Name: NanoDrop quantificação Microvolume de Ácidos Nucléicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Aprenda a quantificar ácidos nucleicos em microvolumes usando os espectrofotômetros NanoDrop 2000 C e 3.300. Este método elimina diluições, reduz o volume amostral e acelera fluxos de trabalho em biologia molecular.

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Richard W. Beringer e David L. Ash, Aplicações Os cientistas, os produtos NanoDrop Thermo Scientific, de assistência técnica e filmagens.

1. Microvolume Quantificação de Ácido Nucleico Usando um NanoDrop 2000c Espectrofotômetro <ol><li> Para começar, limpar as superfícies superior e inferior óptica do sistema de retenção microvolume espectrofotômetro amostra pipetando 2-3 mL de água deionizada para limpar a superfície inferior óptica. </li><li> Fechar o braço de alavanca, garantindo que o pedestal superior entra em contato com a água deionizada. Levante o braço de alavanca e limpe ambas as superfícies ópticas com um pano limpo, sem fiapos, limpe a seco laboratório. </li><li> Abra o software NanoDrop e selecione o aplicativo de ácido nucléico. Use um volume pequeno, pipetador calibrado para realizar uma medição em branco, dispensa 1 mL de tampão para a superfície inferior óptica. Abaixe o braço de alavanca e selecione "branco" na aplicação de ácido nucléico. </li><li> Uma vez que a medição em branco é completa, limpa ambas as superfícies ópticas com um pano limpo, sem fiapos, limpe a seco laboratório. </li><li> Escolha a constante apropriada para o exemplo que está a ser medido. <table border="1"><tbody><tr><td> Tipo de amostra </td><td> Selecione Opção </td><td> Constante Utilizado para Calcular Concentração </td></tr><tr><td> dsDNA </td><td> DNA-50 </td><td> 50 </td></tr><tr><td> ssDNA </td><td> DNA-33 </td><td> 33 </td></tr><tr><td> RNA </td><td> RNA-40 </td><td> 40 </td></tr><tr><td> Oligo </td><td> Personalizado </td><td> 15-150 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Típicos varia de ácido nucléico de concentração para as medidas de absorbância direta A280 usando um NanoDrop microvolume espectrofotômetro, um espectrofotômetro cuvete tradicional baseado usado com uma microcélula TrayCell cuvete, e um fluorospectrometer NanoDrop microvolume em conjunto com o ensaio PicoGreen. </li><li> Dispense 1 mL de amostra de ácido nucléico para o pedestal inferior ópticas e fechar o braço de alavanca. Porque a medida é de volume independente, a amostra só precisa preencher a lacuna entre as duas superfícies ópticas para uma medição a ser feita. </li><li> Selecione "Measure" no software de aplicação. O software irá calcular automaticamente as taxas de ácido nucléico concentração e pureza. Após medição da amostra, analisar a saída espectral. </li><li> O software irá calcular automaticamente as taxas de ácido nucléico concentração e pureza. Após medição da amostra, rever a imagem espectral para avaliar a qualidade da amostra. </li><li> Uma amostra de ácido nucleico típico terá um perfil muito característico. <img src="/files/ftp_upload/2565/2565fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Uma amostra de ácido nucleico típico terá um perfil muito característico. </li><li> As fontes comuns de contaminantes específicos associados com técnicas de isolamento de ácido nucléico incluem a extração de fenol / Trizol e coluna. No caso da extração de fenol / Trizol, a contaminação do reagente residual pode ser indicado por espectros anormal entre 220-240 nm, bem como por mudanças na região 260-280 nm. Por outro lado, guanidina residual da extração de coluna podem contribuir para um pico próximo 230 nm e uma mudança no cocho de 230 nm a cerca de 240 nm. <img src="/files/ftp_upload/2565/2565fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. As mudanças nos picos e depressões das amostras B e C, em comparação com amostra A ilustrar como contaminantes podem afetar os espectros de amostras de ácidos nucléicos. </li><li> Para avaliar com precisão a qualidade da amostra, 260/280 ou 260/230 índices deveriam ser analisados ​​em combinação com qualidade espectral global. Pure ácidos nucléicos normalmente produzem uma relação de 260 / 280 ~ 1,8 e uma relação de 260/280 de ~ 2.0 para DNA e RNA, respectivamente. Esta relação é dependente do pH e força iônica do buffer usado para fazer o branco e as medições da amostra. Soluções ácidas será sub-representação da relação por 0,2-0,3, enquanto uma solução básica sobre-representam a razão por 0,2-0,3. Relações pureza significativamente diferentes podem indicar a presença de proteínas, fenol ou outros contaminantes que absorvem fortemente em ou