Name: Um Ensaio Slice organotípicas para High-Resolution Imaging Time Lapse de migração neuronal no cérebro pós-natal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: Aprenda a realizar ensaios de fatias organotípicas para imagem time-lapse de alta resolução da migração de neuroblastos no cérebro pós-natal de camundongos. Este método permite visualizar a migração neuronal em tempo real.

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Agradecemos a Dan McWhorter para narrar o protocolo no vídeo. Este trabalho é suportado pelo NIH Grant 5R01NS062182, uma doação da Federação Americana de Investigação em Envelhecimento e fundos institucionais concedido a HTG.

<ol><li>Ghashghaei, H. T., Lai, C., Anton, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+migration+in+the+adult+brain%3A+are+we+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal migration in the adult brain: are we there yet.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8, 141-151 (2007).</li>
<li>Valiente, M., Marin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+migration+mechanisms+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neuronal migration mechanisms in development and disease.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 20, 68-78 (2010).</li>
<li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+neocortex%3A+a+perspective+from+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology.</a> Nat. Rev. Neurosci. 10, 724-735 (2009).</li>
<li>Jaglin, X. H., Chelly, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubulin-related+cortical+dysgeneses%3A+microtubule+dysfunction+underlying+neuronal+migration+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Tubulin-related cortical dysgeneses: microtubule dysfunction underlying neuronal migration defects.</a> Trends Genet. 25, 555-566 (2009).</li>
<li>Carro, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcriptional+network+for+mesenchymal+transformation+of+brain+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The transcriptional network for mesenchymal transformation of brain tumours.</a> Nature. 463, 318-325 (2010).</li>
<li>Wu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directional+guidance+of+neuronal+migration+in+the+olfactory+system+by+the+protein+Slit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Directional guidance of neuronal migration in the olfactory system by the protein Slit.</a> Nature. 400, 331-336 (1999).</li>
<li>Hu, H., Tomasiewicz, H., Magnuson, T., Rutishauser, U., U, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+polysialic+acid+in+migration+of+olfactory+bulb+interneuron+precursors+in+the+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The role of polysialic acid in migration of olfactory bulb interneuron precursors in the subventricular zone.</a> Neuron. 16, 735-743 (1996).</li>
<li>Shapiro, E. M., Gonzalez-Perez, O., Garcia-Verdugo, M. anuel, Alvarez-Buylla, J., &amp, A., Koretsky, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+of+the+migration+of+neuronal+precursors+generated+in+the+adult+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging of the migration of neuronal precursors generated in the adult rodent brain.</a> Neuroimage. , (2006).</li>
<li>Vreys, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+visualization+of+endogenous+neural+progenitor+cell+migration+along+the+RMS+in+the+adult+mouse+brain%3A+validation+of+various+MPIO+labeling+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">MRI visualization of endogenous neural progenitor cell migration along the RMS in the adult mouse brain: validation of various MPIO labeling strategies.</a> Neuroimage. 49, 2094-2103 (2010).</li>
<li>Davenne, M., Custody, C., Charneau, P., Lledo, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+migrating+neurons+in+the+mammalian+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Senses%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of migrating neurons in the mammalian forebrain.</a> Chem. Senses. 30, Suppl 1. 115-116 (2005).</li>
<li>Mirzadeh, Z., Doetsch, F., Sawamoto, K., Wichterle, H., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subventricular+zone+en-face%3A+wholemount+staining+and+ependymal%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal.</a> J. Vis. Exp. , (2010).</li>
<li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche%3A+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li>
<li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li>
<li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Stem+Cells+Confer+Unique+Pinwheel+Architecture+to+the+Ventricular+Surface+in+Neurogenic+Regions+of+the+Adult+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Neural Stem Cells Confer Unique Pinwheel Architecture to the Ventricular Surface in Neurogenic Regions of the Adult Brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li>
<li>Polleux, F. &amp, Ghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+slice+overlay+assay%3A+a+versatile+tool+to+study+the+influence+of+extracellular+signals+on+neuronal%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+STKE%22%5BJournal%5D)">The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal.</a> Sci. STKE. , L9-L9 (2002).</li>
<li>Murase, S. &amp, Horwitz, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deleted+in+colorectal+carcinoma+and+differentially+expressed+integrins+mediate+the+directional+migration+of+neural+precursors+in+the+rostral+migratory+stream%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deleted in colorectal carcinoma and differentially expressed integrins mediate the directional migration of neural precursors in the rostral migratory stream.</a> J. Neurosci. 22, 3568-3579 (2002).</li>
<li>Suzuki, S. O. &amp, Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+cell+populations+in+the+early+postnatal+subventricular+zone+take+distinct+migratory+pathways%3A+a+dynamic+study+of+glial+and+neuronal+progenitor+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration.</a> J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).</li>
<li>Ghashghaei, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+neuregulin-ErbB4+interactions+on+the+proliferation+and+organization+of+cells+in+the+subventricular+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">The role of neuregulin-ErbB4 interactions on the proliferation and organization of cells in the subventricular zone.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103, 1930-1935 (2006).</li>
<li>Khodosevich, K., Seeburg, P. H., Monyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+signaling+pathways+in+migrating+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Major signaling pathways in migrating neuroblasts.</a> Front Mol. Neurosci. 2, 7-7 (2009).</li>
<li>Jacquet, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+neuronal+proliferation%2C+migration+and+differentiation+in+the+postnatal+brain+using+equine+infectious+anemia+virus-based+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors.</a> Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).</li>
</ol>

Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela North Carolina State University e da sua Faculdade de Medicina Veterinária. Não há conflitos de interesse declarados.

Migração neuronal na RMS é um componente essencial da neurogênese pós-natal no bulbo olfatório 1. Migração através do RMS ocorre em um plano tangente à superfície do cérebro. Neuroblastos tangencialmente migração são distintas das células migram radialmente com base na localização de sua fonte progenitor, bem como o destino divergentes de seus produtos finais neuronal 1, 2, 3. A população relativamente pura de células tangencialmente migrando na RMS pós-natal torna esta região anatômica definível u...

um ensaio slice organotípicas para high-resolution imaging time lapse de migração neuronal no cérebro pós-natal

An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain

Neurogênese no cérebro pós-natal depende da manutenção de três eventos biológicos: a proliferação de células progenitoras, a migração dos neuroblastos, bem como diferenciação e integração de novos neurônios em circuitos neurais existentes. Para a neurogênese pós-natal no bulbo olfatório, esses eventos são segregados dentro de três domínios anatomicamente distintas: a proliferação em grande parte ocorre na zona subependimal (ZEE) dos ventrículos laterais, migrando neuroblastos atravessar o fluxo migratório rostral (RMS), e novos neurônios diferenciar e integração dentro do bulbo olfatório (OB). Os três domínios servem como plataformas ideais para estudar os mecanismos celulares, moleculares e fisiológicos que regulam cada um dos eventos biológicos distintamente. Este artigo descreve um ensaio fatia organotípicas otimizado para o tecido cerebral pós-natal, em que as condições extracelular imitam de perto as em ambiente vivo para a migração de neuroblastos. Nós mostramos que o nosso ensaio prevê movimento uniforme, orientado, e rápida de neuroblastos dentro da RMS. Este ensaio será muito adequado para o estudo da regulação celular autónomos e não-autônoma da migração neuronal utilizando cruz-transplante abordagens de ratos em diferentes backgrounds genéticos.

Este protocolo descreve um ensaio fatia organotípicas otimizado para o cérebro pós-natal e imagens de alta resolução de lapso de tempo de migração neuroblastos no fluxo migratório rostral.

Um Ensaio Slice organotípicas para High-Resolution Imaging Time Lapse de migração neuronal no cérebro pós-natal

A neurogênese no cérebro pós-natal depende da manutenção de três eventos biológicos: a proliferação de células progenitoras, a migração de neuroblastos, conforme...

