Name: In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: Aprenda a técnica de injeção intrauterina e eletroporação em embriões de ratos E16 para manipulação genética. Este método permite estudar funções gênicas em neurociência do desenvolvimento.

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in utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos e16

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

Intra-uterina in vivo de injeção e eletroporação do neocórtex de ratos embrionários fornece uma ferramenta poderosa para a manipulação de células progenitoras individuais que revestem as paredes do ventrículo lateral. Esta técnica é amplamente utilizada para estudar os processos envolvidos na corticogenesis por excesso de expressar ou derrubando genes e observando os efeitos sobre a proliferação celular, migração e diferenciação. Em comparação com as estratégias tradicionais de knockout, in-utero eletroporação fornece um meio rápido para manipular uma população de células durante uma janela específica temporal. Neste protocolo de vídeo, destacamos a metodologia experimental para a preparação para a cirurgia ratos, expondo os cornos uterinos através laporatomy, injetando DNA para os ventrículos laterais do embrião em desenvolvimento, electroporating DNA para os progenitores que revestem a parede lateral, e cuidar de animais de pós- cirurgia. Nosso laboratório utiliza este protocolo para cirurgias em E15-E21 ratos, no entanto, é mais comumente realizada no E16 como mostra este vídeo.

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

A injeção in vivo in utero e a electroporação do neocórtex embrionário de rato fornecem uma ferramenta poderosa para a manipulação de progenitores individuais ...

Olá, meu nome é William Ti. Sou do laboratório Arnold Creek Stein. Hoje, eu e outros vamos demonstrar a injeção intrauterina de embriões de rato E 16. Olá, meu nome é Laura Elias.Hoje vou mostrar como preparar as pipetas de microinjeção e carregá-las para as injeções intraventriculares e eletroporação que realizaremos hoje. Também mostrarei como realizar as injeções intraventriculares e a eletroporação em embriões de rato E16. Assim, as injeções e eletroporação in utero no rato são particularmente úteis porque o rato é um sistema no qual não é fácil realizar manipulações genéticas.Ok, então há uma série de instrumentos cirúrgicos que utilizamos para este procedimento. Utilizamos um freer, um par de pinças de Adson, um par com superfície serrilhada e outro par com um pequeno dente na extremidade. Utilizamos também um par de hemostáticos.Este é um par de tesouras, e então usamos esses dois grampeadores. Este é o maior, que usamos para ratos. Este é o menor, que usamos para camundongos, utiliza um grampo tamanho sete, e este utiliza um grampo tamanho nove, sendo ambos com mola.Algumas das coisas que usamos aqui para auxiliar nas cirurgias incluem uma simples fonte de luz de fibra ópti

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

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Biologia

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos E15

Na eletroporação utero é um método valioso para transfecting células progenitoras neuronal in vivo. Dependendo da colocação dos eletrodos e do ponto no tempo de desenvolvimento de eletroporação, certos subgrupos de células corticais podem ser alvo. Células-alvo podem então ser analisados ​​in vivo ou in vitro para efeitos da alteração genética.

No útero Eletroporação seguido por Cultura Neuronal primário para estudar a função do gene no subconjunto dos neurônios corticais

Na eletroporação útero permite a entrega rápida em um gene espacialmente e temporalmente maneira controlada no desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Aqui nós descrevemos um adaptável altamente in utero protocolo de eletroporação que pode ser usado para entregar constrói expressão em vários domínios embrionário do SNC, incluindo o telencéfalo diencéfalo e retina.

Entrega Gene eficiente em múltiplos territórios CNS Usando In Utero Eletroporação

Este estudo descreve o desenvolvimento de...

Em Eletroporação vitro do lábio inferior rômbico de embriões de camundongos Midgestation

Controlar a expansão de células estaminais somáticas é um factor principal dificultando o seu estudo e a utilização em terapia. Aqui, descrevemos um sistema para controlar temporalmente neural haste de expansão de células durante o desenvolvimento e na vida adulta, o que pode ser usado para aumentar o número de neurónios gerados no cérebro do rato.

Expansão da embrionárias e adultas células-tronco neurais por<em&gt; In Utero</em&gt; Eletroporação ou injeção estereotáxica Viral

Fonte: Koza, P., et al. Geração de Ratos Transgênicos utilizando uma Abordagem com Vetor Lentiviral. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a entrega assistida por microinjeção de vetores lentivirais em embriões de rato fertilizados para obter integração estável de transgenes na geração de ratos transgênicos.

Transdução de Embriões Fertilizados de Rato Baseada em Vetores Lentivirais

Este vídeo demonstra a entrega de DNA de plasmídeo em células neuronais cerebelares de embriões murinos usando eletroporação in utero. Este método é útil para obter compreensão da função in vivo dos genes no desenvolvimento normal do cérebro e as mudanças na expressão gênica das células dos neurônios durante a progressão do tumor.

Entrega de genes baseada em eletroporação in utero: uma técnica para injetar DNA de plasmídeo em células cerebelares embrionárias de embriões murinos

Genes podem ser manipulados durante o desenvolvimento do córtex ou do hipocampo do rato via in utero eletroporação (IUE) em E16, para permitir modificações rápidas e direcionadas na conectividade neuronal para estudos posteriores do comportamento ou neuropatologia em animais adultos. Pós-natal em imagem in vivo para o controle do sucesso IUE é realizada por bioluminescência de ativar luciferase cotransfectados.

Geração de topicamente transgênicas Rats por<em&gt; In utero</em&gt; Eletroporação e<em&gt; In vivo</em&gt; Triagem Bioluminescência

Este protocolo descreve em detalhes como transfectar especificamente diferentes regiões do sistema nervoso central C57BL/6 por meio de eletroporação in utero. Incluídas neste protocolo estão instruções detalhadas para transfecções de regiões que se desenvolvem no córtex, hipocampo, tálamo, hipotálamo, núcleo septal lateral e estriado.

Específicos do Striatum Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- e<em&gt; In Utero</em&gt; A electroporação em ratinhos C57BL / 6 mouse

Periventricular nodular heterotopia (PNH) é a forma mais comum de malformação do desenvolvimento cortical (MCD) na idade adulta, mas sua base genética permanece desconhecida em casos mais esporádicos. Recentemente desenvolvemos uma estratégia para identificar genes candidatos romance para MCDs e confirmar diretamente seu papel causal em vivo.

Uma nova estratégia combinando Array-CGH, todo-exome sequenciamento e eletroporação no Utero em roedores para identificar Genes causadores de malformações do cérebro

Aprenda a técnica de injeção intrauterina e eletroporação em embriões de ratos E16 para manipulação genética. Este método permite estudar funções gênicas em neurociência do desenvolvimento.

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

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