perto de 280 nm. O grau de pureza de 260/230 é uma segunda medida de pureza do DNA com os valores de um ácido nucléico "puro" em geral na faixa de 1,8-2,2. Relações pureza que são significativamente inferiores aos valores esperados podem indicar a técnica de isolamento utilizado pode exigir maior otimização. </li><li> Espectrofotômetros NanoDrop também podem ser usados ​​para quantificar proteínas usando absorbância direta ou por ensaios de proteína colorimétrico. Para garantir a formação adequada coluna e reprodutibilidade, 2 mL amostras são aconselhados para as amostras de proteína. Consulte o vídeo JOVE seguinte: Microvolume determinação da concentração de proteínas usando o espectrofotômetro NanoDrop <a href="https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=1610">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=1610</a> </li></ol><ol><li> Para demonstrar a alta sensibilidade microvolume quantificação de ácidos nucléicos usando o 3300 NanoDrop, um kit PicoGreen fluorescência é usada. Para começar, equilibrar os padrões do kit e todas as amostras de ácido nucléico à temperatura ambiente. Amostras fluorescentes são sensíveis à luz e deve ser mantido em âmbar ou envolto tubos de alumínio. </li><li> Prepare o suficiente 1x tampão TE para todos os padrões e amostras a serem medidos, bem como para a solução PicoGreen de trabalho que serão necessários. Prepare tampão 1xTE diluindo fornecidas 20x tampão TE com água livre de nuclease por protocolo do fabricante. Volumes de reação pode variar de 200 mL para menos de 10 ul. Neste exemplo, 10 volumes de reação mL será preparado. </li><li> Prepare série padrão diluídas dsDNA em 2X a concentração final desejada em nuclease livre de frascos ou tubos. Transferir 5 mL de cada um dos padrões dsDNA diluído em um indivíduo rotulado nuclease livre de âmbar ou cobertos de folha de tubo. </li><li> ML alíquota 5 de cada amostra de interesse em dsDNA devidamente rotulados âmbar nuclease-free ou folhas cobertas de tubos. </li><li> Prepare PicoGreen solução de trabalho de acordo com o protocolo do fabricante. Transferência de um volume igual de solução PicoGreen trabalhando a cada tubo contendo um padrão ou amostra de interesse (5 mL, neste exemplo). </li><li> Combine volumes iguais de 1x tampão TE e solução PicoGreen de trabalho para preparar o controle negativo, que serve como uma solução de referência. </li><li> Misture o conteúdo de cada tubo de reacção completamente pipetando suave e incubar as reações à temperatura ambiente por 5 minutos. Todos os padrões e as amostras devem ser equilibrados à mesma temperatura antes da medição como sinal de fluorescência é afetado pela temperatura. </li><li> Para preparar o instrumento e efectuar medições, primeiro limpe as superfícies inferior e superior do sistema de retenção de amostra. Pipete 2-3 de água deionizada para a menor superfície óptica, feche em seguida, abra o braço de alavanca, e secar os pedestais superior e inferior com um pano limpo, sem fiapos, limpe laboratório. Assegurar as superfícies são livres de fiapos antes de prosseguir como fiapos podem apresentar fluorescência na presença de uma fonte de excitação e pode interferir com a medição. </li><li> Abra o software do aparelho, selecione a opção "ácidos nucléicos", aplicação e selecione a opção "PicoGreen-dsDNA" opção. </li><li> Para o instrumento em branco, adicionar 2 mL de TE 1x ao menor pedestal, perto do braço, e selecione "Blank" no campo de software instrumento. Uma vez em branco é completa, limpe a solução em branco de ambas as superfícies do sistema de retenção de amostra. </li><li> Misturar a solução de referência por pipetagem suave. Usando dicas de retenção baixa, pipeta mL 2 sobre o pedestal inferior e fechar o braço. </li><li> Selecione "referência" no tipo de medição, e selecione as unidades desejadas. Clique em "Measure" para iniciar o ciclo de medição. </li><li> Quando o ciclo de medição estiver completo, abra o braço e completamente fora da amostra blot superfícies do sistema de retenção. Medir até cinco repetições de referência, utilizando uma nova porção para cada repetição. </li><li> Repita o processo para as normas complementares para construir uma curva padrão. Até sete padrões podem ser usados. O software é projetado para armazenar até cinco repetições para cada padrão. Replica das normas são em média para gerar uma curva padrão a partir do qual as concentrações da amostra são determinados automaticamente. </li><li> Uma vez que a curva padrão é completo, selecione a opção "Samples" guia, insira as informações ID respectivos amostra e medir cada amostra desconhecida. </li></ol>

