Name: Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamp in the Rat Consciente (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-07T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 12 s
Description: Aprenda a realizar o clamp hiperinsulinêmico-euglicêmico em ratos conscientes para avaliar a sensibilidade à insulina. Este método permite medir diretamente as taxas de depuração de glicose em níveis fisiológicos elevados de insulina.

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Este estudo foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde e Canada.JS Genoma detém concessões salariais apoio da Foundationfor Heritage Alberta Pesquisa Médica, Heart and Stroke Foundation do Canadá e da Associação de Diabetes do Canadá. Um agradecimento especial ao Dr. David Wasserman e Bracy Bingle para ensinar este procedimento para o laboratório Shearer.

A: Cateterismo Cirúrgica da circulação arterial e venosa Parte 1: arterial e venoso Preparação Cateter <ol><li> Cortar 15 cm de PE-50 (diâmetro interno de 0,58 milímetros (0,023 ") x um diâmetro exterior de 0,965 milímetros (0,038"). Corte uma seção de tubo de silastic um milímetro (0,76 mm (0,030 ") de diâmetro interno x 1,65 milímetros (0,065 ") de diâmetro externo) para uso como restrição do grânulo. O talão de restrição impede o rato de retirar o cateter, uma vez que está no lugar. </li><li> Inserir as pontas dos micro pinças de dissecação para o lúmen do talão de restrição e gentilmente segure as pontas das pinças para além de esticar a abertura maior. Usando um outro par de pinças de dissecação micro, deslize o tubo silastic para o lúmen do talão de restrição. Fixe com cola adesiva forte (Loctite Super Glue). O talão deve ficar na posição horizontal ao redor do cateter. Permitir cateter para secar (24 horas). </li><li> Para um rato grama 300, a linha arterial é de aproximadamente 2,7 centímetros do talão de restrição enquanto a linha de jugular é de aproximadamente 3,2 centímetros. Comprimentos cateter da restrição são ajustados por 0,5 centímetros para cada aumento de 100 g no peso corporal. Não chanfro nas bordas do cateter, pois isso pode punção do vaso durante a inserção. </li><li> Imediatamente antes da cirurgia, preencher as linhas com salina heparinizada (10U/ml), selo ambas as extremidades com um plug em aço inoxidável tubos e colocar em etanol (70%) para esterilizar. Ar seco antes da inserção. </li></ol> Parte 2: Preparação Cirúrgica <ol><li> Procedimentos foram aprovados pela Universidade de Calgary e Animal Care Use Comitê e respeitar Canadian Association for Laboratory Animal Ciência diretrizes para a experimentação. Os procedimentos descritos abaixo foram realizados em adultos, machos Sprague-Dawley (~ 300g). Todos os procedimentos são realizados sob isoflurano, embora seja possível a utilização de anestésicos injetáveis. Todos os procedimentos cirúrgicos são realizados assegurando técnicas assépticas. Equipamento cirúrgico, copos e salina heparinizada são esterilizados em autoclave. Luvas cirúrgicas, seringas e aplicadores de algodão esterilizado ponta são comprados do fornecedor. </li><li> Pesar o rato e gravar o resultado. O peso será importante no acompanhamento pós-cirúrgico de animais. Únicos animais que recuperar o peso pré-operatório os níveis devem ser utilizados para a experimentação. Anestesiar ratos (3% isoflurano) em uma caixa de anestésico. Mantenha o rato em ~ isoflurano a 2% durante a cirurgia usando um cone de nariz. Cirurgia deve ser realizada em uma área que promove a desinfecção assepsia. </li><li> Prepare o animal através da remoção do cabelo do sítio cirúrgico (pescoço e ombros). A máquina de cortar cabelo pequeno ou depilatórios químicos podem ser usados. Executar este procedimento em uma área separada onde a cirurgia deve ser realizada. </li><li> Seguro de animais para a mesa cirúrgica. Garantir animal é completamente anestesiados, verificando a presença de pé / olho reflexos. Preparar os locais cirúrgicos com um desinfectante da pele adequada (etanol 70%, seguido pelo matagal betadine seguido por etanol 70%). </li></ol> Parte 3: Cirurgia <ol><li> Faça pequenas 1 centímetro incisão vertical na linha média superior à do esterno (Pick up da pele ao longo do eixo longitudinal medial com uma pinça e cortado com tesoura ou bisturi). </li><li> Blunt dissecar usando micro pinças de dissecação para expor o músculo esternocleidomastóideo esquerdo. Refletir este músculo para expor cerca de um centímetro da artéria carótida esquerda. Use uma pinça de dissecação com micro