Name: Métodos para a transferência rápida e localização de Patógenos Doença de Lyme no intestino Tick (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-14T20:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprenda microinjeção de Borrelia burgdorferi em carrapatos para localização do patógeno no intestino usando imunofluorescência e microscopia confocal. Este método acelera a infecção artificial e permite visualização precisa das bactérias.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Nós sinceramente agradecer aos membros do laboratório de Pal para a assistência com a preparação desta demonstração. Este estudo foi suportado por concessões PHS AI076684 e AI080615 do NIH / NIAID.

1. Microinjeção de carrapatos Ixodes scapularis ninfal 1. Agulhas preparar <ol><li> Fabricar agulhas microinjeção várias aquecendo e puxando um milímetro tubos capilares de vidro (Instrumentos de Precisão World) em um dispositivo de vidro extrator micropipeta (Narishige). Remova cuidadosamente os tubos frágeis capilares. </li><li> Loja puxado agulhas (com a ponta voltada para cima) em fita adesiva em uma placa de Petri. </li></ol> 2. Preparando B. burgdorferi <ol><li> Crescer B. burgdorferi em BSK cultura de mídia 7 até a uma concentração de cerca de 10 7 células por ml. Espiroquetas são contados em um microscópio de campo escuro pelo uso de uma Petroff-Hausser contagem câmara (Hausser científica). </li><li> Pelota B. burgdorferi por centrifugação a 3000 xg por 10 minutos em temperatura ambiente. </li><li> Remover o sobrenadante e completamente ressuspender o sedimento em BSK media suavemente passando de 200 mL MICROTIP estéril para uma concentração final de 10 9 células por mL. Uma vez que as células são ressuspendidas em alta densidade celular, e pode se acumular, a suspensão celular deve ser usado para microinjeção imediatamente. </li></ol> 3. Carrapatos preparar <ol><li> Lugar claro, fita adesiva dupla face em uma lâmina de vidro. </li><li> Trabalhando em uma esteira, retire cuidadosamente os carrapatos ninfal do recipiente com uma escova pequena. </li><li> Colocar o número necessário de carrapatos a ser injetado na fita adesiva, lado ventral para cima, de frente para a mesma direção. </li></ol> 4. Carrapatos injetando <ol><li> Carga de 5 mL da B. burgdorferi cultura para dentro da agulha capilar utilizando puxado a 20 mL microloader pipeta ponta (Eppendorf). Inspecionar a agulha para bolhas de ar aprisionadas e recarregar a agulha com a cultura bacteriana, se necessário. </li><li> Ver o carrapato sob o microscópio binocular de dissecação e foco na área do carrapato abertura anal. Toque na ponta da agulha capilar, a fim de quebrar o tubo onde o diâmetro é ligeiramente menor do que a de abertura anal do carrapato, formando a agulha microinjeção. Esta etapa é fundamental como qualquer tentativa de injetar carrapatos com uma ponta de agulha não adequada provoca a morte de lesões e possíveis do carrapato injetado. </li><li> Coloque os carrapatos imobilizado sob o microscópio binocular de dissecação e concentrar-se na abertura anal, que é coberta por duas placas móveis anal. Utilizando uma pinça fina, tocar suavemente e aplicar uma pressão muito leve para