Name: Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Aprenda a aplicar resina dental fotopolimerizável para fixar eletrodos ou sondas de microdialise em experimentos crônicos. Este método permite adesão direta ao crânio, eliminando parafusos e reduzindo inflamações.

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Agradecemos aos nossos colegas em RIKEN-BSI para os seus apoios e conselhos gentilmente frutífera durante este trabalho. Eu gostaria de expressar minha sincera gratidão ao Professor Shigemi Mori, Professor G bor Juh sz, os drs. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK kesi e rp d Dobolyi que me aconselhou a estudar o método de microdiálise durante o curso de pós-graduação na Universidade de Pós-Graduação de Estudos Avançados, Japão. Finalmente, agradecemos o Sr. Dr. Chris Sarnecky e Akitsugu Takasu para os seus apoios em gravação de vídeo.

Etapa 1. Preparação de implantação da sonda <ol><li> Anestesia (não mostrado no vídeo) Anestesiar cada ave com uma injeção de um interperitoneal ketamina (12,5 peso corporal mg / kg) ea mistura de xilazina (25 mg / kg) para produzir um nível constante de anestesia cirúrgica. </li><li> Fix uma cabeça a um quadro estereotáxico Use Xylocaine (TM) de geléia para reduzir as dores locais de pressão bares orelha &#39;. A cabeça de pássaro é fixado em um aparelho estereotáxico consistindo de barras de ouvido e um suporte de bico que mantém a cabeça em um ângulo de 45 °. Durante a cirurgia estereotáxica para implantação, aquecer o corpo de ave por pad cirúrgica com controle térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Desinfectar área cirúrgica Desinfectar o campo cirúrgico com isodine (TM) antes da cirurgia. </li></ol> Etapa 2. Posicionamento estereotáxica <ol><li> Alinhamento ponto de referência Alinhar sonda dummy (vidro micropipeta) para o Lambda (Y-ponto) e marca Y-ponto com a pipeta dye-cheia. Restantes Dextran-TMR do estudo tracer última foi usado no vídeo. </li><li> Incisão da pele Retire a pele e expor a superfície do crânio. Então, limpar a superfície do crânio com cotonetes. </li><li> Posicionamento da cânula dummy (na direção horizontal) Mover a cânula dummy para o site de destino (AP eixo e coordenação Lateral) </li><li> Craniotomia pequena e incisão da dura-máter. Use uma pinça fina para craniotomia e uma agulha de injeção fina (30 G) para incisões da dura-máter. Então, limpar a superfície do crânio. </li><li> Posicionamento final (implantação) da cânula dummy Localize a ponta da cânula guia em 0,30 mm acima da sonda de microdiálise destina-região de destino. Por fim, limpar a superfície do crânio de novo, porque uma superfície limpa e seca é necessária para a ligação difícil. </li></ol> Etapa 3. Pré-tratamento da superfície craniana (O procedimento semelhante para &quot;restauração direta enchimento&quot; do produto dental deve ser empregada.) <ol><li> Tratamento primário <ol><li> Mix líquido PRIMAR A com B em um prato. </li><li> Aplique a mistura sobre a superfície do crânio com uma pequena escova. </li><li> Deixe descansar por 30 segundos. </li><li> Seco com fluxo de ar suave. (Não lavar.) </li></ol></li><li> Aplicação do agente de união <ol><li> Aplicar o agente de união na superfície do crânio com uma pequena escova. </li><li> Aplicar um fluxo de ar suave. (Não lavar.) </li><li> Luz cura por 20 segundos. </li></ol></li></ol> Etapa 4. Montagem de resina composta <ol><li> Montagem de resina com plugger planície Se um plugger Plain não estiver disponível, uma espátula de micro-pode ser usado em seu lugar. </li><li> Fotopolimerização </li><li> Incremental de montagem Incremental de montagem é recomendada para garantir a reação completa da resina. Para a montagem incremental, aplicar agente de união antes de cada montagem. </li><li> Moldar a resina composta e fotopolimerizador para endurecimento final. </li><li> Final da cirurgia </li></ol> Limpar a área cirúrgica, aplicar antibiótico (gentamicina pomada), e remover o animal da chama estereotáxica. Então, manter o animal em uma câmara de termo-controlada (temperatura = 33-35 ° C) para recuperação pós-anestésica. Conforme mostrado no vídeo, nem qualquer comportamento anormal foi observado em nenhum dos animais no dia seguinte após a cirurgia.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Experimentos foram realizados em conformidade com as orientações para a experimentação animal do cérebro Science Institute, RIKEN (RIKEN-BSI) e animal do instituto comitê de ética aprovado.

