Name: Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Aprenda a induzir hipersensibilidade do tipo retardada ativa em ratos Lewis usando emulsão de antígeno KLH em adjuvante de Freund. Este método permite monitorar respostas inflamatórias mediadas por linfócitos T.

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1. Preparação da emulsão <ol><li> A emulsão é uma mistura 1:1 do antígeno (DTH pode ser induzida a vários antígenos: ovalbumina, toxóide tetânico, limpet keyhole hemocianina ....) em solução aquosa adicionado ao adjuvante completo de Freund. É muito importante adicionar o antígeno ao adjuvante e não o contrário! </li><li> Há uma grande quantidade de resíduos ao fazer e injetando uma emulsão, por isso sempre preparar 1,5 ou 2 vezes mais do que o que você precisa. </li><li> Dissolver antígeno em solução salina para preparar uma solução de 2 mg / ml. Não filtro, que você não quer perder os agregados! </li><li> Coloque completa adjuvante de Freund H37Ra (Difco, catalogo 231.131) em um tubo de vórtice e em alta velocidade. Adicionar a gota a gota, enquanto o antígeno vórtex. Quando todos o antígeno é adicionada vórtice, por mais 5 minutos. A mistura deve ficar branco. </li><li> Coloque a emulsão em uma seringa de vidro e vinculá-lo a outra seringa de vidro usando uma ponte de 18G (Fisher catálogo # 14-825-17L). Enviar a emulsão de uma seringa para o outro até que se torne rígido (5-10 min). É melhor usar duas seringas 5 ml. Se mais de 5 ml de emulsão são necessários, use vários conjuntos de 5 ml seringas. </li><li> A emulsão pode ser armazenada nas seringas a 4 ° C por 3 semanas. </li></ol> 2. Imunização dos ratos <ol><li> Misture a emulsão nas seringas por alguns minutos e transfira para a seringa utilizada para a injeção. Injetar 200 ml por via subcutânea em 1-2 locais na base da cauda usando agulhas 23G e uma ponta Luer-Lok seringa de 3 ml. </li></ol> 3. Desafio com o antígeno na parte de trás <ol><li> Sete dias após a imunização, a barba duas manchas nas costas dos ratos e injetar por via intradérmica de 20 ml de uma solução de antígeno 1 mg / ml em um ponto e salina (ou antígeno irrelevante) no outro ponto. Não filtrar a solução de antígeno, como você pode perder agregados que aumentam a reação inflamatória. </li><li> Os ratos devem ser anestesiado para evitar movimentos. Injectar a solução por via intradérmica, utilizando 27G ½ agulhas e seringas de 1 ml. Mudança de agulhas entre as injecções. Nota: o desafio pode ser feito no pavilhão das orelhas, em vez de as costas para as medições mais precisas. Veja vídeo em <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. Medição de DTH <ol><li> O local da injecção irão começar a transformar vermelhas e inchaço como um sinal de inflamação. Medir o diâmetro da área inflamada usando uma régua ou, melhor ainda, um paquímetro. O inchaço máxima deve ocorrer entre 24 e 72 horas. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Os autores são co-fundadores e consultores para Airmid Inc.

Para uma medição mais precisa da reação DTH recomendamos desafiando os ratos com o antígeno no pavilhão da orelha. A reação pode ser medido como uma diferença no ouvido inchaço entre o ouvido antígeno desafiou relevantes eo ouvido desafiados com solução salina, sozinho ou com o antígeno irrelevante. Uma demonstração do desafio no ouvido é mostrado na 1.

Usar reagentes estéreis soluções e seringas. As seringas de vidro e pontes 18G pode ser autoclavado. Leia folha de dados do material antes de manusear um reagente para a primeira vez e usar equipamentos de proteção adequados.

indução e monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada ativa (dth) em ratos

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por linfócitos efetores CCR7-T de memória que infiltram o local da injeção de um antígeno contra o qual o sistema imunológico tem sido preparado. A reação inflamatória é caracterizada por vermelhidão e inchaço do local de desafio antigênico. É um modelo conveniente para determinar a eficácia in vivo de imunossupressores. DTH cutânea pode ser induzida ou por transferência adotiva de linfócitos T antígeno-específicos ou por imunização ativa com um antígeno e subseqüente desafio intradérmico com o antígeno para induzir a reação inflamatória da pele em uma área determinada. Respostas DTH pode ser induzida a vários antígenos, por exemplo ovalbumina, tuberculina, toxóide tetânico, ou limpet keyhole hemocianina (KLH). Aqui demonstramos como para induzir uma reação ativa DTH em ratos Lewis. Vamos primeiro preparar uma emulsão de água em óleo de KLH, nosso antígeno de interesse, em completa adjuvante de Freund e injetar este emulsão por via subcutânea a ratos. Isso vai preparar o sistema imunológico para desenvolver células de memória T direcionado para KLH. Sete dias mais tarde, vai desafiar os ratos por via intradérmica na parte traseira com KLH de um lado e com ovalbumina, um antígeno irrelevante, do outro lado. A reação inflamatória será visível 16-72 horas mais tarde, a área vermelha e inchada será medida como uma indicação da gravidade da DTH.

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7 efetuador linfócitos T de memória. Aqui demonstramos como induzir DTH ativa em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade do tipo retardada Ativa (DTH) em ratos

A hipersensibilidade do tipo tardio (HTL) é uma reação inflamatória mediada por linfócitos T de memória efetores CCR7+ que infiltram o local de injeção de ...