artéria carótida para manter a artéria no local. Suavemente provocar off tecido conjuntivo da artéria carótida. É importante isolar o nervo vago da artéria sem danificar tanto a artéria ou nervo. Isolar a artéria, em seguida, ligadura final cefálica com fio de seda 4-0 (este será usado para manipular a artéria carótida durante a cirurgia). Nota: 4-0 devem ser esterilizados com álcool 70% antes do uso. </li><li> Prender o recipiente com serrilhados, micro dissecação fórceps. Punção no final ligada com um calibre 21 Adaptador Luer VENOJECT Multi-Sample. Remova o plugue de tubos de aço inoxidável e insira cuidadosamente cateter com a ajuda de um introdutor de cateter estéril para admiti-lo para dentro da artéria. Assegurar o cateter é seguro com uma pinça, parcialmente liberação micro pinças de dissecação clampeamento da artéria e continuar inserindo o cateter para o talão. Neste ponto, a ponta do cateter deve ser no arco aórtico. Tome cuidado para não liberação do cateter, a pressão do navio irá forçá-lo para fora. </li><li> Amarre dois 4-0 com segurança abaixo de contas e um acima e confirmar que o cateter irá amostra. Lavar o sistema com solução salina heparinizada 10U/ml. Re plug-final da externa do cateter com uma ficha de tubos de aço inoxidável. </li><li> Usando a mesma incisão, sem corte para expor dissecar veia jugular externa direita. Isolar cuidadosamente e ligar o final cefálica com fio de seda. Puncionar a veia com uma calibre 21 Adaptador Luer VENOJECT Multi-Sample. Remova o plugue de tubos de aço inoxidável e inserir cateter com c estérilintrodutor atheter para o talão e gravata duas suturas abaixo do talão. Amarre uma sutura terceiro talão acima e confirmar que as amostras. Nivelada com a linha venosa 10U/ml heparinizado salina. Re plug-final cateter externo com tomada de tubos de aço inoxidável. </li><li> Túnel de calibre 14 com agulha sob a pele sem corte e fazer a incisão nas costas entre as omoplatas. Passe o cateter através da agulha para exteriorizar-los na parte de trás do rato. Cerca de quatro centímetros da linha é visível. Corte de 0,5 centímetros Tygon Tubulação Medical S-50-HL, colocá-lo em torno de ambos os cateteres exteriorizados e seguro com uma fita como requerido (azul para a veia, vermelho para artéria). Reteste cateteres para assegurar a permeabilidade, lavar e encher com solução salina heparinizada 150U/ml para prevenir a coagulação. </li><li> Feche todas as incisões com fio de seda 3-0. Ratos propensos lugar, em pré-aquecido gaiola, limpa com comida no fundo da gaiola. </li></ol> B: Cuidados Pós-Operatórios Parte 1: Cuidados pós-operatório imediato e Monitoramento <ol><li> Quando o rato recupera capacidade ambulatorial completa e alerta devolver o rato para alojamento dos animais. </li><li> Permitir o rato para recuperar para 3-5 dias. </li><li> Monitorar diariamente para infecção, dor e alterações no peso. A infecção pode ser motivo de preocupação se a descarga de sites da incisão, letargia geral e / ou dor é observado. A dor é indicado por postura encurvada, pele volta babados e ausência de comportamento ambulatorial e / ou comer. A perda de peso pode ser experimentado imediatamente após a cirurgia até três dias após a cirurgia, no entanto, o peso deverá estabilizar e / ou aumento de até 10% do peso pré-cirúrgico dentro de 5 dias. Severa perda de peso pode indicar acidente vascular cerebral, infecção e / ou dor. </li><li> Reteste cateteres diariamente para garantir a permeabilidade. </li></ol> Parte 2: Manter permeabilidade do cateter <ol><li> A cada dia durante o pós-operatório de recuperação, preencha Seringas Dica 1ml SLIP com salina heparinizada 150U/ml e tampá-lo com uma agulha de calibre 22 sem corte. A agulha é inserida blunt 20cm de tubo PE-50 com 23 tubos de engate gauge de aço inoxidável na outra extremidade. </li><li> Remover bolhas de ar, colocando a extremidade com o acoplador de tubos maior do que o resto da seringa de 1ml e empurrar as bolhas para fora da linha. </li><li> Grampo fora da linha arterial exteriorizada a partir do rato com hemostats logo abaixo a ficha. </li><li> Remova o plugue de cateter de aço usando o segundo par de hemostats. </li><li> Insira o acoplador de tubos ligados à seringa na linha arterial e solte o hemostats oclusão do cateter exteriorizada arterial. </li><li> Aspirar o sangue arterial do cateter para a seringa. Se o cateter não chamar a facilidade com que pode ser necessário muito gentilmente empurrar uma pequena quantidade de solução de descarga através do cateter para desalojar a ponta