Em comparação com a aplicação de resinas acrílicas convencionais auto cura, a técnica introduzida tem várias vantagens importantes: 1. Ligação direta: Acrílica auto-cura pode ser conectado ao osso por um tempo mas não adere ao osso. Portanto, os parafusos de fixação são necessários para corrigir uma base de montagem (ver Figura 2a). Em contraste, a resina de cura pela luz pode vínculo até o osso diretamente de modo parafusos não são necessários (Figura 2B). Portanto, o tamanho da base de montagem pode ser reduzido cons...

1A fotografia mostra sonda de microdiálise (a), um tampão (b) e uma cânula guia (c). Nesta foto, a cânula guia é cercado por resina dental que adere ao crânio diretamente. Foto B mostra um pássaro durante a perfusão de drogas. No topo da cabeça, há uma sonda de microdiálise que é conectado a um tubo tefron bem. Barra de escala = 1 cm para A e 2 cm de B, respectivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Fotografias de uma sonda de microdiálise (A) e um pássaro durante a perfusão de drogas (B)

aplicação de light-resina adesivo dental para eletrodos de montagem ou sondas microdiálise em experimentos crônica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Em experimentos de gravação crônica, auto-cura dental resinas acrílicas têm sido usados ​​como uma base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise-. Uma vez que estes não acrílicos vínculo até o osso, parafusos têm sido usados ​​como âncoras. No entanto, em pequenos animais experimentais como tentilhões ou mouse, seus crânios são muito frágeis e não podem realizar com sucesso as âncoras. Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio. Portanto, parafusos de âncora não são necessários e campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. Experiências passadas mostram que o efeito de ligação mantém mais de 2 meses. Janela de resina convencional de tempo, quando os materiais são maleáveis ​​e viável é de alguns minutos. No entanto, a janela do tempo de trabalho para estes adesivos dentais é significativamente mais larga e ajustável.

Neste relatório, propomos uma nova aplicação de luz de cura dental para as resinas base de montagem de eletrodos ou sondas de microdiálise em experimentos crônica. Este material permite a ligação directa ao crânio.

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

Em experimentos de registro crônico, resinas acrílicas odontológicas de autocura têm sido utilizadas como base de fixação de eletrodos ou sondas de microdiálise. Uma vez que estas...

Em experimentos crônicos de eletrofisiologia ou microdiálise, resinas dentárias autopolimerizáveis têm sido amplamente utilizadas como base de montagem para eletrodos ou sondas de microdiálise. Como essas acrílicas não aderem à superfície óssea, parafusos têm sido usados como âncoras. No entanto, em animais experimentais pequenos, como FIEs ou camundongos, o crânio é muito frágil e não consegue reter com sucesso os parafusos.Às vezes, esses parafusos de tornozelo causam infecção e inflamação do tecido. Neste relato, propomos uma nova aplicação de resina dental de cura direita como sua base de sustentação. Esse material permite ligação direta ao crânio.Portanto, parafusos de ancoragem não são necessários e o campo cirúrgico pode ser reduzido consideravelmente. O peso total de uma sonda, uma cânula guia, um gabinete e uma base de montagem era inferior a um grama. Experiências anteriores mostram que o efeito da ligação se mantém por mais de dois meses.Essa técnica também pode ser utilizada com outros animais experimentais, como camundongos, peixes, entre outros. Duas implementações em duas barras foram gravadas em vídeo. Nesta demonstração em vídeo, a melhor tomada em cada etapa do pr

application-light-cured-dental-adhesive-resin-for-mounting-electrodes

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O vídeo demonstra um procedimento para implantar uma unidade de eletrodo multicanal bidirecional sem fio em um cérebro de rato para gravar e estimular redes neurais multicanal.

