Name: Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Aprenda a aplicar resina dental fotopolimerizável para fixar eletrodos ou sondas de microdialise em experimentos crônicos. Este método permite adesão direta ao crânio, eliminando parafusos e reduzindo inflamações.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos aos nossos colegas em RIKEN-BSI para os seus apoios e conselhos gentilmente frutífera durante este trabalho. Eu gostaria de expressar minha sincera gratidão ao Professor Shigemi Mori, Professor G bor Juh sz, os drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi que me aconselhou a estudar o método de microdiálise durante o curso de pós-graduação na Universidade de Pós-Graduação de Estudos Avançados, Japão. Finalmente, agradecemos o Sr. Dr. Chris Sarnecky e Akitsugu Takasu para os seus apoios em gravação de vídeo.

Etapa 1. Preparação de implantação da sonda <ol><li> Anestesia (não mostrado no vídeo) Anestesiar cada ave com uma injeção de um interperitoneal ketamina (12,5 peso corporal mg / kg) ea mistura de xilazina (25 mg / kg) para produzir um nível constante de anestesia cirúrgica. </li><li> Fix uma cabeça a um quadro estereotáxico Use Xylocaine (TM) de geléia para reduzir as dores locais de pressão bares orelha &#39;. A cabeça de pássaro é fixado em um aparelho estereotáxico consistindo de barras de ouvido e um suporte de bico que mantém a cabeça em um ângulo de 45 °. Durante a cirurgia estereotáxica para implantação, aquecer o corpo de ave por pad cirúrgica com controle térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Desinfectar área cirúrgica Desinfectar o campo cirúrgico com isodine (TM) antes da cirurgia. </li></ol> Etapa 2. Posicionamento estereotáxica <ol><li> Alinhamento ponto de referência Alinhar sonda dummy (vidro micropipeta) para o Lambda (Y-ponto) e marca Y-ponto com a pipeta dye-cheia. Restantes Dextran-TMR do estudo tracer última foi usado no vídeo. </li><li> Incisão da pele Retire a pele e expor a superfície do crânio. Então, limpar a superfície do crânio com cotonetes. </li><li> Posicionamento da cânula dummy (na direção horizontal) Mover a cânula dummy para o site de destino (AP eixo e coordenação Lateral) </li><li> Craniotomia pequena e incisão da dura-máter. Use uma pinça fina para craniotomia e uma agulha de injeção fina (30 G) para incisões da dura-máter. Então, limpar a superfície do crânio. </li><li> Posicionamento final (implantação) da cânula dummy Localize a ponta da cânula guia em 0,30 mm acima da sonda de microdiálise destina-região de destino. Por fim, limpar a superfície do crânio de novo, porque uma superfície limpa e seca é necessária para a ligação difícil. </li></ol> Etapa 3. Pré-tratamento da superfície craniana (O procedimento semelhante para &quot;restauração direta enchimento&quot; do produto dental deve ser empregada.) <ol><li> Tratamento primário <ol><li> Mix líquido PRIMAR A com B em um prato. </li><li> Aplique a mistura sobre a superfície do crânio com uma pequena escova. </li><li> Deixe descansar por 30 segundos. </li><li> Seco com fluxo de ar suave. (Não lavar.) </li></ol></li><li> Aplicação do agente de união <ol><li> Aplicar o agente de união na superfície do crânio com uma pequena escova. </li><li> Aplicar um fluxo de ar suave. (Não lavar.) </li><li> Luz cura por 20 segundos. </li></ol></li></ol> Etapa 4. Montagem de resina composta <ol><li> Montagem de resina com plugger planície Se um plugger Plain não estiver disponível, uma espátula de micro-pode ser usado em seu lugar. </li><li> Fotopolimerização </li><li> Incremental de montagem Incremental de montagem é recomendada para garantir a reação completa da resina. Para a montagem incremental, aplicar agente de união antes de cada montagem. </li><li> Moldar a resina composta e fotopolimerizador para endurecimento final. </li><li> Final da cirurgia </li></ol> Limpar a área cirúrgica, aplicar antibiótico (gentamicina pomada), e remover o animal da chama estereotáxica. Então, manter o animal em uma câmara de termo-controlada (temperatura = 33-35 ° C) para recuperação pós-anestésica. Conforme mostrado no vídeo, nem qualquer comportamento anormal foi observado em nenhum dos animais no dia seguinte após a cirurgia.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Experimentos foram realizados em conformidade com as orientações para a experimentação animal do cérebro Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e animal do instituto comitê de ética aprovado.

