Name: Desenvolvimento personalizado Ovário de Hamster Chinês hospedar-Cell ensaios de proteína utilizando a Tecnologia micropartícula Acústico Membrana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T18:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Aprenda a desenvolver imunoensaios personalizados para proteínas de células hospedeiras CHO utilizando a plataforma ViBE com tecnologia AMMP. Este método automatizado oferece resultados sensíveis e reprodutíveis com tempo mínimo de manipulação.

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1. Preparação de micropartículas <ol><li> Anticorpos etiqueta com Biotina NHS Química </li><li> Determinação do Grau de Biotinilação </li><li> Beads conjugado estreptavidina com anticorpo biotinilado <ol><li> Volte a suspender as contas no frasco original em vortex por 1-2 minutos </li><li> Alíquota o volume desejado de contas em um tubo de microcentrífuga </li><li> Lave as contas 3 vezes com PBST: <ol><li> Coloque o tubo que contém as contas sobre o ímã por 2 minutos </li><li> Retire o sobrenadante por aspiração com o tubo sobre o ímã. Tenha cuidado para não atrapalhar as contas </li><li> Retire o tubo do ímã e adicionar 1 mL PBST </li><li> Vortex por 20 segundos para voltar a suspender as contas </li><li> Centrifugar durante 5 segundos para remover as contas da tampa </li><li> Repita mais duas vezes 2.3.1-2.3.5 </li></ol></li><li> Após a terceira lavagem lugar do tubo sobre o ímã e aspirar o PBST </li><li> Adicionar anticorpo biotinilado para as contas e ressuspender </li><li> Se for necessário reduzir o volume do anticorpo biotinilado até 300 mL com PBS. Se o volume de anticorpos é já superior a 300 mL não adicionar qualquer PBS </li><li> Incubar a suspensão de esferas / anticorpo por 30 minutos em temperatura ambiente no agitador vortex ou tubo rotador </li><li> Lavar 3 vezes com PBST como no passo 3. </li><li> Bloco de contas com BSA biotinilado <ol><li> Após a terceira lavagem adicionar 10 mg / mg biotinilado BSA, ajustar o volume para 300 mL com PBS, se necessário, e incubar com agitação por 30 minutos </li></ol></li><li> Lavar 3 vezes com PBST como no passo 3 </li><li> Volte a suspender as contas em 100 mL de BSA PBS/0.05%. Azida de sódio pode ser adicionado para armazenamento a longo prazo </li></ol></li><li> Utilizando protocolos padrão NHS fluoresceína, o anticorpo fluoresceinate detector </li><li> Determinar o grau de Fluorescination </li></ol> 2. HCP - Desenvolvimento <ol><li> Prepare soluções de trabalho: <ol><li> Anticorpo marcado com fluoresceína (Fl-Ab): A maioria dos CHO-HCP ensaios use Fl-Ab na concentração final de 400 ng / mL. O Fl-Ab é adicionado como ¼ do volume final do ensaio, por isso a concentração da solução de trabalho é de 1,6 mcg / mL. Preparar esta solução diluindo estoque Flab com BioScale Bead / Diluente flacidez. </li><li> Contas: a maioria dos CHO-HCP ensaios use bolinhas em uma concentração final de 2x10 5 gotas / mL. O reagente talão constitui ¼ do volume final do ensaio, por isso a concentração da solução de trabalho é 8x10 5 gotas / mL. Preparar esta solução diluindo estoque talão com BioScale Bead / Diluente flacidez. Vortex do estoque talão bem para garantir que todas as contas estão em suspensão antes de remover uma alíquota. </li><li> Execução Buffer: A composição do tampão de corrida pode ter que ser otimizado para os anticorpos utilizados para desenvolver o ensaio, no entanto várias CHO-HCP ensaios foram desenvolvidos utilizando tampão HEPES 10 mM, Tween 1%, pH 7.5. BioScale desenvolveu um aditivo para o tampão de corrida (fornecido com o kit de desenvolvimento), que é adicionado ao buffer para uma concentração de 1% antes do uso. </li></ol></li><li> Diluir os calibradores e amostras com Diluente de Amostra BioScale. </li></ol> 3. ViBE Sistema de Set Up <ol><li> Vire o Workstation ViBE em </li><li> Ligue a fonte de sistema e resíduos </li><li> Primeiro o sistema </li><li> Insira um cartucho ViBE </li><li> Rota dos tubos </li><li> Prepare modelo de ensaio, preencha a folha chamada "Setup Amostra". BioScale fornece a capacidade de ter um modelo de análise para cada ensaio Workstation ViBE. Isto permite ao usuário editar e salvar notas específicas nas "Notas" da folha