Implantando um sistema de microeletrodo bidirecional sem fio em um cérebro de rato

As técnicas tradicionais de fixação da cabeça usaram armações metálicas presas ao crânio como interface para aparelhos de fixação da cabeça. Este protocolo demonstra uma técnica de fixação de cabeça baseada em moldagem de resina acrílica sem moldura para tarefas comportamentais em roedores.

Cabeça de base acrílica Resina de moldagem técnica de fixação em roedores

Um corante raciométrica sensível ao pH é utilizado em combinação com a microscopia de varrimento a laser confocal e análise de imagem digital para monitorar o pH extracelular em biofilmes dentários em tempo real.

Imagem raciométrica de pH extracelular no biofilme dentário

Apresentamos métodos para a construção de eletrodos para registrar simultaneamente a atividade neural extracelular e liberar múltiplas substâncias neuroativas nas proximidades dos locais de registro em camundongos acordados. Esta técnica permite a análise detalhada de entradas sinápticas locais putativas para o neurônio de interesse.

Extracelular Gravação de Neuronal Atividade Combinado com Microiontophoretic aplicação de substâncias neuroativos em Ratos Awake

Os microeletrodos afiados permitem a caracterização eletrofisiológica precisa da saída de fotorreceptores e interneurônios visuais em Drosophila viva. Aqui, mostramos como usar esse método para registrar respostas de voltagem de alta qualidade de células individuais à estimulação de luz controlada. Este método é ideal para estudar o processamento de informações neurais em olhos compostos de insetos.

Método eletrofisiológico para respostas gravação intracelular de tensão<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorreceptores e Interneurônios à luz Estímulos<em&gt; In Vivo</em

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

O encolhimento do cimento dentário durante a cura desloca a placa de base. Este protocolo minimiza o problema, criando uma base inicial do cimento dentário que deixa espaço para cimentar a placa de base. Semanas depois, a placa de base pode ser cimentada em posição neste andaime usando pouco cimento novo, reduzindo assim o encolhimento.

Usando Baseplating e um Miniscópio Pré-ancorado com uma Lente Objetiva para Pesquisa Transiente de Cálcio em Camundongos

Este protocolo descreve um procedimento para a construção de matrizes de microeletrodos de fibra de carbono para gravações eletrofisiológicas in vivo crônicas e agudas em camundongos (Mus musculus) e furão(Mustela putorius furo) de múltiplas regiões cerebrais. Cada passo, após a compra de fibras de carbono bruto para implantação de matriz de microeletrodos, é descrito em detalhes, com ênfase na construção de matriz de microeletrodos.

Construção e Implementação de Matrizes de Microeletrodos de Fibra de Carbono para Gravações In Vivo Crônicas e Agudas

Aqui, apresentamos um sistema de implante de sonda leve e econômico para eletrofisiologia crônica em roedores otimizado para facilidade de uso, recuperação de sonda, versatilidade experimental e compatibilidade com o comportamento.

O implante DREAM: um sistema de implante leve, modular e econômico para eletrofisiologia crônica em camundongos com cabeça fixa e comportamento livre

Desenvolvemos uma abordagem simplificada e econômica para a fabricação de eletrodos e realizamos gravações de sinais em várias regiões em camundongos em movimento livre. A utilização da optogenética, juntamente com a eletrofisiologia multirregional e o registro do sinal de cálcio, permitiu a revelação de atividades neuronais em todas as regiões do modelo de acendimento de convulsões.

Um método integrado para criar otérios eletrofisiológicos flexíveis e convenientes para gravação in vivo em várias regiões

Este protocolo descreve um método cirúrgico em duas fases para criar uma grande janela craniana revedável e preservadora da dura-máter em camundongos. Essa técnica permite registros eletrofisiológicos crônicos e multimodais a partir de redes transmissas profundas do cérebro, como a Rede de Modos Padrão, ao longo de várias semanas.

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

Aprenda a aplicar resina dental fotopolimerizável para fixar eletrodos ou sondas de microdialise em experimentos crônicos. Este método permite adesão direta ao crânio, eliminando parafusos e reduzindo inflamações.

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

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