Olá, sou Christine Beaton. Trabalho no laboratório de George Chandy, no Departamento de Fisiologia e Biofísica da UCI. Hoje vou mostrar como induzir DTH ativo em ratos.Para isso, vou preparar uma emulsão de KLH, que é meu antígeno, em adjuvante de Freund. Em seguida, vou injetar essa emulsão na base da cauda de ratos Lewis. Isso irá induzir a imunização dos ratos contra KLH. E em uma semana, vou desafiar os ratos com KLH e medir a reação de hipersensibilidade tardia (DTH) por meio da medição do inchaço.Esse é o local do desafio e estamos utilizando isso no laboratório para observar o efeito de bloqueadores do canal PO sobre reações inflamatórias, como a HDT. Aqui está o adjuvante trans incompleto que vou usar para preparar a emulsão. Também poderia usar o adjuvante trans completo.Aqui estão cristais de KLH, que é meu antígeno hoje, e tenho uma solução aqui a dois miligramas por ml. Em PBS, vou usar esta seringa de cinco ml para retirar o adjuvante incompleto e transferi-lo para um tubo de 15 ml. Em seguida, vou colocar o tubo no vórtex e, enquanto estiver vortexando, vou adicionar meu antígeno gota a gota ao adjuvante.Em seguida, vou vortexar por mais cinco minutos. Após isso, vou

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JoVE Journal

Biology

Biologia

De hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) é uma reação inflamatória mediada por CCR7-efetoras de memória T (TEM) linfócitos. Aqui demonstramos como ativar células antígeno-específicas TEM, induzir DTH adotivos em ratos Lewis e monitorar a resposta inflamatória.

Indução e Monitoramento de hipersensibilidade tardia-Type Adoptive em Ratos

Aqui demonstramos um método para induzir e gravar o progresso de um atraso de hipersensibilidade do tipo-reação (DTH) na orelha de ratos. Isso é seguido por uma demonstração da preparação do tecido da orelha de rato para geração de imagens de dois fótons da resposta das células de memória / T efectoras.

As células de memória efetoras T imagem no ouvido após a indução de DTH Adoptive

Este vídeo mostra como induzir hipofisite auto-imunes em camundongos SJL e como avaliar sua gravidade pela histopatologia.

Indução de hipofisite Auto-Imune Experimental em Ratos SJL

Descreve-se um ensaio de diagnóstico potencialmente valiosa, que pode ser utilizada para decidir a retirada da imunossupressão após transplante sem risco elevado de rejeição do enxerto. O ensaio utiliza os princípios do tipo hipersensibilidade cutânea tardia e fornece uma avaliação precisa do dador respostas imunes efetoras e reguladoras específicas montadas pelos destinatários.

Trans-vivo Atraso Tipo Ensaio Hipersensibilidade para o Antigen Regulamento Específico

As reações alérgicas, caracterizada pela ativação de mastócitos e basófilos, são movidos pela ligação cruzada de IgE e liberação de mediadores pró-inflamatórios. A avaliação quantitativa da resposta alérgica pode ser conseguido através de corante azul de Evans para monitorar alterações na permeabilidade vascular após o desafio alérgeno.

Medindo Anafilaxia locais em Ratos

Aqui nós apresentamos um novo método para medir com precisão as diferenças de temperatura de corpo em anafilaxia sistêmica passiva (PSA) e modelos de rato de alergia alimentar usando um termômetro infravermelho. Este procedimento tem sido duplicado com precisão em resultados anteriores de PSA.

Medição de temperatura de corpo do mouse usando o termômetro infravermelho durante passiva anafilaxia sistêmica e avaliação de alergia alimentar

Descrevemos um modelo de imunização in vivo, hepatite translacional em camundongos BALB/c que pode ser utilizado para estudar a patogênese da hepatite autoimune induzida por drogas, incluindo diferenças sexuais observadas nesta doença. Descreveremos como este modelo demonstra análises reprodutíveis utilizando técnicas experimentais in vivo e in vitro.

Indução de Hepatite Autoimune Induzida por Drogas em CAMUNDONGOS BALB/c para o Estudo de Seus Mecanismos Patogênicos

A hipersensibilidade de contato (CHS) é um modelo experimental de murina de dermatite de contato alérgico (ACD). O CHS baseia-se na sensibilização com hapten reativo pintando a pele raspada do peito e abdômen, com um subsequente desafio da pele do ouvido com um hapten diluído, causando uma reação de inchaço que é avaliada de várias maneiras.

Entrar em contato com a Hipersensibilidade como modelo murino de dermatite de contato alérgico

O estudo demonstra o papel da pele na modulação das respostas imunes em camundongos por meio da imunização epicutânea (EC). A imunização contra CE com um antígeno proteico pode suprimir as respostas imunes na hipersensibilidade de contato ou reverter a supressão induzida pela pele quando combinada com padrões moleculares associados a patógenos. A imunização contra a CE mostra-se promissora como uma abordagem eficaz e sem agulha para a imunoterapia.

Modelo Murino de Imunomodulação Induzida por Epicutâneo

Esforços para isolar a subunidade catalítica da telomerase, TERT, em quantidades suficientes para estudos estruturais, foram cumpridos com sucesso limitado por mais de uma década. Aqui, apresentamos métodos para o isolamento do recombinante Tribolium castaneum TERT...

Na reconstituição in vitro da atividade T. Telomerase castaneum

Aprenda a induzir hipersensibilidade do tipo retardada ativa em ratos Lewis usando emulsão de antígeno KLH em adjuvante de Freund. Este método permite monitorar respostas inflamatórias mediadas por linfócitos T.

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