do modelo para diferentes testes de manter um registro completo do experimento. </li><li> Modelo de teste de configuração inicial: Comece por preencher a tabela (canto superior esquerdo) da faixa de concentração dos padrões no ensaio da "Sample Setup" folha. </li><li> Em seguida, insira informações adicionais na tabela à direita dos padrões (Setup Coluna Simples Read, Uma Adicionar reagente e dois setups Reagente Add) para instruir o Workstation ViBE como amostras longa necessidade de incubar, o quanto de volume de reagente deve ser transferida , quanto tempo a acumulação amostra precisa ser, e se condicionado sensores e descontaminação de sondas e cartucho são necessários, etc </li><li> Preencha o layout da placa. </li><li> Carga de amostra / reagentes em placas. O ViBE irá fornecer os volumes necessários para a placa de reagente. Volume de amostra pode variar, mas na metade de um volume de ensaio total de 120 mL é um bom lugar de partida. </li><li> Aplicar cobre da placa. Placas de carga no convés em estação de trabalho. </li><li> Executar o ensaio de arranque assistente, passar por assistente e iniciar ensaio. </li></ol> 4. Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: AMMP Imunoensaio Sandwich Numa estação de trabalho ViBE, um ensaio AMMP mede a concentração de antígeno. Sinal é medido quando o anticorpo-antígeno hapteno bead-liga-se ao sensor através do hapteno / anti-hapteno interação. Regeneração traz o sensor de volta ao estado inicial, removendo os complexos imunes. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: CHO-HCP AMMP curva de calibração do ensaio Figura 2 acima é um exemplo de uma AMMP HCP CHO curva de calibração do ensaio. Análise pode ser realizada em amostras de todo o fluxo de purificação, incluindo o reator com alta precisão e reprodutibilidade. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: Proteína A curva de calibração AMMP Assay Figura 3 é uma curva de calibração para uma proteína residual Um Ensaio AMMP, realizada com uma proteína VIBE Residual Um Kit de Ensaio. O mesmo kit pode ser usado para um rápido ensaio com um período de incubação de 30 minutos, ou para resultados mais sensível e maior gama dinâmica, com um período mais longo de incubação, sem perda de precisão ou precisão, sendo que ambos são normalmente melhor do que equivalentes ELISA em usuários mãos <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4: Produto testes sorológicos AMMP Assay O Workstation ViBE também pode ser usado para um ensaio de Produto testes sorológicos, os resultados mostrados na figura 4. Realizada de forma diferente Ensaios AMMP, este ensaio não necessita de tratamento da amostra que a diluição simples, ou grânulos, e quantificação foi verificado em "nenhum spin" amostras contendo mais de 10 milhões de células em uma ampla faixa de viabilidades. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5: AMMP curva padrão do ensaio para o ensaio GST-Gadd34 biomarcador Mostrado na Figura 5 é uma curva padrão de sinal obtido pela Bioanalyzer ViBE (Painel A) ou Tecnologia AlphaScreen usando recombinante GST-Gadd34. Resultados na plataforma ViBE foram de aproximadamente um log mais sensível utilizando os mesmos anticorpos. AMMP utiliza a medição de menos partículas maiores benefícios ainda assim, desde a captura solução fase e formação do complexo de detecção. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Figura 6: Ensaio AMMP curva padrão para GST-Gadd34 em amostra de tumor Na Figura 6, a indução de Gadd34 de CWR22 xenoenxertos foi testada na presença ou ausência de um inibidor de proteassoma boronato como analisado tanto pela Bioanalyzer ViBE (Painel A) ou AlphaScreen (Painel B). A plataforma ViBE foi capaz de produzir sensíveis, resultados reprodutíveis na in vivo xenoenxertos tumor enquanto o sinal AlphaScreen se apagou com o aumento mg de proteína. Este exemplo mostra o poder da tecnologia AMMP em amostras altamente complexo. Devido ao chip de detecção sensível e de alta eficiência do ímã perto do chips, baixo número de micropartículas magnéticas podem de forma eficiente e reproduzível para limpar alvo baixa abundância em meio à complexidade de lisados ​​celulares (incluindo os reagentes de lise) e os restos de sangue.