qualquer área perto da abertura anal. Isto permitirá que a separação das placas anal e abertura de poros anal que se conecta ao intestino. Insira cuidadosamente a ponta da agulha um pouco para a abertura anal através da abertura forçada das placas anal. Inserção da agulha deve ser mantida a um mínimo como a ponta de vidro podem danificar o intestino posterior semitransparente que se conecta ao reto. Usando um microinjetor equipado com pedal automático (Eppendorf), injetar B. burgdorferi solução usando os seguintes parâmetros: 1.000 hectopascais (hPa) pressão de injeção, tempo de injeção 0,2 segundos e 8 de compensação de pressão hPa. Cada carrapato recebe uma única injeção. </li><li> Após a microinjeção, os carrapatos devem se comportar semelhante ao estado pré-injeção. Por exemplo, o carrapato deve rastejar em resposta a estímulos. </li><li> Nós geralmente permitem que os carrapatos se recuperar por 48 horas em uma câmara ambiental fixado em 24 ° C com 16 horas / 8 horas luz / escuridão regime de fotoperíodo e umidade de 95%. Se uma câmara não estiver disponível, carrapatos injetada pode ser armazenado em temperatura ambiente em condições de umidade dentro de um recipiente hermético, como uma câmara de dessecador regular. Se necessário, o tempo de recuperação dos carrapatos também poderia ser reduzido para algumas horas antes utilizado para a alimentação em camundongos. </li></ol> 2. B. burgdorferi localização por Microscopia Confocal de imunofluorescência 1. Carrapatos dissecar <ol><li> Coloque uma gota de solução fisiológica tamponada (PBS) em uma lâmina de vidro limpa para dissecção e outro em um slide poli-L-lisina revestido (Sigma) para microscopia. Prepare outra lâmina de vidro com fita dupla face adesiva. </li><li> Remover o carrapato do recipiente e coloque em fita dupla face adesiva, utilizando uma escova pequena. </li><li> Ver e foco do carrapato no microscópio de dissecação. Coloque uma lâmina afiada sobre o carrapato entre os pares de primeiro e segundo de pernas. Pressione firmemente o corte do carrapato em duas partes permitindo o acesso ao abdômen. Submergir imediatamente, o abdome em uma gota de PBS. </li><li> Usando uma pinça muito fina, pegue o exoesqueleto dorsal e ventral em torno do local do corte. Cuidadosamente puxe o escudo dorsal para cima e longe do carrapato expondo os divertículos intestinais acastanhadas. Tenha cuidado para manter os carrapatos dissecando sob a PBS em todos os momentos. </li><li> A semi-translúcido bun glândula salivarspindles estão localizados em ambos os lados da região anterior do intestino, e pode ser removido neste momento, se desejar. Segurando o exoesqueleto restantes no lugar com uma pinça, puxe cuidadosamente o intestino para fora do abdômen. </li><li> Limpar delicadamente o intestino, removendo quaisquer tecidos preso (por exemplo, traquéia). </li><li> Usando a ponta de uma pinça fina, transferir rapidamente o intestino carrapato em uma gota de PBS numa lâmina de vidro poli-L-lisina. Separar os intestinos em pedaços menores usando lâminas finas ou pressionando suavemente com a ponta de uma pinça fina. Aspirar cuidadosamente PBS excesso de tecidos ao redor do intestino. </li><li> Permitir que