Em comparação com a aplicação de resinas acrílicas convencionais auto cura, a técnica introduzida tem várias vantagens importantes: 1. Ligação direta: Acrílica auto-cura pode ser conectado ao osso por um tempo mas não adere ao osso. Portanto, os parafusos de fixação são necessários para corrigir uma base de montagem (ver Figura 2a). Em contraste, a resina de cura pela luz pode vínculo até o osso diretamente de modo parafusos não são necessários (Figura 2B). Portanto, o tamanho da base de montagem pode ser reduzido cons...

1A fotografia mostra sonda de microdiálise (a), um tampão (b) e uma cânula guia (c). Nesta foto, a cânula guia é cercado por resina dental que adere ao crânio diretamente. Foto B mostra um pássaro durante a perfusão de drogas. No topo da cabeça, há uma sonda de microdiálise que é conectado a um tubo tefron bem. Barra de escala = 1 cm para A e 2 cm de B, respectivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Fotografias de uma sonda de microdiálise (A) e um pássaro durante a perfusão de drogas (B)

aplicação de light-resina adesivo dental para eletrodos de montagem ou sondas microdiálise em experimentos crônica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Em experimentos de gravação crônica, auto-cura dental resinas acrílicas têm sido usados ​​como uma base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise-. Uma vez que estes não acrílicos vínculo até o osso, parafusos têm sido usados ​​como âncoras. No entanto, em pequenos animais experimentais como tentilhões ou mouse, seus crânios são muito frágeis e não podem realizar com sucesso as âncoras. Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio. Portanto, parafusos de âncora não são necessários e campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. Experiências passadas mostram que o efeito de ligação mantém mais de 2 meses. Janela de resina convencional de tempo, quando os materiais são maleáveis ​​e viável é de alguns minutos. No entanto, a janela do tempo de trabalho para estes adesivos dentais é significativamente mais larga e ajustável.

Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio.

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

Em experimentos de registro crônico, resinas acrílicas odontológicas de autocura têm sido utilizadas como base de fixação de eletrodos ou sondas de microdiálise. Uma vez que estas...

