Name: In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos E15 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 17 s
Description: Aprenda a realizar injeções intrauterinas e eletroporação em embriões de camundongos E15 para introduzir DNA plasmidial no ventrículo lateral. Esta técnica permite manipulação genética direcionada em tecidos neurais em desenvolvimento.

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Os autores não têm nada a declarar.

in utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos e15

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

Intra-uterina in vivo de injeção e eletroporação do neocórtex embrionárias de camundongos fornece uma ferramenta poderosa para a manipulação de células progenitoras individuais que revestem as paredes do ventrículo lateral. Esta técnica é amplamente utilizada para estudar os processos envolvidos na corticogenesis por excesso de expressar ou derrubando genes e observando os efeitos sobre a proliferação celular, migração e diferenciação. Em comparação com as estratégias tradicionais de knockout, in-utero eletroporação fornece um meio rápido para manipular uma população de células durante uma janela específica temporal. Neste protocolo de vídeo destacamos a metodologia experimental para a preparação para a cirurgia os ratos, expondo os cornos uterinos através laporatomy, injetando DNA para os ventrículos laterais do embrião em desenvolvimento, electroporating DNA para os progenitores que revestem a parede lateral, e cuidar de animais pós-operatório . Nosso laboratório utiliza este protocolo para cirurgias em E13-E16 camundongos, no entanto, é mais comumente realizada no E15, como mostra este vídeo.

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos E15

A injeção e a electroporação in vivo in utero do neocórtex embrionário de camundongos fornecem uma ferramenta poderosa para a manipulação de progenitores individuais...

Olá, sou William Tis do Laboratório Krete. Hoje, eu e outros vamos mostrar a vocês injeções intrauterinas em embriões de camundongo E 15. Olá, meu nome é Laura Elias.Hoje vou mostrar como preparar as pipetas de microinjeção e carregá-las para as injeções intraventriculares e eletroporação que realizaremos. Meu nome é David Castaneda e hoje estarei auxiliando nas injeções in vivo in utero de embriões de camundongos. Injetaremos DNA plasmidial nos ventrículos laterais de embriões de camundongos em desenvolvimento.Nós visamos o córtex CE desses embriões para obter a expressão de diferentes moléculas por células gliais, que posteriormente se tornarão neurônios durante o desenvolvimento. Ao realizar essas injeções intrauterinas, há algumas ferramentas importantes que você precisará usar, e eu as mostrarei agora. Utilizamos um freer e um par de pinças de adin.Um, um par serrilhado e outro par com um pequeno dente na extremidade. Utilizamos um par de hemostatos. Este é um par de tesouras.Em seguida, utilizamos esses dois grampeadores. Este é o maior, que usamos para ratos. Este é o menor, que usamos para camundongos.Utiliza grampos de tamanho sete, e este utiliza grampos de tamanho nove,

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e15-mouse

Research

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Biology

Biologia

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de ratos E16

Cirurgia no útero de sobrevivência em camundongos permite a manipulação molecular de expressão de genes durante o desenvolvimento. Aqui nós descrevemos o uso de alta freqüência ultra-sonografia para guiar a injeção de vetores retrovirais para o cérebro do rato no dia embrionário (E) 9.5.

Ultra-som guiada microinjeção em parte frontal do cérebro do rato In Utero Em E9.5

Na eletroporação útero permite a entrega rápida em um gene espacialmente e temporalmente maneira controlada no desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC). Aqui nós descrevemos um adaptável altamente in utero protocolo de eletroporação que pode ser usado para entregar constrói expressão em vários domínios embrionário do SNC, incluindo o telencéfalo diencéfalo e retina.

Entrega Gene eficiente em múltiplos territórios CNS Usando In Utero Eletroporação

Um método de transferência de genes no cérebro do rato em desenvolvimento é descrito usando um único método cirúrgico ea forma especial de eletrodos. Esta técnica exclusiva permite a transfecção de DNA plasmídeo temporal e espacialmente, o que ajudará muitos neurocientistas em estudar o desenvolvimento do cérebro.

Mouse No Utero Eletroporação: Transfecção Gênica Controlled Spatiotemporal

Controlar a expansão de células estaminais somáticas é um factor principal dificultando o seu estudo e a utilização em terapia. Aqui, descrevemos um sistema para controlar temporalmente neural haste de expansão de células durante o desenvolvimento e na vida adulta, o que pode ser usado para aumentar o número de neurónios gerados no cérebro do rato.

Expansão da embrionárias e adultas células-tronco neurais por<em&gt; In Utero</em&gt; Eletroporação ou injeção estereotáxica Viral

Este vídeo demonstra a entrega de DNA de plasmídeo em células neuronais cerebelares de embriões murinos usando eletroporação in utero. Este método é útil para obter compreensão da função in vivo dos genes no desenvolvimento normal do cérebro e as mudanças na expressão gênica das células dos neurônios durante a progressão do tumor.

Entrega de genes baseada em eletroporação in utero: uma técnica para injetar DNA de plasmídeo em células cerebelares embrionárias de embriões murinos

Apesar da importância funcional e clínico do...

Manipulação genética do rato em desenvolvimento Hipotálamo através<em&gt; In utero</em&gt; Eletroporação

Este protocolo descreve em detalhes como transfectar especificamente diferentes regiões do sistema nervoso central C57BL/6 por meio de eletroporação in utero. Incluídas neste protocolo estão instruções detalhadas para transfecções de regiões que se desenvolvem no córtex, hipocampo, tálamo, hipotálamo, núcleo septal lateral e estriado.

Específicos do Striatum Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- e<em&gt; In Utero</em&gt; A electroporação em ratinhos C57BL / 6 mouse

O dobro na eletroporação uteral permite atingir populações celulares que são separadas espacial e temporalmente. Esta técnica é útil para visualizar interações entre essas populações celulares usando proteínas fluorescentes em condições normais, mas também após experimentos funcionais para perturbado genes de interesse.

Dupla em Eletroporação utero para atingir populações celulares temporais e espacialmente separadas

Neste protocolo, descrevemos como injetar a cavidade amniótica do camundongo no E7.5 com lentivírus, levando à transdução uniforme de toda a placa neural, com efeitos mínimos prejudiciais sobre a sobrevivência ou desenvolvimento embrionário.

Placa neural de Murine Alvo por In Utero Nano-Injection (NEPTUNE) no Dia Embrionário 7.5

Aprenda a realizar injeções intrauterinas e eletroporação em embriões de camundongos E15 para introduzir DNA plasmidial no ventrículo lateral. Esta técnica permite manipulação genética direcionada em tecidos neurais em desenvolvimento.

In Utero injeção intraventricular e eletroporação de embriões de camundongos E15

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