do cateter no caso, é prensada contra a parede do vaso. O cateter foi completamente apagado quando o sangue chega a seringa. </li><li> Prender a próxima PE-50 tubulação para a seringa de 1ml e descarte da seringa. Substituir por uma nova seringa preenchida com soro fisiológico 150U/ml fresco heparinizado. Unclamp a tubulação e segurando a seringa na posição vertical novos, flick a nova seringa com o dedo para retirar eventuais bolhas de ar novo para cima e para longe da linha. Nota: Cuidado deve ser assegurada como bolhas de ar podem causar um derrame. </li><li> Injetar o soro fisiológico 150U/ml heparinzed até a linha de cateter é clara e livre de sangue. </li><li> Grampo fora da linha arterial exteriorizada a partir do rato com hemostats logo abaixo do acoplador tubulação. Remova o conector da seringa partir da linha de cateter arterial e substituí-la com a ficha de aço inoxidável da tubulação. </li><li> Solte o hemostats oclusão do cateter exteriorizada arterial. </li><li> Repita o procedimento para linha venosa. No entanto, devido a amostragem de baixa pressão venosa muitas vezes não é possível. Se a solução salina 150U/ml heparinzed pode ser infundido com resistência mínima é provável que o cateter está bem posicionado na veia. </li></ol> C: hiperinsulinêmico euglicêmico-Grampo Parte 1: Pinça de Set-up e Preparação <ol><li> Pesar o rato e registrar o peso. Esta será necessária para determinar as taxas de infusão de insulina e glicose. Rápido o rato por pelo menos 5h antes de experimentar. Isso garante que o animal está em um estado pós-prandial ea contribuição de glicose a partir de fontes alimentares é minimizado. Coloque o rato em um pequeno recipiente / gaiola com roupa de cama, que limita o movimento excessivo. O animal deve ser capaz de virar-se eo noivo livremente. </li><li> Criar linhas e bombas de infusão, como visto na Figura 1. P50 comprimentos de mangueira de ligação são as seguintes: seringa para Y conector é de 8 cm, Y conector para rato é 15cm, linha arterial é 20cm, e linha venosa é 10 centímetros de comprimento. Remova os bujões de tubos de aço inoxidável e lave as linhas arterial e jugular para garantir a infusão e amostragem, respectivamente, com solução salina heparinizada 10U/ml. </li><li> Determinar à insulina volume necessário. Isso vai variar dependendo do nível de insulina e peso do rato. Aqui, 4mU/kg/min é administrada a uma taxa de 2uL/min. Esta é uma alta dose fisiológica. Sempre que possível, devem ser feitas tentativas para limitar o volume de infusão. Insulina deve ser adequadamente diluída e ser administrada na presença de plasma. Uma solução a 3% do plasma de rato em solução salina é utilizada para diluir a insulina neste laboratório. A insulina é HumulinR 100U/ml (Eli Lily), embora insulina de acção rápida outras podem ser empregadas. Certifique-se de insulina diluída é bem misturado antes de colocar em seringa de infusão. </li><li> Prepare dextrose 50%. Isto pode ser colocado diretamente em seringa na bomba de infusão. Mark bomba com "glicose" para evitar futuras confusões. Lembre-se de garantir volumes suficientes de insulina e glicose para o estudo. Grampos geralmente duram ~ 2h. No presente protocolo, seringas de 3 ml são usados. </li><li> Glucose lugar e seringas de insulina em Harvard Apparatus modelo 11 Plus bombas de seringa. Glucose avançar para Y Conector de linha e com uma pinça hemostática. Insulina avançar para animal, clamp linha com hemostat. Grampo linhas e permitem rato para relaxar por 30min antes de iniciar o experimento. NOTA: guardas ponta hemostat são sugeridas para evitar permanente cravação das linhas. </li><li> Prepare centrífuga e EDTA-tubos revestidos para a coleta de plasma. No presente estudo, amostras de sangue adicionais serão obtidos quando o animal está preso. </li></ol> Parte 2: Protocolo Experimental <ol><li> Uma amostra de insulina basal e amostra de hematócrito devem ser adquiridos. Amostragem hematócrito garante volume de sangue é mantida durante todo o experimento. Geralmente, os níveis de hematócrito não devem cair mais de 10% do valor inicial. </li><li> Obter uma amostra de glicose basal (One Touch Ultra, LifeScan, Inc.) e determinar o nível de glicose no sangue total a ser clipado. Aqui, nós braçadeira em euglicemia, ou 5,0 5,5 mM (Figura 2). Depois de cada amostra de sangue, lave linha arterial com um pequeno volume de solução salina heparinizada 10U/ml para prevenir a coagulação. NOTA: Certifique-se sem coágulos ou bolhas de ar estão na linha antes da infusão. Estes podem dar o animal