Em experimentos crônicos de eletrofisiologia ou microdiálise, resinas dentárias autopolimerizáveis têm sido amplamente utilizadas como base de montagem para eletrodos ou sondas de microdiálise. Como essas acrílicas não aderem à superfície óssea, parafusos têm sido usados como âncoras. No entanto, em animais experimentais pequenos, como FIEs ou camundongos, o crânio é muito frágil e não consegue reter com sucesso os parafusos.Às vezes, esses parafusos de tornozelo causam infecção e inflamação do tecido. Neste relato, propomos uma nova aplicação de resina dental de cura direita como sua base de sustentação. Esse material permite ligação direta ao crânio.Portanto, parafusos de ancoragem não são necessários e o campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. O peso total de uma sonda, uma cânula guia, um gabinete e uma base de montagem era inferior a um grama. Experiências anteriores mostram que o efeito da ligação se mantém por mais de dois meses.Essa técnica também pode ser utilizada com outros animais experimentais, como camundongos, peixes, entre outros. Duas implementações em duas barras foram gravadas em vídeo. Nesta demonstração em vídeo, a melhor tomada em cada etapa do protocolo foi selecionada e utilizada.Estes são estereotáxicos separados e câmara de recuperação controlada por verão. Estes são cem instrumentos para cirurgia. Primeiro PR à esquerda e micro problema.Seus acessórios estão à direita. Se um programa primário não estiver disponível, pode-se usar uma espátula micro em seu lugar. Este é um conjunto de resina dental de cura direita.O primer AP e um agente de união foram armazenados nestes frascos de medicamento. Escolhemos este produto porque é um sistema autoreticulável e de dupla cura. Se optar por alternativas, modifique o procedimento detalhado de acordo com as instruções do produto; o instrumento com formato semelhante a uma pistola, no lado esquerdo, é uma unidade de cura visível.Você pode montar uma unidade de luz LED artesanal conforme mostrado à direita. Consulte a documentação para obter detalhes. A anestesia cirúrgica foi induzida e, posteriormente, a área cirúrgica foi removida e a cabeça foi fixada ao estereotáxico.Antes da inserção das EAVs, o dano DI foi aplicado nas pontas das EAVs para prevenir dor. A cabeça do animal foi fixada ao quadro e o ângulo da cabeça foi ajustado adequadamente. O campo cirúrgico foi desinfetado com iodo, e uma micropipeta de grama foi fixada no porta-eletrodo.Esta micropipeta foi utilizada para estabelecer um ponto de referência em um experimento ruim. O ponto Lambda Y foi usado como ponto de referência. Foi feita uma pequena incisão na pele para expor o ponto de referência.Marque o local com uma micropipeta de vidro preenchida com um corante. Corte a pele para expor a superfície craniana e limpe a superfície do osso com um cotonete para eliminar sangue e umidade. Uma superfície verde e seca é necessária para uma ligação resistente.Após identificar a posição-alvo para marcação, uma pequena craniotomia foi realizada com pinça fina. Também é possível utilizar microperfurador ou pinça óssea para realizar a craniotomia. Em seguida, o microtubo grosso foi removido de um suporte e a cânula ou eletrodo foi fixado ao suporte.A ponta da cânula guia foi alinhada ao ponto de referência e então cuidadosamente movida até o ponto-alvo. A menor incisão no tecido cerebral foi feita com uma agulha de injeção de calibre 30. A cânula guia foi movida para a posição-alvo.A segunda etapa de preparação da superfície óssea foi a aplicação do Supp. Este primer é composto pelas partes A e B. Uma gota de cada componente foi colocada em um recipiente e misturada com um pincel, aplicando-se então o primer na área de contato. A superfície da cânula guia também foi esfregada com o primer.Uma leve corrente de ar foi fornecida para espalhar e secar o primer, troque o pincel e aplique um agente de ligação na área. Esse agente de ligação é sensível à luz, portanto deve ser protegido durante o procedimento. A superfície da cânula guia também foi limpa com cotonete.O ar suave foi fornecido e a luz azul visível foi eliminada para acelerar a reação química do agente de ligação. Sementes transparentes de Coral Laranja devem ser usadas para proteger os olhos do operador. Os olhos dos animais não devem receber iluminação direta, se necessário.Um orifício de alumínio é usado para proteger os olhos dos animais. Uma pequena quantidade de resina composta foi aplicada na superfície craniana e na cânula-guia com um tampão liso. Em seguida, a luz azul visível foi eliminada para polimerizar a resina durante a montagem progressiva.Um agente de ligação foi aplicado antes de cada montagem. A área cirúrgica foi corrigida continuamente devido à gravação em vídeo. No entanto, é melhor evitar uma correção intensa, pois isso pode encurtar a janela de tempo em que os materiais são capazes.A montagem progressiva e a correção são recomendáveis para garantir a reação completa do regime. Você pode reformar a forma até que fique visível. Foram administrados antibióticos ou foi aplicado mentol na área cirúrgica para prevenir infecções.Agora que a cirurgia foi concluída, o adaptador estereotáxico foi solto do porta-eletrodo. O adaptador estereotáxico foi removido. Em vez disso, foi inserida uma haste DAMing e o animal foi liberado do aparelho estereotáxico.Finalmente, o animal foi transferido para a câmara de controle de verão para recuperação da anestesia. Foi no dia seguinte à cirurgia em comparação com a aplicação de auto-curável convencional. S. A técnica introduzida apresenta várias vantagens importantes.Primeiro, ele se liga diretamente ao osso. O acrílico autopolimerizável pode ser fixado ao osso com arame, mas não adere ao osso. Em contraste, o acrílico fotopolimerizável pode se ligar diretamente ao osso.Ele também adere a alguns materiais, incluindo plástico e metais, se você usar uma base metálica com ele. Essa característica de ligação a materiais variáveis permite uma ampla gama de aplicações. Em segundo lugar, o tempo de processamento convencional da resina é relativamente curto, o que facilita o manuseio.Em poucos minutos, apresenta alta fluidez e não é fácil de manipular rapidamente. No entanto, uma vez iniciada a reação química, a reação é acelerada pelo calor exotérmico. O calor e a resina endurecem em pouco tempo.As janelas de tempo de processamento para a resina de cura correta são significativamente mais amplas e ajustáveis. Basicamente, as resinas permanecem constantes desde o início até o momento em que estão corretas. A terceira reação curada não gera calor.A reação de cura da resina autopolimerizável é exotérmica. Quando a base de montagem é espessa, esse calor se acumula e causa danos. A reação tecidual da resina fotopolimerizável não gera calor e o material é biocompatível.O custo dos materiais e equipamentos especiais, como a unidade de luz, pode ser um problema. No documento suplementar, apresentamos uma unidade de luz LED feita à mão que não custa muito. Documento bastante rápido com detalhes.Esta técnica é aplicável à implantação de eletrodos ou microsondas em outros animais experimentais, como peixes, camundongos, coelhos, gatos e macacos.

application-light-cured-dental-adhesive-resin-for-mounting-electrodes

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O vídeo demonstra um procedimento para implantar uma unidade de eletrodo multicanal bidirecional sem fio em um cérebro de rato para gravar e estimular redes neurais multicanal.