os tecidos do intestino para o ar seco à temperatura ambiente. </li><li> Corrigir o intestino carrapato por submersão em acetona por 10 minutos. Deixar secar ao ar em temperatura ambiente. Lâminas podem ser armazenados nesta etapa por meses a -20 ° C em um recipiente hermético. </li></ol> 2. Coloração <ol><li> Usando lenço de papel, remova o excesso de umidade em torno do tecido e desenhar um círculo ao redor do intestino carrapato secas por um pap pen-ou qualquer outro dispositivo de revestimento hidrofóbica barreira. Isso ajudará a manter a soluções de coloração durante as etapas de incubação subseqüentes. </li><li> Cobrir o intestino carrapato com uma ou algumas gotas de tampão de bloqueio (0,05% Tween-20, soro de cabra 5% em PBS) por 30 minutos em temperatura ambiente. O soro utilizado para o bloqueio depende da fonte de animal hospedeiro para o anticorpo. Não permita que o slide para secar a partir deste ponto em diante. </li><li> Lentamente, aspirar o tampão de bloqueio. Incubar o intestino com primário adequado e / ou soluções anticorpo secundário. Usamos isotiocianato de fluoresceína (FITC) - rotulado anti-B. burgdorferi anticorpos (Kirkegaard &amp; Perry Laboratories) na diluição de 1:100 em tampão de bloqueio por 1 hora à temperatura ambiente. Cubra o recipiente com papel alumínio para limitar a exposição à luz. </li><li> Remover a solução de anticorpos através de ligeira aspiração. Incubar o intestino com uma tinta fluorescente para os tecidos rótulo carrapato, tais como 4 ',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) ou iodeto de propídio. Normalmente usamos 20 mg / mL de iodeto de propídio (Sigma) em PBS por 5 min. à temperatura ambiente. </li><li> Lavar 3 vezes com 0,05% Tween-20 em PBS. </li><li> Montar o slide em glicerol tamponado contendo um reagente Antifade como Slowfade (Invitrogen) e cuidadosamente cobrir com uma lamela de vidro. Lâminas podem ser armazenados nesta etapa por alguns meses a 4 ° C dentro de um recipiente hermético. Imagem e localizar B. burgdorferi sob um microscópio confocal. </li></ol> 3. Resultados representante Posição de um carrapato ninfal de microinjeção e uma imagem representando B. burgdorferi localização no intestino carrapato é apresentado na Figura 1. <img src="/files/ftp_upload/2544/2544fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Microinjeção e localização de B. burgdorferi no intestino do carrapato. (A) vista ventral de uma ninfa I. carrapato scapularis posicionado para microinjeção. Anal abertura (seta) com agulha inserida microinjeção (seta) é mostrado sob a ampliação na inserção. A pinça fina é usado para aplicar pressão suave para o corpo, o que permitiu a separação das placas anal e abertura do poro anal para microinjeção. A agulha é preenchido com uma solução de Coomassie azul brilhante para melhorar a visibilidade. (B) Os resultados representativos das imagens de imunofluorescência confocal de B. burgdorferi dentro do intestino do carrapato. Região anterior de um divertículo do intestino é mostrado. Núcleos intestino e espiroquetas (seta) são rotulados com iodeto de propídio (cor vermelha) ou FITC-conjugado anti-B. burgdorferi (cor verde), respectivamente. Bar = 20 mM.