de um derrame. </li><li> Iniciar infusão de insulina. Tomar glicose no sangue em intervalos de 5-10min, o monitoramento de glicose em cada momento. Ajustar a taxa de glicose de infusão conforme necessário até que um estado de equilíbrio é alcançado. Este processo é geralmente um processo de tentativa e erro e pode levar 30min a&gt; 2h. Os níveis de glicose necessária para manter a glicemia são dependentes do protocolo experimental, as espécies e as condições atuais (Figura 2). </li><li> Os níveis de glicose no estado estacionário são três leituras consecutivas dentro de um intervalo definido. Aqui, dentro de três leituras ~ 1mM é considerado apertado (por exemplo, 4.8, 5.2, 5.6mm). Uma vez que o estado estacionário é atingido, a taxa recorde infusão de glicose necessária para manter a glicemia por um período de 30min. Durante este tempo as amostras de sangue adicionais podem ser obtidas. No mínimo, uma amostra de insulina plasmática e segunda amostra de hematócrito deve ser obtida. </li><li> Uma vez que grampo é concluída, os animais podem ser usadas para outros testes ou sacrificados e os tecidos coletados para análise posterior. Dependendo do animal, linhas de cateter pode ficar patente durante 5-7 dias. </li></ol> D: hiperinsulinêmico euglicêmico-Resultados (insulina) Grampo Quando realizada corretamente, o procedimento de fixação avalia a sensibilidade à insulina no estado de equilíbrio do rato. Ao apresentar os dados obtidos a partir da braçadeira, é essencial para documentar os níveis de glicose e as taxas de infusão de glicose. Os níveis de glicose estáveis ​​ao longo do tempo um curso de um mínimo de 30min (Figura 3) são indicativos de um estado estacionário. A glicose é considerado estável somente se glicose no sangue total é mantido dentro de ~ 1mm. Taxas de infusão de glicose mostram os níveis de glicose exógena necessária para manter a glicemia. Sempre que possível, estes valores devem ser mostrados como um curso de tempo ao invés de valor único, em média (Figura 4). Outras medidas recomendadas para serem relatados são insulina plasmática e do hematócrito. A determinação do jejum e os níveis de insulina preso confirmar que a insulina foi administrada com sucesso e irá detectar eventuais diferenças de níveis entre os grupos de tratamento (Figura 5). Medidas de hematócrito no início e obter a conclusão do clamp de insulina são sugeridos (Figura 6). Isso é para garantir os níveis de hematócrito não caem mais de 5% durante o experimento e as alterações que acompanham no volume de fluxo sanguíneo e não influenciam a disponibilidade de glicose. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Experimental set-up. A Figura 1 mostra rato, desenfreada consciente durante o procedimento de fixação. Cateteres permitir a amostragem de sangue e infusões sem manipulação do animal. Bombas à esquerda contêm insulina e glicose. t "&gt; <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Esperados dados durante o processo de fixação. Para obter uma braçadeira em níveis basais (euglicemia, 5mM), os níveis de glicose exógena (D50) são manipulados até a linha de base ou 'grampo' é alcançada. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Resultados esperados plasma glucose do procedimento de fixação. Quando o animal é 'preso', de glicose no sangue é relativamente estável ao longo do tempo e os grupos experimentais. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig4.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 4. Taxas de glicose Representante infusão do procedimento de fixação. A quantidade de glicose exógena necessária para manter a euglicemia difere. Isto é ilustrado com um controle (ração alimentar) e alto teor de gordura alimentados (resistentes à insulina) animais. A alta de gordura animal alimentado requer menos glucose injectada para manter a glicemia, principalmente porque ele é insensível à insulina infundida. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. Insulina plasmática Representante do rato. A insulina plasmática durante o clamp de insulina deve ser maior do que o jejum de insulina plasmática, linha de base. Isso garante a insulina foi devidamente administrada ao animal durante o clamp de insulina. <img src="/files/ftp_upload/2432/2432fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Figura 6. Relato de hematócrito. O hematócrito inicial e hematócrito após a experiência deve ser obtida e relatada. Isso garante níveis de hematócrito não caem mais de 5% dos níveis basais decorrentes da amostragem excessiva de sangue arterial.