Os autores deste artigo são empregados por Bioscale, Inc, que produz alguns dos instrumentos e reagentes utilizados neste artigo.

Os exemplos anteriores demonstram altamente sensível AMMP de resultados quantitativos em amostras complexas. Esse desempenho, quando entregues com a facilidade e controle de formatação reagentes para o sistema é propício para uma variedade de aplicações. Os pedidos podem ser específicos para um alvo, como em Gadd34 no tumor, ou genérico para um espectro de alvos, como na série de detecção e quantificação de proteínas de células em amostras que cruzam o fluxo de purificação. A plataforma ViBE baixo overhead combinado com AMMP altamente flexível fornece uma ferramenta poderosa para a entrega de ensaios críticos.

<table><tbody><tr><td>NHS-Cromogênico-biotina ou kit de marcação NHS-Cromogênico Biotina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Se a NHS-Cromogênico-biotina for adquirida como reagente, os seguintes materiais adicionais serão necessários</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solvente orgânico miscível em água, como dimetilsulfóxido (DMSO) ou dimetilformamida (DMF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS) ou outro tampão livre de aminas (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colunas de dessalinização ou unidades de diálise para troca de tampão</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro capaz de medir 354 e 280 nm &amp;#8211; para medir as concentrações de proteína e biotina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo biotinilado (2-5 biotinas/Ab)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Esferas magnéticas de estreptavidina</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>(10 mg/mL) ~10&lt;sup&gt;8&lt;/sup&gt; esferas/mg</td></tr><tr><td>Ímã para tubos de microcentrífuga</td><td>New England Biolabs</td><td>cat # S1510S</td><td></td></tr><tr><td>BSA biotinilada para bloqueio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS 0,1% Tween 20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Suporte para microcentrífuga com Vortex ou rotador de tubos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo ou proteína a ser marcada</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluoresceína ou kit de marcação NHS-Fluoresceína</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Se a NHS-Fluoresceína for adquirida como reagente, os seguintes materiais adicionais serão necessários</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solvente orgânico miscível em água, como dimetilsulfóxido (DMSO) ou dimetilformamida (DMF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM borato, pH 8,5 ou outro tampão livre de aminas (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colunas de dessalinização ou unidades de diálise para troca de tampão</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A medição das concentrações de proteína e fluoresceína requer um espectrofotômetro capaz de medir 493 e 280 nm.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diluente</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>para diluir esferas e FlAb</td></tr><tr><td>Diluente de amostra</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>para diluir amostras e calibradores</td></tr><tr><td>Aditivo para tampão de corrida</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

desenvolvimento personalizado ovário de hamster chinês hospedar-cell ensaios de proteína utilizando a tecnologia micropartícula acústico membrana

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Ensaios personalizado para proteínas específicas são muitas vezes limitadas ao tempo de detecção manual de consumir e as técnicas de quantificação, tais como ELISA ou Western blot, devido à complexidade do desenvolvimento em plataformas alternativas. Proprietários BioScale de Membrana acústica micropartículas tecnologia (AMMP) permite imunoensaios sanduíche para ser facilmente desenvolvidos para uso na plataforma ViBE, proporcionando uma melhor sensibilidade, reprodutibilidade e operação automatizada. Fornecido como um exemplo, este protocolo descreve o procedimento para o desenvolvimento de um costume chinês Hamster Proteína de Célula Ovário-Host (CHO-HCP) ensaio. Os princípios gerais aqui delineados podem ser seguidas para o desenvolvimento de uma ampla variedade de imunoensaios. AMMP um ensaio concentração do antígeno medidas medindo mudanças na freqüência de oscilação causada pela ligação de micropartículas à superfície do sensor de calcular. É composto de quatro componentes principais: (1) um cartucho que contém um chip sensor funcionalizados oito (2) anticorpo marcado micropartículas magnéticas, (3) anticorpo hapteno marcado que se liga à superfície do chip funcionalizados (4) amostras contendo o antígeno de interesse. BioScale biosensor é um dispositivo ressonante que contém oito individuais com membranas separadas caminhos fluídico. As membranas alterar a freqüência de oscilação em resposta a massa acumulando na superfície e essa mudança de freqüência é usada para quantificar a quantidade de massa adicionada. Para facilitar o uso em uma ampla variedade de imunoensaios o sensor é funcionalizada com um anticorpo anti-hapteno. Anticorpos específicos ensaio são modificados por meio da conjugação covalente de um tag hapteno a um anticorpo e biotina para o outro. O rótulo biotina é usada para vincular o anticorpo para estreptavidina acoplado esferas magnéticas que, em combinação com o anticorpo hapteno-tagged, são usados ​​para capturar o analito em um sanduíche. O complexo se liga ao chip através da interação anti-hapten/hapten. No final de cada ensaio os sensores são limpas com um ácido diluído permitindo a análise seqüencial de colunas de uma placa de 96 poços. Aqui, apresentamos o método para o desenvolvimento de um costume CHO-HCP ensaio AMMP para o desenvolvimento de bioprocessos. Desenvolvimento de ensaios AMMP ou modificar ensaios existentes em ensaios AMMP pode proporcionar um melhor desempenho (sensibilidade, reprodutibilidade) em amostras complexas e tempo do operador. O protocolo mostra os passos para o desenvolvimento ea seção de discussão opiniões resultados representativos. Para uma explicação mais aprofundada da otimização do ensaio e os parâmetros de personalização contato BioScale. Este kit oferece genéricos ensaios de desenvolvimento de bioprocessos, como proteína residual Um título do produto, e CHO-HCP.