Implantando um sistema de microeletrodo bidirecional sem fio em um cérebro de rato

As técnicas tradicionais de fixação da cabeça usaram armações metálicas presas ao crânio como interface para aparelhos de fixação da cabeça. Este protocolo demonstra uma técnica de fixação de cabeça baseada em moldagem de resina acrílica sem moldura para tarefas comportamentais em roedores.

Cabeça de base acrílica Resina de moldagem técnica de fixação em roedores

Um corante raciométrica sensível ao pH é utilizado em combinação com a microscopia de varrimento a laser confocal e análise de imagem digital para monitorar o pH extracelular em biofilmes dentários em tempo real.

Imagem raciométrica de pH extracelular no biofilme dentário

Apresentamos métodos para a construção de eletrodos para registrar simultaneamente a atividade neural extracelular e liberar múltiplas substâncias neuroativas nas proximidades dos locais de registro em camundongos acordados. Esta técnica permite a análise detalhada de entradas sinápticas locais putativas para o neurônio de interesse.

Extracelular Gravação de Neuronal Atividade Combinado com Microiontophoretic aplicação de substâncias neuroativos em Ratos Awake

Os microeletrodos afiados permitem a caracterização eletrofisiológica precisa da saída de fotorreceptores e interneurônios visuais em Drosophila viva. Aqui, mostramos como usar esse método para registrar respostas de voltagem de alta qualidade de células individuais à estimulação de luz controlada. Este método é ideal para estudar o processamento de informações neurais em olhos compostos de insetos.

Método eletrofisiológico para respostas gravação intracelular de tensão<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorreceptores e Interneurônios à luz Estímulos<em&gt; In Vivo</em

Neste estudo, a metodologia é apresentada sobre como realizar gravações eletrofisiológicas in vivo multi-site a partir da via hiperdiretiva sob anestesia com uretano.

Agudo<em&gt; In Vivo</em&gt; Gravações eletrofisiológicas de Potenciais de campo locais e atividade de múltiplas unidades a partir do caminho hiperdiretivo em ratos anestesiados

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

Este protocolo descreve um procedimento para a construção de matrizes de microeletrodos de fibra de carbono para gravações eletrofisiológicas in vivo crônicas e agudas em camundongos (Mus musculus) e furão(Mustela putorius furo) de múltiplas regiões cerebrais. Cada passo, após a compra de fibras de carbono bruto para implantação de matriz de microeletrodos, é descrito em detalhes, com ênfase na construção de matriz de microeletrodos.

Construção e Implementação de Matrizes de Microeletrodos de Fibra de Carbono para Gravações In Vivo Crônicas e Agudas

Aqui, apresentamos um sistema de implante de sonda leve e econômico para eletrofisiologia crônica em roedores otimizado para facilidade de uso, recuperação de sonda, versatilidade experimental e compatibilidade com o comportamento.

O implante DREAM: um sistema de implante leve, modular e econômico para eletrofisiologia crônica em camundongos com cabeça fixa e comportamento livre

Desenvolvemos uma abordagem simplificada e econômica para a fabricação de eletrodos e realizamos gravações de sinais em várias regiões em camundongos em movimento livre. A utilização da optogenética, juntamente com a eletrofisiologia multirregional e o registro do sinal de cálcio, permitiu a revelação de atividades neuronais em todas as regiões do modelo de acendimento de convulsões.

Um método integrado para criar otérios eletrofisiológicos flexíveis e convenientes para gravação in vivo em várias regiões

Este protocolo descreve um método cirúrgico em duas fases para criar uma grande janela craniana revedável e preservadora da dura-máter em camundongos. Essa técnica permite registros eletrofisiológicos crônicos e multimodais a partir de redes transmissas profundas do cérebro, como a Rede de Modos Padrão, ao longo de várias semanas.

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

Aprenda a aplicar resina dental fotopolimerizável para fixar eletrodos ou sondas de microdialise em experimentos crônicos. Este método permite adesão direta ao crânio, eliminando parafusos e reduzindo inflamações.

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

Explorar mais vídeos