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Procedimentos foram aprovados pela Universidade de Calgary e Animal Care Use Comitê e respeitar a Associação Canadense de orientações Laboratory Animal Science for experimentação. Os autores não têm interesses conflitantes ou divulgações.

Inicialmente desenvolvido para a investigação da sensibilidade à insulina em seres humanos, o procedimento de fixação foi agora adaptada para outras espécies, incluindo ratos de laboratório e camundongos. Modelos animais de resistência à insulina investigando fornece uma ajuda significativa para a compreensão da fisiopatologia da sensibilidade à insulina e patologias associadas, bem como identificar as intervenções terapêuticas que têm valor clínico 1,2. Vários métodos para avaliar a sensibilidade à insulina ...

<table border="1"><tbody><tr valign="top"><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr valign="top"><td> Tubos de polietileno Intramedic (PE-50) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-170-12B </td><td> Diâmetro interno de 0,58 milímetros (0,023 &quot;) x diâmetro externo de 0,965 milímetros (0,038&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Dow Corning Tubing Laboratório Silastic </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11-189-15C </td><td> Diâmetro interno de 0,76 milímetros (0,030 &quot;) x diâmetro externo de 1,65 milímetros (0,065&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Tygon S-50-HL Tubulação de Medicina </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PY2 72-1251 </td><td> Diâmetro interno de 3.2mm (0.125 &quot;) x 4,7 milímetros de diâmetro exterior de (0,1875&quot;) </td></tr><tr valign="top"><td> Loctite Super Glue </td><td> Grand &amp; Toy </td><td> 32237 </td><td> Gel de Controle </td></tr><tr valign="top"><td> Lâmina cirúrgica estéril </td><td> VWR </td><td> BD371610 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Micro Pinça curva Dissecting </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-20 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Micro Pinça reta Dissecting </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 160-15 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hemostática curva </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1135 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Hemostática reta </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-1130 </td><td> x 2 </td></tr><tr valign="top"><td> Dica Guarda hemostat </td><td> Robbins Instruments, Inc. </td><td> 15.09-2-004 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tesoura reta Cirurgia </td><td> George Tiemann &amp; Co. </td><td> 105-402 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> VENOJECT Multi-Sample Luer Adapter </td><td> Terumo Medical Products </td><td> 810127A </td><td> 21 gauge, 1 pol </td></tr><tr valign="top"><td> Introdutor do cateter estéril </td><td> Becton Dickinson </td><td> 406999 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 14-gauge agulha Blunt </td><td> Becton Dickinson </td><td> 511310 </td><td> Calibre 14, 2 pol </td></tr><tr valign="top"><td> Sutura cirúrgica estéril </td><td> Johnson &amp; Johnson Medical Products </td><td> 1679H </td><td> Seda, tamanho 3-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Não-esterilizadas suturas cirúrgicas </td><td> Angiotech Pharmaceuticals, Inc. </td><td> SP116 </td><td> Seda, tamanho 4-0 </td></tr><tr valign="top"><td> Cotonetes de algodão </td><td> VWR </td><td> 10806-005 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 4ply compressas de gaze </td><td> VWR </td><td> CA43845-062 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pequenos animais Clippers sem fio </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 729063 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Isoflurano </td><td> Halocarbon Products Corp </td><td> IPN-45 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Anestésico Carrinho </td><td> Benson Medical Industries, Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Etanol 70% </td><td> Fisher Scientific </td><td> HC-1000 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Betadine solução anti-séptica </td><td> Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. </td><td> 105267 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Modelo 11 Plus bomba de seringa </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Tubos de aço inox Engates </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4434 </td><td> 23 gauge, 0,3 polegadas </td></tr><tr valign="top"><td> Tubulação de aço inoxidável Plugs </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 72-4436 </td><td> 23 gauge, 0,5 pol </td></tr><tr valign="top"><td> Stainless Steel Needles Blunt </td><td> Instech Laboratories, Inc. </td><td> LS22 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> 60 Grau Y-Conectores </td><td> Peças pequenas </td><td> STCY-22-05 </td><td> Calibre 22 </td></tr><tr valign="top"><td> CritSpin Centrífuga Micro-hematócrito </td><td> Iris processamento das amostras </td><td> CS12 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Mini Centrífuga </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-090-100 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Micro Tubos da centrífuga </td><td> VWR </td><td> 53550-778 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> 50ml centrifugar tubos de polipropileno </td><td> VWR</td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Dica 1ml Seringas de plástico deslizamento </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Seringas 3ml Dica plástico Luerlok </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Injeção de anticoagulante heparina </td><td> Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. </td><td> 102824 </td><td> Fabricante: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI </td></tr><tr valign="top"><td> Solução EDTA </td><td> Promega Corp </td><td> V4231 </td><td> 0,5 M, pH 8,0 </td></tr><tr valign="top"><td> Salina </td><td> Drogas ocidental Distribution Centre Ltd. </td><td> ABB7983154 </td><td> Fabricante: Hospira Cloreto de Sódio 0,9% </td></tr><tr valign="top"><td> Dextrose 50% </td><td> Vetoquinol </td><td> 8DEX012D </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Humulin-R </td><td> Eli Lilly </td><td> HI-210 </td><td> 100U/ml </td></tr><tr valign="top"><td> 1ml seringas de insulina </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309311 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand Selante * Hemato-Seal </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-678 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fisherbrand * Tubos capilares de microhematócrito </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-362-574 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra tiras de teste </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314H </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> One Touch Ultra medidor de glicose do sangue </td><td> LifeScan, Inc. </td><td> AW 085-314.oB </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Sódio Pentobarbitol </td><td> Ceva Sante Animale </td><td> 1715 138 </td><td> Conc. 54.7mg/ml </td></tr><tr valign="top"><td> Red Tape Labeling Laboratório </td><td> VWR </td><td> 89097-932 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Fita azul Etiquetagem de Laboratório </td><td> VWR </td><td> 89097-936 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Pesar Escala </td><td> Fisher Scientific </td><td> 01-913-88 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Vórtice </td><td> VWR </td><td> 58815-234 </td><td></td></tr><tr valign="top"><td> Cronômetro </td><td> VWR </td><td> 62344-641 </td><td></td></tr></tbody></table>

