroviral (ART) por um serviço de laboratório apt - o que representa um modelo Sul-Africano para testes em escala econômica grande diagnóstico. Nos países de baixa renda ART barato tem transformado as perspectivas para a sobrevivência dos pacientes soropositivos para o HIV, mas há dúvidas se existe uma necessidade de monitorização laboratorial da ART e em que os custos - em situações em que a qualidade geral dos serviços de patologia pode ainda ser muito baixa. A resposta apropriada é estabelecer serviços economicamente viável com uma melhor coordenação e avaliação de qualidade mais rigorosos interna do que visto nos países ocidentais. Neste vídeo, fotografado no local nos Serviços de Saúde National Laboratory (LNH-SA) da Universidade de Witwatersrand, Joanesburgo, África do Sul, fornece tal esquema coordenado expansão do original 2 cor-CD4-CD45 estratégia PanLeucoGating (PLG). Assim, o seis módulos da apresentação de vídeo revelar a simplicidade de um ensaio de fluxo de 4 cores para combinar citometria de exames hematológicos, imunológicos e virologia-relacionados em um único tubo. Estes módulos de vídeo são: (i) o set-up de instrumentos, (ii) as preparações de amostra; (iii) testes de contagem absoluta e controlo da qualidade para cada amostra por talão-count-rate, (iv) o CD45 teste heamatological de células brancas contagem e diferenciais, (v) a contagem de CD4, e (vi) a ativação de células T CD8 + CD38 medido pelo display, um parâmetro de carga viral relacionados. O potencial de redução de custos são notáveis. Este arranjo é um excelente exemplo para a viabilidade de realizar&gt; 800-1000 testes por dia, com um controle de qualidade mais rigorosos do que o aplicado em laboratórios ocidentais, e também com uma transferência de tecnologia para outros laboratórios dentro de uma rede LNH-SA. Consultores especializados, gerentes de laboratório e os decisores políticos que levam o dever de tomar decisões sobre a introdução de tecnologia médica moderna não estão freqüentemente em posição de ver os últimos detalhes técnicos, realizados nos laboratórios regionais com grandes fardos enormes de carga de trabalho. Assim, este vídeo mostra detalhes destes novos desenvolvimentos.

Terapia anti-retroviral para o tratamento de HIV / AIDS é monitorado na África do Sul em grande escala. Citometria de fluxo é combinado para hematologia (CD45), imunologia (CD4) e carga viral-CD38 ligado ensaio. Gravado no LNH-SA laboratórios, Johannesburg, estes métodos modernos são custo-eficiente com controle de qualidade elevada locais internos, servindo como modelos para recursos limitados de diagnósticos.

Monitoramento Laboratório abrangente e Custo Efetivo de HIV / AIDS: um Modelo de Papel Africano

Apresentamos o vídeo sobre o auxílio à terapia antirretroviral (TARV) por meio de um serviço laboratorial adequado — representando um modelo sul-africano para a economicidade...