<ol><li>Wilfinger, W. W., Mackey, K., Chomczynski, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+pH+and+Ionic+Strength+on+the+Spectrophotometric+Assessment+of+Nucleic+Acid+Purity%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Effect of pH and Ionic Strength on the Spectrophotometric Assessment of Nucleic Acid Purity.</a> BioTechniques. 22, 474-481 (1997).</li>
<li>Voolstra, C., Jungnickel, A., Borrmann, L., Kirchner, R., Huber, A. Spectrophotometric Quantification of Nucleic Acids: LabelGuard enables photometric quantification of submicroliter samples using a standard photometer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVoolstra%2C+C+%22Implen+Applications+Note%22">Implen Applications Note</a>. , Munich, Germany. (2006).</li>
<li>Jr, I. ngle, D, J., Crouch, S. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJr%2C+Ingle+%22Spectrochemical+analysis%22">Spectrochemical analysis</a>. , Prentice Hall. Englewood Cliffs, NJ. XV-590 (1988).</li>
<li>Van Lancker, M., Gheyssens, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+four+frequently+used+assays+for+quantitative+determination+of+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Lett%22%5BJournal%5D)">A comparison of four frequently used assays for quantitative determination of DNA.</a> Anal. Lett. 19, 615-623 (1986).</li>
</ol>

Philippe Desjardins e Debra Conklin são empregados por produtos Thermo Scientific NanoDrop, Inc, que produz os instrumentos utilizados neste artigo.

Os protocolos de quantificação aqui apresentados são baseados no mais aceita microvolume sistemas. Tais sistemas fornecem alternativas práticas para a metodologia de quantificação de ácidos nucleicos tradicionais, que contam com maiores volumes de amostra e do uso de aparelhos de contenção. NanoDrop microvolume tecnologia emprega um sistema de retenção de amostra que se baseia nas propriedades de tensão de superfície da amostra que está sendo medido para formar uma coluna de líquido. É essencial que a amostra entra em contato com a superfície superior e inferior de medição óptica para a formação de coluna adequada. Se em algum momento os resultados da medição não parece ser preciso ou não reprodutíveis, o mais provável é o resultado da heterogeneidade da amostra ou quebra de coluna líquida. Detergentes e álcool isopropílico não são recomendados agentes de limpeza, pois podem descondicionar as superfícies de medição pedestal. Um pedestal incondicionada ocorre quando as propriedades de superfície hidrofóbica do pedestal ter sido comprometida, resultando em um achatamento da gota de amostra. Pedestais incondicionado pode levar à quebra da coluna de líquido durante a medição. <img src="/files/ftp_upload/2565/2565fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Incondicionado superfície é caracterizada por um achatamento de uma gota de água. Superfícies pedestal Uncondtioned podem ser recondicionados usando compostos Pedestal NanoDrop Recondicionamento (PR-1, os produtos Thermo Scientific NanoDrop). Uma fina camada de composto de recondicionamento é aplicada às superfícies pedestal superior e inferior, deixa-se secar para ~ 30 segundos, em seguida, esfregou fora de usar um pano limpo, sem fiapos, limpe a seco laboratório. Um estado com sucesso recondicionados é caracterizada por uma gota de água beading acima quando aplicados à superfície pedestal inferior. <img src="/files/ftp_upload/2565/2565fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Recondicionados Uma superfície é caracterizada por uma beading de uma gota de água. Sistemas de quantificação Microvolume reduzir significativamente o consumo de amostra e aumentar drasticamente a faixa de concentração, quando comparado aos sistemas de quantificação mais tradicionais. Embora a quantificação microvolume tem freqüentemente se tornado uma tecnologia que permite em circunstâncias envolvendo massa celular limitados, tais como biópsias de agulhas e laser de captura de microdissecção, a eficiência ea facilidade de utilização desta metodologia tornou um alternativas amplamente aceitas para os métodos tradicionais de quantificação de ácidos nucleicos mesmo quando a amostra é abundante.