Desenvolvimento de ensaios personalizado na plataforma ViBE para mais sensíveis, reprodutíveis, os resultados automatizados em matrizes complexas é descrito. O cartucho universal permite ensaios para ser facilmente adaptadas para uso com ensaios personalizado. Esta versatilidade permite o rápido desenvolvimento e validação de ensaios de romance ou versões automatizada de ensaios existentes manual, exemplificado neste vídeo.

Desenvolvimento personalizado Ovário de Hamster Chinês hospedar-Cell ensaios de proteína utilizando a Tecnologia micropartícula Acústico Membrana

Ensaios personalizados para proteínas exclusivas são frequentemente limitados a técnicas de detecção e quantificação manuais e demoradas, tais como ELISA ou Western blots, devido a...

O objetivo geral deste procedimento é criar um imunoensaio personalizado e robusto para obter resultados reprodutíveis com tempo mínimo de manipulação. Isso é alcançado primeiramente pela preparação dos componentes apropriados do ensaio. O segundo passo do procedimento consiste em otimizar o ensaio com base nos parâmetros do mesmo.O terceiro passo do procedimento é montar o ensaio na plataforma Vibe simplesmente carregando as placas de amostras e reagentes e definindo o procedimento do ensaio. Com o software Vibe, o passo final do procedimento é iniciar o vibe com o assistente de inicialização. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram ensaios imunológicos sensíveis e reprodutíveis com anticorpos personalizados e tempo mínimo de manipulação manual por meio do uso da plataforma Vibe.A principal vantagem dessa tecnologia em relação a métodos existentes, como o Eli's, é que a Estação de Trabalho Vibe oferece operações sem intervenção e dados mais reprodutíveis segundo os protocolos padrão. Usando NHS Cromogênico, biotina Bio atin, o anticorpo de captura para ligar o anticorpo biotinilado à estreptoavidina e às microesferas magnéticas, comece por vórtex no frasco de estreptoavidina e microesferas magnéticas por um a dois minutos para ressuspender, pipete o volume desejado de microesferas para um tubo cônico e remova o sobrenadante com o auxílio de um separador magnético. Lave as microesferas três vezes com PBST, utilizando separação magnética para recuperar as microesferas conforme o protocolo escrito.Após a remoção do PBST da última lavagem, adicione a solução de anticorpo biotinilado às esferas e re-suspenda as esferas por pipetagem. Certifique-se de que o volume de anticorpo seja de pelo menos 300 microlitros. Se for menor, ajuste com PBS.Incube a suspensão por 30 minutos à temperatura ambiente com agitação. Em seguida, lave as microesferas com PBST como antes. Adicione BSA biotinilada de acordo com o mesmo procedimento realizado anteriormente.Quando o anticorpo biotinilado for usado, lave as microesferas antes e re-suspenda-as em 100 microlitros de BSA 0,05% em PBS para armazenamento de longo prazo, podendo o azida sódio ser adicionado de acordo com protocolos padrão. Fluoresceína NHS para fluorar o anticorpo detector. Para iniciar o desenvolvimento do ensaio de proteína de célula hospedeira de ovário de hamster chinês.Primeiro, prepare as soluções de trabalho. O anticorpo marcado com HAPTEN ou HAB é preparado como uma solução de trabalho 4x de 1,6 microgramas por mililitro diluída com diluente de HAB de esferas bio scale; agite a solução por pelo menos cinco minutos. Em seguida, prepare a solução de esferas.Vortexe bem o estoque de esferas em bile. Para garantir que todas as esferas estejam em suspensão, retire uma alíquota para preparar uma mistura trabalhadora quatro x, com oito vezes 10 à quinta esferas por mililitro, diluídas