O anticorpo monoclonal utilizado nestes ensaios é denominado CD quatro. Este é o reagente básico para identificar linfócitos ERT. Serve para medir o número de linfócitos positivos para CD quatro no sangue, que estão sendo progressivamente destruídos pelo HIV.Assim, o número de células CD4 está relacionado ao grau de imunodeficiência do paciente. Outro reagente, CD45, é utilizado para contar todos os glóbulos brancos, o que também é um ensaio de rotina útil. Um teste adicional para os chamados marcadores de ativação reduz o custo dos ensaios de carga viral, que podem ser muito elevados.Esses estudos foram realizados na Universidade Witwatersrand, em Joanesburgo, África do Sul, sob a orientação da Professora Deborah Glen Cross e da Professora Wendy Stevens. O objetivo deste vídeo é duplo. Na primeira parte, você verá como um laboratório bem equipado realiza um ensaio relacionado a CD4, CD45 e carga viral.Isso é dividido em seis módulos. Essas etapas técnicas são então implementadas em 70 laboratórios em toda a África do Sul. Na segunda parte, discute-se a relação entre um grande laboratório central que realiza milhares de testes diariamente e os laboratórios mais periféricos, que estão próximos ao ponto de atendimento dos pacientes.A discussão aqui está centrada em como facilitar o apoio ao tratamento de mais pacientes infectados pelo HIV com medicamentos antirretrovirais. Meu nome é Neil Ney. Eu trabalho, sou um sec.Sou tecnólogo em citometria de fluxo. Trabalho no Hospital Geral de Joanesburgo, África do Sul. Este é o ciclo de fluxo.Isso é, utilizamos a citometria de fluxo. A Beckman colocou o exaustor. Basicamente, o que acontece é que a biblioteca funciona em ritmo de resíduo.Nós realizamos diariamente somas, como a contagem de células em uso e verificações do instrumento de fluxo. Há tarefas que realizamos semanalmente, como o arquivamento dos resultados. E há alguns trabalhos que fazemos mensalmente, como a manutenção.Quando o ciclo de limpeza termina, inicializamos a máquina. Estamos pressionando o botão de execução. Executamos duas tiras de terra, dois tubos de lâmina, ou você pode executar dois tubos de princípio e dois tubos de água destilada.Após a conclusão de toda a limpeza, o primeiro procedimento que realizamos é a verificação de piso para conferir o alinhamento do laser e monitorar a voltagem, garantindo que a voltagem permaneça constante. Se você realizar a verificação de piso pela manhã e ela falhar, é necessário tentar novamente. Caso o problema persista, precisamos chamar a equipe principal de emissões FA para vir examinar o equipamento.pois pode haver algum problema com o alinhamento do laser ou com as voltagens. Realizamos testes imunológicos, o normal e o alto todas as manhãs. Eles podem ser realizados pelo menos durante o turno de oito horas.Agora estamos executando o alto imuno cho. Vou verificar se as nossas contagens de células estão dentro das faixas esperadas. Meu nome é Denise Dory.Sou o gerente do laboratório na cidade para o laboratório do Hospital de Joanesburgo. Exerço um papel nacional nesse aspecto. Tenho participado da implantação de procedimentos de garantia de qualidade para assegurar a precisão e a confiabilidade dos resultados da contagem de CD4, não apenas em nosso próprio laboratório, mas em nível nacional na África do Sul.O preparo de amostras de CD quatro ping é muito simples. Utilizamos dois anticorpos monoclonais de cores diferentes, CD quatro e CD 45. Eles normalmente vêm pré-misturados em um frasco marrom que contém ambos os anticorpos.Para começar, prepararíamos 10 microlitros do anticorpo CD45 CD4 no fundo de um tubo limpo. Em seguida, o próximo passo seria adicionar o sangue. Para este método, estamos usando cem microlitros de sangue.Deve ser preparado com precisão. Em seguida, o sangue e o anticorpo seriam misturados. Assim, a última etapa desse preparo envolveria a adição do reagente eising.O, e como você pode ver, uma vez que você adiciona o reagente LY, o sangue muda de uma solução opaca para uma solução hemolisada, na qual é possível enxergar através do tubo. Este é um método bem simples, que pode ser feito manualmente, mas se você estiver processando grandes volumes de amostras, como fazem a maioria dos laboratórios, usaria um sistema automatizado como este, que prepararia as pipetas para você. Contudo, o preparo não precisa necessariamente ser feito por meio de um sistema automatizado se você utilizar o reagente de contagem de glóbulos, pois as contagens de glóbulos, os