<table><tbody><tr><td>NanoDrop 2000c</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>ND-2000C</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 3300</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>ND-3300</td><td></td></tr></tbody></table>

nanodrop quantificação microvolume de Ácidos nucléicos

NanoDrop Microvolume Quantitation of Nucleic Acids

Ensaios de biomolecular estão continuamente a ser desenvolvido, que utiliza quantidades progressivamente menores de material, muitas vezes impossibilitando o uso de cubeta convencional baseada em instrumentos para quantificação de ácidos nucleicos para aqueles que podem realizar quantificação microvolume. O NanoDrop microvolume sistema de retenção de amostra (Produtos NanoDrop Thermo Scientific) funções através da combinação de tecnologia de fibra óptica e propriedades tensão natural da superfície para captar e reter pequenas quantidades de amostra independente de aparelhos de contenção tradicionais, como tinas ou capilares. Além disso, o sistema utiliza comprimentos de caminho mais curto, que resultam em uma ampla gama de medições da concentração do ácido nucléico, essencialmente, eliminando a necessidade de realizar diluições. Reduzindo o volume de amostra necessário para análise espectroscópica também facilita a inclusão de etapas adicionais de controle de qualidade em todo muitos fluxos de trabalho molecular, aumentando a eficiência e, finalmente, levando a uma maior confiança nos resultados a jusante. A necessidade de análise de alta sensibilidade fluorescentes de massa limitada também surgiu com os recentes avanços experimentais. Usando a mesma tecnologia de retenção de amostra microvolume, medições fluorescentes pode ser realizada com 2 mL de material, permitindo fluorescentes requisitos ensaios volume a ser reduzido significativamente. Microreactions tais de 10 mL ou menos são agora possíveis através de um fluorospectrometer microvolume dedicados. Dois protocolos microvolume quantificação de ácidos nucleicos será demonstrado que o uso de sistemas integrados de retenção de amostra como alternativas práticas para cuvete tradicionais baseados em protocolos. Primeiro, um método de absorção direta A260 usando um espectrofotômetro microvolume é descrito. Isto é seguido por uma demonstração de um método baseado em fluorescência que permite redução de volume reações de fluorescência com uma fluorospectrometer microvolume. Estas novas técnicas permitem a avaliação das concentrações de ácido nucléico que variam de 1 pg / mL a 15.000 ng / mL com o consumo mínimo de amostra.

O uso de sistemas NanoDrop microvolume como alternativas práticas e eficientes para a metodologia de quantificação de ácidos nucleicos tradicional é descrito através da demonstração de dois protocolos microvolume quantificação de ácidos nucleicos.

NanoDrop quantificação Microvolume de Ácidos Nucléicos

Ensaios biomoleculares que utilizam quantidades progressivamente menores de material estão em constante desenvolvimento, o que frequentemente impossibilita o uso de métodos convencionais...