com diluente HAB para bioescala de esferas. Incube a solução sob rotação por pelo menos cinco minutos.Em seguida, prepare o tampão de corrida. Vários ensaios de HCP de CHO foram desenvolvidos utilizando tampão HEPES 10 milimolar, 1% de Tween, pH 7,5.No entanto, pode ser necessário otimizar o tampão para os anticorpos utilizados no desenvolvimento do seu ensaio. Recomenda-se que um modelo de ensaio seja preparado para cada ensaio de cinco estações de trabalho. O modelo de ensaio possui sete planilhas, rotuladas como instruções, notas de configuração da amostra, cálculos de dados brutos, gráfico de calibração e resultados.Para começar a configurar o modelo, selecione a planilha de configuração da amostra e preencha a faixa de concentração dos padrões na tabela. No canto superior esquerdo da planilha, insira informações adicionais na tabela à direita dos padrões para instruir a estação de trabalho vibe sobre o tempo de incubação das amostras, o volume de reagente a ser transferido, a duração da acumulação da amostra e se são necessárias a condicionamento do sensor e a descontaminação das sondas e do cartucho. Em seguida, preencha o layout da placa, dilua os calibradores e as amostras com diluente de amostra em escala bio e carregue as amostras nas placas.Carregue os reagentes na terceira placa de 96 poços. Selle as placas. Coloque as placas nos agitadores do deck da estação de trabalho e configure o sistema com tampão de lavagem e solução de regeneração.Ligue a estação de trabalho vibe e conecte a alimentação e o descarte do sistema. Comece a escorvar o sistema. Insira o cartucho vibe.Por fim, execute o assistente de inicialização do ensaio. Siga as instruções exibidas na tela e inicie o ensaio. O sinal do ensaio é medido com a tecnologia A MMP. Quando o anticorpo HAPTEN com antígeno ligado à microesfera se liga ao sensor por meio da interação hapteno anti-hapteno, a regeneração devolve o sensor ao estado inicial removendo os complexos imunes. Exibido.Aqui está um exemplo de um ensaio CHO H-C-P-A-M-M-P. A análise da curva de calibração pode ser realizada em amostras de biorreator com resultados reprodutíveis. Esta curva de calibração é para uma proteína residual.O ensaio A-A-M-M-P realizado com uma proteína residual vibe, um kit de ensaio. O mesmo kit pode ser usado para um ensaio mais rápido com um período de incubação de 30 minutos ou para resultados mais sensíveis e uma faixa dinâmica mais ampla com um período de incubação mais longo. A Estação de Trabalho Vibe também pode ser usada para um ensaio de título de produto realizado de maneira diferente dos outros ensaios A MMP.Este ensaio não requer tratamento da amostra nem esferas, e a quantificação foi verificada em amostras sem centrifugação contendo mais de 10 milhões de células. É apresentada aqui uma curva padrão do sinal obtido pelo Bioanalisador Vibe ou pela Tecnologia Alpha Screen utilizando resultados de GST GAD 34 recombinante na plataforma Vibe. Foi observada sensibilidade um logaritmo maior aqui.A indução de GAD 34 a partir de xenografias CWR 22 foi testada na presença ou ausência de um inibidor do proteassoma bate, conforme analisado pelo Vibe, bioanalisador ou ensaio Alpha. A plataforma Vibe foi capaz de produzir resultados sensíveis e reprodutíveis nos xenografos tumorais in vivo, enquanto o sinal do ensaio Alpha foi atenuado com o aumento de microgramas de proteína após seu desenvolvimento. Esta técnica abriu caminho para pesquisadores na área de descoberta de fármacos em oncologia explorarem a inibição medicamentosa em amostras tumorais, e permitiu operações mais eficientes em aplicações de bioprocessamento.