Sou Troy Gasai. Vamos falar sobre um ensaio com fatias organotípicas que foi aperfeiçoado no meu laboratório ao longo dos últimos anos. Ben Jacket, do meu laboratório, mostrará a você como este ensaio é realizado.O ensaio com fatias organotípicas do cérebro pós-natal é um método poderoso para testar diversos fatores e o papel deles na migração neuronal no cérebro pós-natal e na via migratória TRO. Olá, sou Ben Jakay. Sou pesquisador pós-doutorando no laboratório da Dra. Troy GGE no Colegiado de Medicina Veterinária da Universidade Estadual do Norte da Carolina, e estou aqui hoje para mostrar como realizamos transplantes cruzados de tecido entre fatias organotípicas do cérebro de camundongos, com o objetivo de visualizar neuroblastos em migração no cérebro pós-natal.Todas as técnicas descritas neste vídeo devem ser realizadas em um ambiente estéril, preferencialmente em uma cabine de fluxo laminar utilizando instrumentos esterilizados. Uma gota de 150 microlitros de meio para fatias é colocada no centro da parte de vidro, na base do recipiente, com uma seringa descartável equipada com agulha de 23 graus. Vários pontos de cola são colocados fora do círculo da lamínula de vidro, deixando um lado sem cola para permitir a troca de fluido. Uma membrana de poros nucleares é então cuidadosamente colocada sobre o meio com pinça microcirúrgica, garantindo que bolhas de ar não fiquem aprisionadas sob a membrana.A pin&ccedil;a curva &eacute; ent&atilde;o usada para aplainar as gotas de cola e fixar a membrana no lugar. Um mililitro de meio para fatias &eacute; adicionado sobre a membrana, e, por fim, as placas s&atilde;o colocadas em uma incubadora at&eacute; o momento de uso. Os melhores resultados s&atilde;o obtidos quando as fatias s&atilde;o preparadas a partir de camundongos p&oacute;s-natais jovens, do P um ao P dez; primeiramente, a cabe&ccedil;a &eacute; estabilizada segurando-se o focinho com pin&ccedil;as microcir&uacute;rgicas.A pele é excisada longitudinalmente do pescoço até o focinho. O couro cabeludo é destacado para expor o osso, e o crânio é cortado longitudinal e anteriormente, começando na crista sagital, realizando um corte mediano e dois cortes laterais, um em cada lado. Deve-se ter cuidado para minimizar o contato com o tecido cortical subjacente.À medida que as abas cranianas são removidas do cérebro para melhorar a estabilidade do tecido. Durante o corte com vibrotesoura, as regiões laterais e caudais do cérebro são removidas com uma lâmina de barbear. Os dois hemisférios são cuidadosamente retirados do crânio e colocados com a superfície medial voltada para baixo em um molde de inclusão.Eles são imediatamente cobertos com gel de AGA roses a 3% grau DNA derretido, dissolvido em tampão de preparação tecidual mantido a 37 graus Celsius. Após dois minutos de estabilização sobre uma superfície plana e horizontal. Para garantir a solidificação uniforme do AGA roses, as formas são posicionadas sobre gelo para completar a cura.Uma vez que o gel contendo os hemisférios esteja solidificado, ele é removido do molde e aparado ao redor do tecido cerebral. O tecido embutido em gel é então montado no disco de espécime do vibrátomo com a superfície medial voltada para cima e fixado com adesivo de cianoacrilato. O disco é então instalado na bandeja de espécimes do vibrátomo, preenchida com meio de preparação de tecidos gelado, e o cérebro é seccionado com espessura de 150 micrômetros.Uma vez que os fragmentos contendo a ZMS são liberados da lâmina, eles são cuidadosamente recolhidos com uma espátula plana pequena e colocados horizontalmente no centro das placas de cultura. É fundamental que o manuseio dos fragmentos seja mantido no mínimo, pois o tecido é muito frágil. A quantidade de meio nas placas de cultura é ajustada a um nível suficiente para cobrir as secções cerebrais, ao mesmo tempo que evita que elas se movimentem.As lâminas são identificadas e transferidas para uma estufa. Os cérebros de doador são preparados de maneira semelhante à dos cérebros de receptor, exceto pelo fato de que os cortes são feitos com espessura de 250 µm e as fatias são coletadas em gelo.Preparação de tecido frio. Os cortes são imediatamente colocados sob um microscópio estereoscópico com capacidade de fluorescência epiluminescente. A