hiperinsulinêmico euglicêmico-clamp in the rat consciente

Hyperinsulinemic-Euglycemic Clamp in the Conscious Rat

Diabetes tipo 2 (diabetes tipo 2) está crescendo rapidamente na prevalência. Caracterizada por uma produção inadequada de insulina ou a incapacidade de utilizar a insulina produzida, os resultados T2D em níveis elevados de glicose no sangue. O &quot;padrão-ouro&quot; na avaliação da sensibilidade à insulina é um clamp hiperinsulinêmico euglicêmico-clamp ou insulina. Neste procedimento, a insulina é administrada a uma taxa constante, resultando em uma queda da glicose no sangue. Para manter a glicose no sangue a um nível constante, glicose exógena (D50) é infundida na circulação venosa. A quantidade de glucose injectada para manter a homeostase é indicativo de sensibilidade à insulina. Aqui, mostramos o procedimento de fixação básica na cronicamente cateterizada, rato, desenfreada consciente. Este modelo permite que o sangue a ser coletado com o mínimo de stress para o animal. Após a indução da anestesia, a incisão é feita na linha média e da artéria carótida comum esquerda e veia jugular direita são cateterizados. Cateteres inseridos são lavados com salina heparinizada, então exteriorizado e seguro. Animais são permitidos para se recuperar para 4-5 dias antes do experimento, com ganho de peso monitorados diariamente. Apenas os animais que recuperar o peso de pré-cirurgia níveis são utilizados em experiências. No dia do experimento, os ratos estejam em jejum e conectado a bombas contendo insulina e D50. Glucose linha de base é avaliada a partir da linha arterial e usou uma referência durante todo o experimento (euglicemia). Depois disso, a insulina é administrada a uma taxa constante para a circulação venosa. Para combinar com a queda da glicose no sangue, D50 é infundida. Se a taxa de infusão D50 é maior do que a taxa de absorção, um aumento da glicose irá ocorrer. Da mesma forma, se a taxa é insuficiente para atender a absorção de glicose do corpo inteiro, uma queda irá ocorrer. Titulação de glicose continua até que as leituras de glicose estáveis ​​são alcançados. Os níveis de glicose e as taxas de infusão de glicose durante este período estável são registrados e relatados. Resultados fornecem um índice de sensibilidade de todo o corpo à insulina. A técnica pode ser refinada para atender às necessidades específicas experimental. Ela é reforçada pelo uso de traçadores radioativos que podem determinar tecidos específicos de insulina estimulou a captação de glicose, bem como volume de negócios de glicose do corpo inteiro.

O grampo hiperinsulinêmico euglicêmico-é o &quot;padrão ouro&quot; para a avaliação da ação da insulina. A insulina é infundida a uma taxa constante estimulando a captação de glicose. A quantidade de glicose exógena infundido para combater essa queda é um indicativo de sensibilidade à insulina. Aqui, o procedimento é realizado em um rato, consciente desenfreada.

Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamp in the Rat Consciente

A diabetes tipo 2 (DM2) apresenta um aumento rápido de prevalência. Caracterizada por uma produção inadequada de insulina ou pela incapacidade de utilizar a insulina produzida, ...

O objetivo geral deste procedimento é avaliar a sensibilidade à insulina em ratos conscientes e não restritos. Isso é realizado primeiramente por meio da cateterização da artéria carótida esquerda. Em seguida, a veia jugular direita é cateterizada para garantir resultados ideais.Os cateteres são lavados diariamente para manter a patência durante um período de recuperação pós-operatória de cinco dias. Em última análise, os resultados podem ser obtidos do clamp hiperglicêmico hiperinsulinêmico com U, que demonstram as taxas de infusão de glicose em todo o organismo. A principal vantagem dessa técnica é que podem ser obtidas medidas diretas das taxas de captação de glicose em todo o organismo em níveis fisiológicos elevados de insulina.Os cateteres arteriais e venosos devem ser preparados com antecedência em relação ao procedimento cirúrgico. O cateter deve ter extremidades rombudas, ser preenchido com solução salina heparinizada e ser esterilizado com etanol, com um fio restringente firmemente fixado a 2,7 ou 3,2 centímetros de uma das extremidades, para cateteres arteriais e venosos, respectivamente. Ratos machos adultos da linhagem Sprague Dawley com aproximadamente 300 gramas são

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Medicine

Medicina

O grampo hiperinsulinêmico euglicêmico-, ou clamp de insulina, é o padrão ouro para avaliar a ação da...

Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamps em Consciente, Ratos Unrestrained

Um protocolo para as infusões crónicas de glicose e Intralipid no rato é descrito. Este modelo pode ser utilizado para estudar o impacto do excesso de nutrientes sobre a função do órgão de parâmetros fisiológicos.

Um Modelo de Infusão Crónica de nutrientes no Rato

Este protocolo estuda o papel do ligante de chemokine (C-C motif) 5 (CCL5) no hipotálamo, entregando um antagonista, MetCCL5, dentro do cérebro de rato usando um sistema de infusão de cérebro de bomba micro-osmótica. Esta inibição transitória de CCL5 atividade interrompida hipotalâmica insulina sinalização, levando à intolerância à glicose e a sensibilidade periférica à insulina sistêmica.

Estudando o sinal de insulina hipotalâmico a intolerância de glicose periférica com um sistema de infusão contínua de drogas dentro do cérebro de rato

Um clamp hiperglicêmico é usado para medir a liberação de insulina com uma concentração de glicose no sangue mais alta mantida. Uma pinça hipoglicemiante serve para medir a produção de glicose induzida por respostas contra-regulatórias. Ambos os métodos utilizam o mesmo procedimento cirúrgico. Apresentamos aqui uma técnica de clamp para avaliar o metabolismo sistêmico da glicose.

Clamp hiperglicêmico e grampo hipoglicêmico em camundongos conscientes

O pulmão é perfundida, tanto arterial sistémica brônquica e artérias pulmonares. Na maioria das patologias do pulmão, é a mais pequena da vasculatura sistémica que mostra a neovascularização robusto. Cessação do fluxo sangüíneo pulmonar promove a angiogênese brônquica vivo. Nós fornecemos detalhes cirúrgicos de induzir isquemia da artéria pulmonar esquerda que promove neovascularização brônquica.

Angiogênese no pulmão de rato Isquêmica

Este artigo fornece detalhes sobre como Elvax 40W pode ser utilizado como um método de libertação lenta para entrega da droga à retina de um rato adulto. O protocolo para a preparação, o carregamento e entrega o complexo droga-resina, para o olho é descrito.

De liberação lenta Drug Delivery através Elvax 40W para o Rat Retina: implicações para o tratamento de condições crônicas

Acessos vasculares para medir a hemodinâmica, fornecer fluidos e realizar amostras de sangue são importantes para qualquer estudo de modelo de pequenos animais. Apresentamos uma técnica de implante de cateteres na artéria carótida e na veia jugular comum em um rato anestesiado para conexão a um sistema para realização de monitoramento, infusões e amostragem.

Cateterismo da artéria carótida e jugular para executar as medidas hemodinâmicas, infusões e Sangue de amostragem em um Rat Consciente Modelo

A determinação da taxa de filtração glomerular (TFG) é o padrão-ouro para avaliar a função renal geral. No entanto, os procedimentos tradicionais para medir esse parâmetro são complicados e exigem um grande investimento de tempo. Aqui descrevemos um método mais rápido e minimamente invasivo para determinar a TFG por via transcutânea.

Avaliação transcutânea da função renal em roedores conscientes

Descrevemos um método para produzir um modelo animal de fibrose hepática no rato e avaliamos o grau de fibrose por exame histológico do fígado. O modelo pode ser usado para estudar o desenvolvimento de doenças hepáticas, bem como para testar a eficácia de potenciais agentes antifibróticos.

A fibrose do fígado Modelo dimetilnitrosamina induzida no Rato

Um modelo de braçadeira hilar fígado de rato original foi desenvolvido para estudar o impacto das moléculas farmacológicas no melhoramento da lesão por isquemia-reperfusão. Este modelo inclui canulação direta da oferta de portal para o segmento fígado isquêmico através de um ramo da veia portal, permitindo a entrega hepática direta.

Método de entrega directa segmentos intra-hepática Usando um modelo de rato Liver Hilar Grampo

Aprenda a realizar o clamp hiperinsulinêmico-euglicêmico em ratos conscientes para avaliar a sensibilidade à insulina. Este método permite medir diretamente as taxas de depuração de glicose em níveis fisiológicos elevados de insulina.

Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamp in the Rat Consciente

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