glóbulos que adicionamos, nos indicarão se alguém preparou corretamente a amostra.A última etapa antes de colocarmos esta amostra em um analisador é adicionar cem microlitros das microesferas que vêm em um tubo como este. A amostra então estará pronta para ser carregada no citômetro de fluxo. Meu nome é Sit MoFA e sou o oficial de garantia de qualidade neste laboratório de citometria de fluxo, e adoro citometria de fluxo.Temos máquinas muito sofisticadas aqui, que são os Epics Excels, e elas são muito estáveis. Na verdade, adicionamos nossos dados, que também nos indicam a estabilidade dos instrumentos. Então, como monitoramos nossa taxa de contagem de fluxo?A taxa de contagem baixa está totalmente relacionada à equipe. Mais recentemente, começamos a preparação automatizada de nossos instrumentos e de nossas amostras, mas ainda assim o monitoramento da taxa de contagem de fluxo continua sendo o controle de qualidade relevante. Nossa contagem de fluxo apresentará esta linha reta, que mostra o quão perfeita é a taxa de contagem de fluxo, mas eles ainda permanecem.Ainda existem alguns valores aberrantes, portanto esses valores aberrantes podem ser causados por erro de pipetagem; mas, se for o caso, excluindo a possibilidade de erro de pipetagem, podemos verificar nosso instrumento para saber se está funcionando corretamente, e então podemos chamar os engenheiros para consertar nosso instrumento, para que ele possa prosseguir com o suporte. Este é Zo ly da Beckman Ter. Ele é nosso técnico.Eu venho sempre que há um problema e, sim, também venho a cada seis meses para realizar a manutenção, enquanto nossas amostras são analisadas pelos instrumentos. Como oficial de controle de qualidade, minha função é sempre verificar esta tela, que monitora nossa taxa de fluxo de contagem. Assim, identifico imediatamente qualquer valor discrepante.Consigo ver que há um valor aberrante. Na verdade, há cinco instrumentos em funcionamento no momento, pois nossa carga de trabalho é extremamente alta, e esses dois aqui apenas mostram que não são as amostras que estão sendo adquiridas. É apenas o procedimento que realizamos ao final de cada carrossel, mas ainda assim observamos alguns valores aberrantes.Por exemplo, este neste instrumento, que é o Epic Excel quatro. Este definitivamente precisará ser reparado imediatamente antes que os resultados sejam enviados para fora de todo o carrossel e, após a redefinição, deverá ser executado imediatamente antes da padronização. Para recapitular, estabelecemos que nossas máquinas estão funcionando de maneira ideal.Verificamos a reprodutibilidade da contagem das microesferas para garantir que as contagens de CD4, que serão apresentadas a seguir, sejam precisas. Verificamos se os lasers estão corretamente alinhados em nossos instrumentos e confirmamos a precisão das contagens realizando dois níveis de controles. Esta amostra, sem conteúdo, dos marcadores CD4 e CD45, e preciso descrever a você por que o CD45 é tão importante em nossa análise.CD 45 é um marcador celular que identifica todos os glóbulos brancos em uma amostra. Isso é importante para nós neste contexto, pois permite comparar a contagem de células brancas obtida utilizando CD 45 com a contagem de células brancas proveniente de um analisador de hemograma completo. Se observarmos estes exemplos aqui, trata-se de um impresso de hemograma completo de um analisador Beckman Coter LH 750, e podemos ver que temos uma contagem de células brancas de 7,1 no citômetro de fluxo utilizando CD 45, onde coramos todos os glóbulos brancos.Temos uma contagem de células por peso de CD muito semelhante de 7.175. Aceitaríamos um valor, uma diferença nos cones de células por peso inferior a 5%. A outra vantagem adicional da inclusão do CD45 é a coloração diferencial do CD45 em células brancas. No citômetro de fluxo, podemos usar três parâmetros: dispersão, dispersão para a frente e CD45.Se observarmos neste histograma aqui, os linfócitos são claramente definidos. Eles tendem a apresentar a coloração mais intensa com CD45 e possuem a menor complexidade, sendo as células mais simples e as mais abundantes com CD45. O próximo grupo de células são nossos monócitos.Nossos monócitos apresentam uma expressão ligeiramente menor de CD45, mas são mais complexos do que os linfócitos. Em seguida, o próximo grupo principal de células, que em uma amostra normal seria o maior grupo, são nossas células granulares. Essas populações são as células sanguíneas mais comuns vistas no sangue periférico.A