RMS é visível como uma estrutura cinza em forma de U que se estende da zona subependimária até o bulbo olfativo.O SMS é delicadamente microdisssecado usando pinças microcirúrgicas. Uma pinça é usada para estabilizar a fatia enquanto a outra é utilizada para fazer pequenos cortes ao redor do SMS até que ele seja liberado da fatia. O SMS excisado é então cortado em pequenos explantes de aproximadamente 200 a 500 micrômetros de diâmetro.Neste exemplo, os "explanos" de berinjela são preparados a partir de camundongos que expressam a proteína fluorescente vermelha TD-tomate. As placas inferiores contendo fatias de hospedeiro são retiradas do incubador e colocadas sob o microscópio estereoscópico utilizando luz visível. Uma pequena incisão é feita no segmento inicial da RMS e, com uma pipeta equipada com ponteira de 20 microlitros, um único explante de RMS doador é transferido para o local incisado na RMS do hospedeiro.O explante é suavemente empurrado para dentro da incisão para estabelecer o contato entre os dois tecidos. Para garantir que esse contato seja estável, os explantes são empurrados levemente entre a fatia e a membrana pobre em núcleos. Em seguida, as placas são devolvidas ao incubador por pelo menos uma hora para permitir que as seções assentem sobre a membrana.O neuroblasto deve começar a migrar do explante para a RMS do hospedeiro após aproximadamente uma a duas horas. A migração celular é melhor visualizada utilizando objetivas de 20 vezes com distância de trabalho extra longa. Os tecidos cultivados são transferidos do incubador para uma câmara aquecida no microscópio.Neuroblastos fluorescentes podem ser imagiados em intervalos que variam de zero a 10 minutos, dependendo do tipo de análise desejada. Nosso protocolo de cultura de fatias orgânicas típicas foi amplamente testado e otimizado nos últimos anos quanto à consistência no padrão e orientação da migração na RMS. Neste exemplo, a análise de células que imigram a partir do explante, obtido de camundongos nos quais o TD-tomate é expresso sob o promotor nestina, revela migração altamente orientada e rápida para dentro da RMS do hospedeiro.Alta ampliação. A análise de lapso de tempo mostra excelente resolução de todo o comprimento de um neuroblasto migratório durante uma sessão de imageamento de 20 minutos. Após a conclusão do imageamento, as fatias podem ser fixadas com paraformaldeído a 4%, recém-preparado e gelado, e submetidas à imuno-histoquímica para diferentes componentes do fluxo de migração.Neste caso, astrócitos positivos para GFAP em azul e vasos sanguíneos positivos para CD31 em verde são revelados por meio de imunohistoquímica fluorescente; a análise em alta magnificação de cortes corados para as proteínas do citoesqueleto actina em azul e tubulina em verde revela expressão não uniforme desses componentes por uma célula em plena migração. Nosso protocolo apresenta alguns desafios que exigem paciência, prática e dedicação de tempo tanto para a preparação quanto para a análise dos seus resultados.Aqui estão algumas sugestões úteis que ajudarão você a obter os melhores resultados em seus experimentos. Em nossa experiência, camundongos na faixa etária de P1 a P10 fornecem os melhores resultados. O emparelhamento etário entre cérebros de doador e receptor também melhora a reprodutibilidade dos experimentos.Como a maioria dos reagentes e placas de cultura precisa ser preparada recentemente, nosso ensaio com fatias exige várias horas de preparação e aquisição de imagens ininterruptas em um único dia. Assim que os cérebros forem coletados, os passos subsequentes devem ser realizados o mais rapidamente possível. Entre a decapitação e o preparo das fatias, todos os procedimentos devem ser feitos com gelo, reagentes frios, e a manipulação do tecido deve ser mantida no mínimo para evitar perturbações anatômicas.As ferramentas utilizadas para essas dissecações devem ser estéreis e reservadas exclusivamente para manipulações de tecidos vivos. Nunca utilize ferramentas que tenham entrado em contato com fixadores como o formaldeído. Os fragmentos geralmente permanecem viáveis por até 36 horas, com declínio visível na migração, velocidade e orientação entre 24 e 36 horas.Atente-se a esta limitação ao planejar seus experimentos e análises.