<ol><li>Steere, A. C., Coburn, J., Glickstein, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+Lyme+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The emergence of Lyme disease.</a> J Clin Invest. 113, 1093-1101 (2004).</li>
<li>Barthold, S. W., Diego, C., Philipp, M. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarthold%2C+SW+%22Borrelia%2C+Molecular+Biology%2C+Host+Interaction+and+Pathogenesis%22">Borrelia, Molecular Biology, Host Interaction and Pathogenesis</a>. Samuels, D. S., Radolf, J. D. , Caister Academic Press. Chapter 14 353-405 (2010).</li>
<li>Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OspC+facilitates+Borrelia+burgdorferi+invasion+of+Ixodes+scapularis+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">OspC facilitates Borrelia burgdorferi invasion of Ixodes scapularis salivary glands.</a> J Clin Invest. 113, 220-230 (2004).</li>
<li>Yang, X. F., Pal, U., Alani, S. M., Fikrig, E., Norgard, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+role+for+OspA%2FB+in+the+life+cycle+of+the+Lyme+disease+spirochete%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Essential role for OspA/B in the life cycle of the Lyme disease spirochete.</a> J Exp Med. 199, 641-648 (2004).</li>
<li>Zhang, X., Yang, X., Kumar, M., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BB0323+function+is+essential+for+Borrelia+burgdorferi+virulence+and+persistence+through+tick-rodent+transmission+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">BB0323 function is essential for Borrelia burgdorferi virulence and persistence through tick-rodent transmission cycle.</a> J Infect Dis. 200, 1318-1330 (2009).</li>
<li>Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TROSPA%2C+an+Ixodes+scapularis+receptor+for+Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TROSPA, an Ixodes scapularis receptor for Borrelia burgdorferi.</a> Cell. 119, 457-468 (2004).</li>
<li>Barbour, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+cultivation+of+Lyme+disease+spirochetes%5BTitle%5D)+AND+%22Yale+J+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Isolation and cultivation of Lyme disease spirochetes.</a> Yale J Biol Med. 57, 521-525 (1984).</li>
<li>Narasimhan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Ixodes+scapularis+anticoagulation+by+using+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Disruption of Ixodes scapularis anticoagulation by using RNA interference.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 1141-1146 (2004).</li>
<li>Narasimhan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tick+antioxidant+facilitates+the+Lyme+disease+agent%27s+successful+migration+from+the+mammalian+host+to+the+arthropod+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">A tick antioxidant facilitates the Lyme disease agent's successful migration from the mammalian host to the arthropod vector.</a> Cell Host Microbe. 2, 7-18 (2007).</li>
<li>Broadwater, A. H., Sonenshine, D. E., Hynes, W. L., Ceraul, S., DeSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glass+capillary+tube+feeding%3A+a+method+for+infecting+nymphal+Ixodes+scapularis+%28Acari%3A+Ixodidae%29+with+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Glass capillary tube feeding: a method for infecting nymphal Ixodes scapularis (Acari: Ixodidae) with the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi.</a> J Med Entomol. 39, 285-292 (2002).</li>
<li>Policastro, P. F., Schwan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+infection+of+Ixodes+scapularis+larvae+%28Acari%3A+Ixodidae%29+by+immersion+in+low+passage+cultures+of+Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Experimental infection of Ixodes scapularis larvae (Acari: Ixodidae) by immersion in low passage cultures of Borrelia burgdorferi.</a> J Med Entomol. 40, 364-370 (2003).</li>
<li>Fuente, dela, Kocan, J., M, K., Almazan, C., Blouin, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+for+the+study+and+genetic+manipulation+of+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">RNA interference for the study and genetic manipulation of ticks.</a> Trends Parasitol. 23, 427-433 (2007).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Aqui demonstramos um procedimento baseado microinjeção de infecção rápida e eficaz de carrapatos Ixodes ninfal com o agente patogénico B. burgdorferi. Descrevemos também um procedimento confocal de imunofluorescência para a detecção de B. burgdorferi no intestino carrapato in situ. Embora a nossa demonstração envolve gut ninfal, procedimentos semelhantes são também aplicáveis ​​para outros estágios de desenvolvimento dos carrapatos, como larva ou adulto 8,9. No entanto, devido à sua...