O sistema de retenção de amostras NanoDrop é uma tecnologia inovadora que utiliza a tensão superficial inerente dos líquidos para segurar e medir amostras de volume micrométrico entre dois pedestais ópticos, sem o uso de QTS ou capilares. Tão pouco quanto um microlitro de amostra é pipetado diretamente sobre a superfície óptica inferior. Ao fechar o braço do espectrômetro, forma-se uma coluna líquida entre os pedestais ópticos superior e inferior.Devido à tensão superficial que forma um caminho óptico vertical, o comprimento do caminho vertical pode mudar automaticamente em tempo real durante a medição. A redução do comprimento do caminho permite a medição de concentrações mais altas, eliminando efetivamente a necessidade de realizar diluições na maioria das amostras de ácidos nucleicos. Além disso, o sistema de retenção de amostra acelera o processo experimental com uma limpeza rápida, que consiste simplesmente em limpar as superfícies ópticas com um lenço laboratorial.Hoje demonstraremos dois procedimentos para determinar a concentração de ácidos nucleicos utilizando instrumentação de microvolume da Thermo Scientific. O primeiro protocolo é uma medição direta de ácido nucleico usando o espectrofotômetro NanoDrop 2000C. O segundo protocolo é uma medição indireta de ácido nucleico por fluorescência utilizando o fluoroespectrômetro NanoDrop 3300.Para começar, limpe as superfícies ópticas superior e inferior do sistema de retenção de amostra do espectrofotômetro de microvolume pipetando de dois a três microlitros de água desionizada limpa sobre a superfície óptica inferior. Feche o braço de alavanca, garantindo que o pedestal superior entre em contato com a água desionizada. Levante o braço de alavanca e limpe ambas as superfícies ópticas com um lenço de laboratório limpo, seco e livre de fiapos.Em seguida, abra o software NanoDrop e selecione o aplicativo para ácidos nucleicos. Use uma pipeta calibrada de pequeno volume para realizar uma leitura em branco, dispensando um microlitro de tampão sobre a superfície óptica inferior. Abaixe o braço da alavanca e selecione "branco" no aplicativo para ácidos nucleicos.Após a conclusão da medição do branco, limpe ambas as superfícies ópticas com um lenço de laboratório. Como antes, escolha a constante apropriada para a amostra que será medida. Em seguida, dispense um microlitro da amostra de ácido nucleico sobre o pedestal óptico inferior e feche o braço de alavanca.Como a medição é independente de volume, a amostra precisa apenas preencher a lacuna entre as duas superfícies ópticas. Para realizar uma medição, selecione "medir" no software da aplicação; o software calculará automaticamente a concentração de ácidos nucleicos e as razões de pureza. Após a medição da amostra, revise a saída espectral. Uma amostra típica de ácido nucleico apresentará um perfil muito característico.Indicadores espectrais de uma amostra de baixa qualidade incluem picos de comprimento de onda no vale e no pico de 260 nanômetros. Fontes comuns de contaminantes associadas a técnicas específicas de isolamento de ácidos nucleicos incluem fenol, triol e extração por coluna. No caso da extração com fenol-triol, a contaminação por reagentes residuais pode ser indicada por espectros anormais entre 220 e 240 nanômetros, bem como por deslocamentos na região de 260 a 280 nanômetros.Por outro lado, a guanina residual da extração em coluna pode contribuir para um pico próximo a 230 nanômetros e uma mudança no vale de 230 nanômetros para aproximadamente 240 nanômetros. Para avaliar com precisão a pureza da amostra, a razão 2 62 80 e a razão 2 62 30 devem ser analisadas em conjunto com a qualidade espectral geral. Ácidos nucleicos puros normalmente apresentam uma razão 2 62 80 de aproximadamente 1,8 para DNA e aproximadamente 2,0 para RNA.Essa proporção depende do pH e da força iônica do tampão utilizado para realizar as medições do branco e da amostra. O fluoro espectrômetro Banana drop 3, 300 emprega o mesmo sistema patenteado de retenção de amostra em microvolume do espectrofotômetro NanoDrop 2000 C. Com as medições de fluorescência realizadas com apenas um microlitro de amostra, o usuário escolhe um dos três LEDs como fonte de excitação, que emite luz horizontalmente sobre a amostra.A fluorescência subsequente da amostra é então coletada em um ângulo de 90 graus verticalmente em um espectrômetro interno. Para demonstrar a quantificação de ácidos nucleicos em microvolume com alta sensibilidade