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JoVE Journal

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Neurociência

Nós apresentamos um método para preparar fatias organotípicas de embriões meados de gestação do rato para a imagem de cultivo e de lapso de tempo de crescimento dos nervos periféricos.

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Um método para gerar fatias organotípicas da E12.5 mesencéfalo embrionário murino é descrito. As culturas fatia organotípicas pode ser usado para observar o comportamento de neurônios dopaminérgicos ou outros neurônios do mesencéfalo ventral.

Organotípicas culturas de mesencéfalo ventral Slice Embrionárias: Um Sistema para o Estudo de Desenvolvimento Neuronal dopaminérgicos In vitro</em

Imagem tecido embrionário em tempo real, é um desafio durante longos períodos de tempo. Aqui nós apresentamos um ensaio para o monitoramento das alterações celulares e sub-celular na medula espinhal pinto por longos períodos com resolução espacial e temporal. Esta técnica pode ser adaptado para outras regiões do sistema nervoso e embrião em desenvolvimento.

De alta resolução de imagem ao vivo de comportamento de células no desenvolvimento neuroepitélio

Nós descrevemos um protocolo em tempo real videoimaging da migração neuronal no cérebro anterior mouse. A migração de viralmente etiquetados ou enxertado precursores neuronais foi gravado em fatias agudas vivo usando largo campo de imagem fluorescente, com um intervalo de aquisição relativamente rápida para estudar as diferentes fases da migração de células, incluindo as durações das fases estacionária e de migração e da velocidade da migração.

Lapso de tempo de imagem de migração neuroblastos em fatias agudas do cérebro anterior Rato Adulto

Source:&lt;a style='text-decoration:none;' href='https://dx.doi.org/10.3791/55886-v'&gt; Wiegreffe, C., et. al.,  Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Using In Utero Electroporation. J. Vis. Exp. (2017) Este vídeo demonstra a microscopia confocal de lapso de tempo para observar a migração radial do neurônio cortical da zona subventricular para a placa cortical por meio de andaimes gliais radiais em fatias de cérebro embrionário de...

Imagem de lapso de tempo da migração radial de neurônios corticais em fatias de cérebro embrionário de camundongo transduzidas

Migração neuroblastos é um evento fundamental para a neurogênese pós-natal. Nós descrevemos um protocolo para a rotulagem eficiente de neuroblastos por eletroporação in vivo pós-natal e visualização posterior de sua migração utilizando time-lapse de imagens de fatias cerebrais agudas. Nós incluímos uma descrição para a análise quantitativa da dinâmica neuroblastos por rastreamento de vídeo.

In vivo Eletroporação pós-natal e tempo-lapso de neuroblasto Migração na aguda fatias do cérebro do rato

Este protocolo fornece instruções para a observação direta de neurônios corticais que migram radialmente. A eletroporação in utero , a cultura de fatia organotípica e a imagem confocal de lapso de tempo são combinadas para estudar de forma direta e dinâmica os efeitos da sobre-expressão ou downregulation de genes de interesse em neurônios migratórios e analisar sua diferenciação durante o desenvolvimento.

Imaginação confocal de lapso de tempo de neurônios migratórios na cultura de fatias organotípicas do cérebro de mouse embrionário Usando<em&gt; Em Utero</em&gt; Electroporação

Aqui, nós fornecemos um método confiável e de baixo custo para gerar electroporated culturas do cérebro organotypic fatia de embriões do rato apropriados para microscopia confocal e técnicas de geração de imagens ao vivo.

Ex Utero Eletroporação e culturas Organotypic fatia do cérebro embrionário Mouse para imagens ao vivo de migração gabaérgica interneurônios

Este protocolo demonstra um método simples e robusto para estudar na dinâmica do cone de crescimento e crescimento do axônio. Ele descreve como preparar ex vivo fisiologicamente relevantes fatias cerebrais agudas e fornece um pipeline de análise amigável.

In situ Visualização da Dinâmica do Cone de Crescimento e Crescimento do Axon em Culturas agudas de fatias de cérebro embrionário ex vivo

Durante o desenvolvimento do córtex cerebral, os neurônios e as células gliais se originam na zona ventricular que reveste o ventrículo e migram em direção à superfície do cérebro. Muitos genes estão envolvidos neste processo. Este protocolo apresenta a técnica para a imagem de lapso de tempo de neurônios migratórios e progenitores gliais.

Imagem de lapso de tempo de neurônios migratórios e progenitores gliais em fatias de cérebro de camundongo embrionário

Aprenda a realizar ensaios de fatias organotípicas para imagem time-lapse de alta resolução da migração de neuroblastos no cérebro pós-natal de camundongos. Este método permite visualizar a migração neuronal em tempo real.

Um Ensaio Slice organotípicas para High-Resolution Imaging Time Lapse de migração neuronal no cérebro pós-natal

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