<table><tbody><tr><td>Tubos capilares de vidro</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>TW100F-4</td><td></td></tr><tr><td>Puxador vertical de vidro</td><td>Narishige International</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de contagem Petroff-Hausser</td><td>Hausser Scientific</td><td>3900</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de micropipeta Microloader</td><td>Eppendorf</td><td>930001007</td><td></td></tr><tr><td>Microinjetor Femtojet</td><td>Eppendorf</td><td>920010504</td><td></td></tr><tr><td>Controle pedal do FemtJet</td><td>Eppendorf</td><td>920005098</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP665-1</td><td>Sterilizado por filtração</td></tr></tbody></table>

métodos para a transferência rápida e localização de patógenos doença de lyme no intestino tick

Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut

A doença de Lyme é causada por infecção com o patógeno espiroqueta Borrelia burgdorferi, que é mantido na natureza por um ciclo de infecção do carrapato roedor-1. Um modelo murino carrapatos 2 foi desenvolvido para estudar a doença de Lyme no laboratório. Enquanto carrapatos ingênuo pode ser infectado com B. burgdorferi, alimentando-os em camundongos infectados, o processo de muda leva várias semanas ou meses para ser concluído. Portanto, o desenvolvimento de técnicas de assinalar mais rápida e eficiente a infecção, como um procedimento de microinjeção de base, é uma importante ferramenta para o estudo da doença de Lyme 3,4. O procedimento requer apenas algumas horas para gerar os carrapatos infectados e permite o controle sobre a entrega de quantidades iguais de espiroquetas em uma coorte de carrapatos. Isto é particularmente importante como a geração de B. carrapatos infectados por burgdorferi o processo de alimentação natural, utilizando camundongos não consegue garantir a taxa de infecção de 100% e, potencialmente, resulta em variação de carga de patógenos entre os carrapatos alimentados. Além disso, a microinjeção pode ser usado para infectar carrapatos com B. burgdorferi isolados em casos em que uma cepa atenuada é incapaz de estabelecer a infecção em camundongos e, portanto, não pode ser adquirida naturalmente por carrapatos 5. Esta técnica também pode ser usado para fornecer uma variedade de outros materiais biológicos em carrapatos, por exemplo, anticorpos específicos ou dupla stranded RNA 6. Neste artigo, vamos demonstrar a microinjeção de carrapatos ninfal com in vitro-grown B. burgdorferi. Iremos também descrever um método para a localização de patógenos a doença de Lyme no intestino tick usando microscopia confocal de imunofluorescência.

Estudos de pesquisa a doença de Lyme muitas vezes exigem a geração de carrapatos infectados com o patógeno Borrelia burgdorferi, um processo que normalmente leva várias semanas. Aqui nós demonstramos uma microinjeção baseado procedimento de infecção do carrapato que pode ser realizado em poucas horas. Nós também demonstramos um método de imunofluorescência para na localização in situ de B. burgdorferi dentro de carrapatos.

Métodos para a transferência rápida e localização de Patógenos Doença de Lyme no intestino Tick

A doença de Lyme é causada pela infecção com o patógeno espiroqueta Borrelia burgdorferi, que é mantido na natureza por um ciclo de infecção carrapato-roedor 1. ...

O objetivo geral deste procedimento é microinjetar e localizar células de Borrelia burgdorferi no intestino do carrapato. Isso é realizado primeiramente preparando as agulhas capilares de vidro e preenchendo-as com células de B. burgdorferi. Em seguida, as células de B. burgdorferi são transferidas para o intestino do carrapato por meio de microinjeção.Em seguida, o carrapato é dissecado e os tecidos intestinais são removidos. Por fim, é realizada a marcação por imunofluorescência de beberg defer no intestino do carrapato. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram a localização de beberg em ferry no intestino do carrapato utilizando microscopia confocal.Olá, sou a Dra. Ruth Paul Paul, professora assistente na Universidade de Maryland, no Departamento de Medicina Veterinária. Hoje, dois membros do meu laboratório, Toro Cairo, pesquisador pós-doutorando, e Adam Coleman, aluno de pós-graduação, irão mostrar o procedimento de infecção artificial de carrapatos por microinjeção que realizamos rotineiramente no laboratório. Após a microinjeção, dissecaremos o carrapato e visualizaremos as bactérias no intestino do carrapato utilizando microscópio confocal CE.A princip

methods-for-rapid-transfer-localization-lyme-disease-pathogens-within

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

A coleta de hemolinfa do carrapato infectado, glândulas salivares e saliva é importante estudar como a transmitida por carrapatos patógenos causam doenças. Neste protocolo, demonstramos como coletar glândulas salivares e hemolinfa de...

A saliva, glândula salivar, e Coleta de hemolinfa de carrapatos Ixodes scapularis

A doença de Lyme é a doença mais comumente relatados transmitidas por vetores na América do Norte. O agente causador, a Borrelia burgdorferi é uma bactéria espiroqueta transmitida por carrapatos ixodídeos. A transmissão e a detecção de infecção em modelos animais é optimizada pela utilização de alimentação de carraça, que aqui descrita.

Alimentação dos Carrapatos em Animais de Transmissão e Xenodiagnóstico em Lyme Disease Research

PCR aninhado é uma técnica simples, sensível e específica que pode ser aplicada a escala que DNA extrai para sondar para Borrelia burgdorferi, o agente causador da doença de Lyme. A experiência inicial da PCR usa primeiras demão gene-específico para gerar amplicons longo, que em seguida tornar-se modelos para uma reação subsequente usando iniciadores internos.