vantagem de usar a marcação com CD45 em um citômetro de fluxo é que podemos realizar uma contagem de CD4, uma contagem absoluta de glóbulos brancos e uma contagem diferencial automatizada no citômetro de fluxo. A marcação com CD45 nos permite realizar contagens diferenciais por períodos mais longos de tempo.Podemos realizá-los até 48 horas. Se estivermos utilizando a expressão de CD45. As contagens diferenciais realizadas por este método são menos objetivas do que em outros métodos.Por exemplo, o padrão ouro para realizar uma contagem diferencial manual permite identificar populações leucêmicas e também constitui a base para o painel de marcação com cd, que é mostrado na tela aqui. A vantagem da expressão de CD45 em células sanguíneas brancas ainda não foi plenamente aproveitada no laboratório de hematologia até o momento. Dispomos de uma variedade de analisadores diferentes de hemograma completo que utilizam técnicas distintas para obter contagens diferenciais de leucócitos.Utilizando CD45 em um painel. O citômetro seria uma maneira excelente de padronizar os cones diferenciais entre diferentes analisadores hematológicos, pois seria um método ao qual todos os outros analisadores hematológicos poderiam ser comparados. Olá, meu nome é Dra. Linda Sier.Estou ativamente envolvido em pesquisas sobre HIV que envolvem testes com CD4 e CD8. Os linfócitos T podem ser divididos em células positivas para CD4 e células positivas para CD8, sendo as células positivas para CD4 utilizadas para monitorar o HIV em pacientes em tratamento. O problema, no entanto, com o CD4 é que ele não é exclusivamente expresso em linfócitos, mas também é expresso em outros tipos celulares.No protocolo PLG, analisamos três aspectos diferentes de como discriminar efetivamente entre seus monócitos e seus linfócitos. Primeiramente, utilizamos a complexidade ou granularidade, onde é possível observar que, ao avaliar a complexidade, seus linfócitos e monócitos podem ser separados com esse propósito. Também utilizamos o CD45C, no qual é possível distinguir a população de linfócitos da população de monócitos.A expressão do CD4 é intensa nos linfócitos e intermediária nos monócitos, utilizada em conjunto com a complexidade. É bastante fácil distinguir entre os linfócitos CD4 intensos e os monócitos CD4 fracos, e eu mostrarei um exemplo de uma amostra de paciente normal, na qual é possível observar os linfócitos e os monócitos; este paciente apresentava uma contagem de CD4 superior a 700. Ao analisarmos um paciente com contagem de CD4 de 53, pode-se notar que, embora a contagem de CD4 seja baixa, a discriminação entre os linfócitos positivos e os monócitos positivos para CD4 ainda é muito clara.Utilizando o método PLG, somos capazes de realizar um grande número de análises por dia. Em nosso laboratório, atualmente realizamos cerca de mil amostras por dia, o que equivale a 5.000 amostras por semana. Duas semanas de nosso trabalho correspondem aproximadamente ao realizado em um ano inteiro.Em um hospital de Londres na África do Sul, temos 70 laboratórios NNRS e, ao longo de um ano, esses laboratórios realizam aproximadamente 1,98 milhão de testes de CD4 por ano. Olá, sou Kni. Estou atualmente em meu intervalo para o chá, mas depois que eu terminar, vou falar sobre CD38 e carga viral.Então, basicamente todos sabemos que os citômetros de fluxo podem contar células, mas o que eles também podem fazer é quantificar a molécula de superfície, ou seja, moléculas presentes na superfície das células. Isso é feito medindo a intensidade da fluorescência. Em condições padrão, já anteriormente mencionadas, utilizamos o CD4 e o 45, conhecido como método PLG.Vamos um passo adiante, colocando dois testes em um único tubo. Nomeie o método de teste CD 4 45 PLG. Vamos combiná-lo com um teste de duas cores para um marcador de ativação ou outro parâmetro associado à carga viral, especificamente o CD 38.Os americanos utilizam imunofluorescência de quatro cores. Eles usam CD4, CD45, CD8 e CD3. Nós usamos CD4, CD45, CD8 e substituímos o CD3 utilizando CD38.Primeiramente, é importante observar que uma contagem basal de CD38 precisa ser obtida para um paciente, pois a contagem basal de 38 atua como controle para aquele paciente em particular. E é justamente nesse momento que a carga viral é alta, não é? Sim. E é quando um paciente chega com alta carga viral e baixa contagem de CD4. Isso ocorre no início, antes da terapia.Também precisamos prestar atenção aos picos de CD38, onde há um aumento no