utilizando o NanoDrop 3300, um kit de fluorescência Pico Green é usado, iniciando o equilíbrio térmico dos padrões do kit e de todas as amostras de ácidos nucleicos à temperatura ambiente. As amostras fluorescentes são sensíveis à luz e devem ser mantidas em tubos âmbar ou envoltos em alumínio.Prepare uma quantidade suficiente de tampão XTE para todos os padrões e amostras a serem medidas, bem como para a solução de trabalho de pico verde necessária. Prepare o tampão XTE diluindo o tampão 20 XTE fornecido com água livre de núcleos, conforme o protocolo do fabricante. Os volumes de reação podem variar de 200 microlitros a apenas 10 microlitros.Neste exemplo, vamos preparar volumes de reação de 10 microlitros. Em seguida, prepare padrões de DNA de dupla fita diluídos em série e tubos ou frascos livres de nucleases. Isso cobrirá a faixa de concentração esperada das amostras de DNA desconhecidas.Transfira cinco microlitros de cada um dos padrões de DNA de dupla fita diluídos para tubos individuais rotulados, livres de nucleases e protegidos da luz com revestimento âmbar ou papel alumínio. Em seguida, alíquota cinco microlitros de cada amostra de DNA de dupla fita de interesse em tubos protegidos da luz de forma apropriada. Após o preparo da solução de trabalho Pico Green de acordo com o protocolo do fabricante, adicione um volume igual dessa solução a cada tubo contendo o padrão de DNA de dupla fita ou a amostra de DNA de dupla fita, neste caso, cinco microlitros.Combine volumes iguais de um tampão XTE e da solução de trabalho Pico Green. Para preparar o controle negativo, que serve como solução de referência. Misture bem o conteúdo de cada tubo por pipetagem suave e deixe incubar à temperatura ambiente por cinco minutos.Todos os padrões e amostras devem ser equilibrados à mesma temperatura antes da medição, pois o sinal fluorescente é afetado pela temperatura. Para preparar o instrumento e realizar as medições, primeiro limpe as superfícies inferior e superior do sistema de retenção da amostra, pipete de dois a três microlitros de água desionizada sobre a superfície óptica inferior próxima. Em seguida, abra o braço da alavanca e seque os pedestais superior e inferior com um lenço laboratorial limpo e livre de fiapos.Certifique-se de que as superfícies estejam livres de fiapos antes de prosseguir. Pois os fiapos podem exibir fluorescência na presença de uma fonte de excitação e podem interferir na medição. Abra o software do instrumento.Selecione a aplicação para ácidos nucleicos e escolha a opção de DNA de dupla fita com pico verde. Pipete dois microlitros de XTE 1X para o pedestal inferior. Feche o braço da alavanca e selecione "branco" no campo de software do instrumento. Após a conclusão do branco, remova com papel absorvente a solução do branco de ambas as superfícies do sistema de retenção de amostra.Em seguida, misture a solução de referência por pipetagem suave utilizando ponteiras de baixa retenção. Pipete dois microlitros da solução de referência sobre o pedestal inferior e feche o braço da alavanca. Selecione referência na guia padrões e escolha as unidades desejadas.Clique em medir para iniciar o ciclo de medição. Quando o ciclo de medição estiver concluído, abra o braço da alavanca e seque completamente as superfícies do sistema de retenção da amostra. Meça até cinco réplicas do referencial usando um Eloqua novo para cada réplica.Repita o processo para os padrões adicionais para construir uma curva padrão. Até sete padrões podem ser utilizados. O software foi projetado para armazenar até cinco réplicas para cada padrão.As réplicas dos padrões são médias para gerar uma curva padrão a partir da qual as concentrações das amostras são determinadas automaticamente. Após a conclusão da curva padrão, selecione a guia amostras, insira as informações correspondentes aos IDs das amostras e meça cada amostra desconhecida. Uma curva válida indica que o número mínimo de padrões foi atendido.A concentração de DNA é determinada automaticamente com base na curva padrão. A instrumentação NanoDrop de volume micro pode determinar a concentração de ácidos nucleicos por meio de medições diretas em A260 ou por métodos fluorométricos indiretos. Os espectrofotômetros NanoDrop também podem ser usados para quantificar proteínas utilizando a absorvância direta em A280 ou ensaios cromatômicos para proteínas.

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Biology

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