Detectando a doença de Lyme espiroqueta, a Borrelia Burgdorferi, em carrapatos usando PCR aninhado

Aqui, apresentamos um protocolo para espacial e temporalmente, avaliar a presença de microbiota viável nas entranhas de carrapato usando uma abordagem de hibridação in situ de montagem todo modificado.

Visualização da Microbiota nas entranhas do carrapato por toda a montagem In Situ da hibridação

Aqui nós apresentamos um protocolo de sequenciamento de próxima geração para sequenciação de rRNA 16S, que permite a identificação e caracterização das comunidades microbianas na vetores. Este método envolve a extração de DNA, amplificação e código de barras das amostras através de PCR, sequenciamento em uma pilha de fluxo e bioinformática para combinar dados de sequência de informação filogenética.

Caracterização de Microbiome carrapato de próxima geração 16S rRNA Amplicon sequenciação

A análise da hemolinfa de carrapato representa uma importante fonte de informações sobre como alguns patógenos causam doenças e como os carrapatos respondem imunologicamente a essa infecção. O presente estudo demonstra como inocular propágulos fúngicos e coletar hemolinfas de fêmeas de Rhipicephalus MICROPLUS ingurgizadas.

Divulgando a coleta de Hemolinfas e a inoculação de blastósporos de Metarhizium em carrapatos de Rhipicephalus MICROPLUS para estudos de patologia de invertebrados

A capacidade dos bacteriófagos de mover o DNA entre as células bacterianas os torna ferramentas eficazes para a manipulação genética de seus hospedeiros bacterianos. Apresenta-se aqui uma metodologia para induzir, recuperar e utilizar φBB-1, um bacteriófago de Borrelia burgdorferi, para transduzir DNA heterólogo entre diferentes cepas da espiroqueta da doença de Lyme.

Manipulação Genética Mediada por Fagos da Espiroqueta da Doença de Lyme Borrelia burgdorferi

Apresentado aqui é um método para alimentar carrapatos no sangue in vitro através de um sistema de membrana artificial para permitir o ingurgitamento parcial ou total de uma variedade de estágios de vida do carrapato.

Carrapato Alimentação por Membrana Artificial para Ixodes scapularis

A eletroporação é um método rápido e amplamente adotado para a introdução de DNA exógeno no gênero Rickettsia. Este protocolo fornece um método de eletroporação útil para a transformação de bactérias intracelulares obrigatórias no gênero Rickettsia.

Um método de eletroporação para transformar Rickettsia spp. com um vetor shuttle fluorescente de expressão de proteínas em linhagens celulares de carrapatos

Aqui, apresentamos um protocolo para coletar saliva, hemolinfa, glândulas salivares e intestino médio, após a dissecção de um carrapato alimentado individualmente, para estudar a localização específica do tecido de patógenos transmitidos por carrapatos para avançar na compreensão da competência do vetor e das interações patógeno-microbioma.

Extração de saliva, hemolinfa, glândulas salivares e intestino médio de carrapatos individuais (Acari: Ixodidae)

Este método descreve o desenvolvimento de um sistema de alimentação sanguínea de carrapatos in vitro , incorporando uma câmara impressa em 3D e uma membrana de silicone fabricada em laboratório. O sistema permite a alimentação artificial de carrapatos, facilitando a amostragem em vários estágios de alimentação e utilizando baixos volumes de sangue, fornecendo uma ferramenta inestimável para estudar carrapatos ixódidas.

Sangue de carrapato se alimentando através de uma membrana artificial em uma câmara impressa em 3D em pesquisa de carrapatos Ixodid

Aprenda microinjeção de Borrelia burgdorferi em carrapatos para localização do patógeno no intestino usando imunofluorescência e microscopia confocal. Este método acelera a infecção artificial e permite visualização precisa das bactérias.

Métodos para a transferência rápida e localização de Patógenos Doença de Lyme no intestino Tick

Explorar mais vídeos