CD38. Isso é evidente neste paciente aqui, onde ocorre um aumento súbito no MFI do CD38 e, se observar, há também um aumento correspondente na carga viral. Seria possível que o paciente não estivesse tomando os medicamentos naquele momento?Neste momento, sim, é possível que o paciente tenha interrompido a terapia porque os níveis voltaram ao normal. Então, por que estamos tão satisfeitos com este teste? Em primeiro lugar, ele combina dois métodos de teste em um único tubo.Em segundo lugar, é economicamente eficaz, fornecendo uma contagem de leucócitos CD45, uma contagem de CD4, bem como um marcador de ativação. É utilizado nos instrumentos atualmente presentes em nossos laboratórios, portanto, não haverá necessidade de introduzir novos equipamentos e a equipe pode ser facilmente treinada sobre como fazer o gateamento e como preparar essas amostras. Os custos com a carga viral também diminuirão, pois atualmente, toda vez que um paciente comparece para uma contagem de CD4, testes de carga viral também são realizados.Mas se monitorarmos o CD38 e observarmos um aumento no MFI do 38, somente então podemos enviar as amostras dos pacientes para o teste de carga viral. Sobre o desempenho do nosso programa nacional sul-africano, que é o programa NHLE de CD4 que utiliza o PLG, no qual apoiamos muito nossos laboratórios. Assim, temos uma instalação central, cuja instalação central coordena todos os procedimentos padronizados e todo o controle de qualidade descentralizado para os laboratórios remotos.Eles operam seu sistema e enviam os resultados por meio da EQA, através da nossa rede na África, de volta ao laboratório central, que fornece apoio. Além disso, contam com iniciativas contínuas e adicionais de treinamento e serviços de suporte. E nosso programa, como um grupo, apresenta desempenho significativamente superior ao de outros programas nacionais, de forma marcante — mais de 50% melhor em precisão, não apenas dentro dos laboratórios, mas também entre laboratórios.Isso significa que um CD4 de um laboratório em Berlim será muito semelhante a um CD4 de um laboratório em Durban, por exemplo, utilizando nossa superfície padronizada. Assim, você toma esse conceito e o descentraliza para o ponto de atendimento. Em segundo lugar, isso significa que o ponto de atendimento será facilitado por uma unidade coordenadora única.É evidente que esses esforços, demonstrados por essas pessoas dedicadas, representam avanços conceituais, não apenas um retrocesso a um citômetro de fluxo de um trimestre anterior, que pode produzir esses resultados. Os mesmos conceitos podem ser utilizados com outros instrumentos, como máquinas da Ton Dickinson ou da Partec, fabricadas pela Accur ou por qualquer outra empresa. De fato, desenvolvimentos recentes em outros países, por exemplo, na Índia, estão mostrando que eles deveriam iniciar sua própria indústria de citometria de fluxo, a qual utilizaria a mesma tecnologia.O único aspecto importante aqui era a coordenação excepcional. Agora, aquelas pessoas que pensam que as contagens de CD4 são os únicos objetivos estão enganadas, porque aqui estávamos lidando com contagens completas de células sanguíneas, números absolutos, diferenciais da contagem sanguínea completa. Estávamos trabalhando com CD4 e também com marcadores de ativação, o que torna os ensaios mais baratos do que os ensaios comparáveis de carga viral seriam.No entanto, isso não é uma competição entre esses marcadores de ativação e as cargas virais, mas sim um tipo complementar de arranjo que economiza dinheiro nos ensaios de carga viral. Essas foram investigações cientificamente validadas, e os clínicos devem procurar por esses ensaios quando a adesão do paciente à terapia estiver em dúvida, quando a eficácia do medicamento estiver em questão ou quando for necessário mudar a terapia porque o paciente está começando a desenvolver resistência. A conclusão essencial tem sido a boa garantia de qualidade atualmente, o que nos leva ao ponto final, ou seja, é muito melhor contar com laboratórios centrais excelentes, que possam então fornecer citometria de fluxo e garantia de qualidade, avaliando para os laboratórios periféricos, e assim os laboratórios periféricos serão capazes de alcançar mais pessoas nos regimes de terapia antirretroviral.Portanto, aqui estamos vendo um novo desenvolvimento surgindo do solo africano. Muito obrigado pela sua atenção.

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Research

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