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JoVE Journal

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Bioengenharia

Este vídeo demonstra um ensaio para purificar anticorpos monoclonais de fluido de cultura de células colhidas de células ovarianas de hamster chinês. Ele emprega uma resina de vidro porosa com proteína A imobilizada, que se liga à região Fc dos anticorpos na amostra, separando-os efetivamente dos contaminantes. O uso de um tampão de eluição de baixo pH enfraquece a interação, facilitando a recuperação de anticorpos purificados.

Uma técnica para purificar anticorpos monoclonais produzidos por células de ovário de hamster chinês

Aqui, descrevemos um ensaio cromatográfico, juntamente com a separação de mobilidade do íon de precursores de peptídeo seguido de alta resolução (~ 30.000) MS-detecção de fragmentos de peptídeo para a quantificação dos padrões de peptídeo cravado em um anticorpo monoclonal digerir.

Um ensaio de HS-MRM para a quantificação de proteínas de célula hospedeira em biofármacos de proteínas por espectrometria de massa líquida cromatografia iônica mobilidade QTOF

Um protocolo detalhado para a purificação e a análise subseqüente de um anticorpo monoclonal do líquido de cultura de pilha colhido (HCCF) de microbioreactors automatizados foi descrito. O uso de análises para determinar os atributos críticos de qualidade (CQAs) e maximizar o volume de amostra limitado para extrair informações vitais também é apresentado.

Purificação e análise de um anticorpo monoclonal de células de ovário de hamster chinês usando um sistema de Microbioreator automatizado

Para reproducibly contar os números dos mRNAs em oócitos individuais, fluorescência única molécula de RNA in situ hibridação (RNA-FISH) foi otimizada para células não-aderentes. Oócitos foram coletados, hibridizados com sondas específicas transcrição e quantificados usando um software de quantificação de imagem.

Uso de uma única molécula fluorescente hibridação In Situ (FISH-SM) para Quantify e Localize os mRNAs em oócitos murino

Aqui, apresentamos um procedimento detalhado para executar um Projeto de Experimento em um micro-bioreator automatizado seguido de colheita celular e quantificação de proteínas usando uma coluna de Proteína A.

Otimização de processos usando micro-bioreatores automatizados de alto throughput no cultivo de células de ovário de hamster chinês

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Produção de anticorpos monoclonais contra aminopeptidase N no epitélio da mucosa intestinal suína

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Isolamento de Lysatos de Proteína Celular Inteira de Processos Faciais de Camundongos e Células de Mesenchyme Palatal cultivadas para análise de fosfoproteína

O padrão de glicosylation de um anticorpo determina seu desempenho clínico, assim persistem os esforços industriais e acadêmicos para controlar a glicosylation. Uma vez que as campanhas típicas de glicoengenia são tempo e trabalhoso, a geração de um protocolo rápido para caracterizar o impacto dos genes de glicosylação usando silenciamento transitório seria útil.

Glicoengenia de anticorpos rápidos em células de ovário de hamster chinês

Um protocolo é apresentado para o enriquecimento de proteínas da célula hospedeira (HCPs) a partir de produtos farmacêuticos (PD) e detecção de peptídeos usando esferas de enriquecimento de proteoma. O método é demonstrado usando uma substância medicamentosa (MD) de anticorpos monoclonais (mAb) fabricada internamente, que é um material de referência bem caracterizado para avaliar e comparar diferentes métodos em termos de desempenho.

Análise de Proteína de Células Hospedeiras usando Contas de Enriquecimento Acopladas a Digestão Limitada

Aqui apresentamos um protocolo para a geração e verificação funcional de células T receptoras de antígeno quimérico (CAR)-sensíveis à hipóxia. Este protocolo apresenta a geração baseada em lentivírus de células CAR-T sensíveis à hipóxia e sua caracterização, incluindo a validação da expressão de CAR dependente de hipóxia e citotoxicidade seletiva.

Geração e Verificação Funcional de Células T Receptoras de Antígeno Quimérico Sensíveis à Hipóxia

Os exossomos possuem potencial clínico significativo, mas sua aplicação prática é limitada devido à fácil depuração in vivo e baixa estabilidade. As microagulhas apresentam uma solução ao permitir a entrega localizada, perfurando barreiras fisiológicas e preservação do estado seco, abordando assim as limitações da administração de exossomos e expandindo sua utilidade clínica.

Fabricação e caracterização de adesivos de microagulhas para carregamento e entrega de exossomos

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