Name: Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Aprenda técnicas microcirúrgicas de ligadura coronária temporária e permanente e injeção intramiocárdica em corações de camundongos. Este método permite estudar lesão por isquemia/reperfusão e avaliar recuperação cardíaca.

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Gostaria de agradecer o Departamento de Pesquisa e Pós-Graduação para fornecer fundos para apoiar minha pesquisa e do Departamento de Medicina Comparativa de sua vigilância e assistência. Gostaria também de reconhecer o Departamento de Fisiologia, pelo seu apoio e orientação, bem como a estudantes e técnicos no meu laboratório por sua ajuda. Por último, gostaria de agradecer a meu mentor pós-doutoramento, Dr. Charles E. Murry, pela oportunidade de treinamento durante os quais eu aprendi a microcirurgia mouse.

<ol><li> Instrumentos cirúrgicos estéreis (Tabela 1) e 3 aplicadores "ponta de algodão são colocados em uma underpad estéril. O esterilizador talão (Germinator 500) está ligado. </li><li> Camundongos (idade:&gt; 6 semanas; peso:&gt; 18g) são anestesiados com uma injeção ip de 20μl / g de BW tribromoetanol (250mg/kg; duração - cerca de 40 minutos). </li><li> Quando os ratos não respondem aos pés pitada, um lubrificante estéril (Lágrimas renovada) é aplicada para os olhos para protegê-los da dessecação e do lado esquerdo do peito é revestido com creme depilatório (por exemplo, Nair) para remover pêlos da pele. </li><li> O creme depilatório é lavado com água corrente quente e betadine / álcool swabbing é usado para desinfectar a área cirúrgica. </li><li> O mouse é colocado sobre uma almofada deltaphase quente isotérmica que é fixado a uma tabela de plexiglass. Cada membro é imobilizado com fita e uma linha grossa é colocada horizontalmente sob os dentes de cima para segurar a mandíbula superior no lugar. </li><li> A tabela é posicionada na vertical e uma luz de fibra ótica é brilhava diretamente sobre a região do pescoço para iluminação transesofágico. Isto exige a colocação precisa de tal forma que a abertura da garganta é visto como um orifício bem iluminado, permitindo assim que a traquéia para ser visualizado para facilitar a inserção do tubo de PE. </li><li> O tubo é então conectado ao ventilador (ligado a um 95% O 2 / 5% CO 2) para administrar ventilação com pressão positiva constante (TOPO ventilador; taxa de 125 respirações / min; pressão de pico inspiratório 10-12 cmH 2 O; nota * : As configurações variam de acordo com a tensão e gênero 1-3). Uma vez que a ventilação é confirmado pelos movimentos do tórax síncrona, a conexão é fixada ao bloco com fita para evitar a extubação durante a cirurgia. </li><li> Utilizando uma pinça dentada para puxar a pele para cima e longe do peito, uma lâmina de bisturi n º 10 estéril unida a um punho # 3 bisturi é usado para fazer uma incisão 1,5 centímetros na pele paralelamente ao esterno. </li><li> Microtesoura Vanna curvas são utilizadas para cortar os músculos peitorais e faça um pequeno furo no músculo intercostal. </li><li> Reta, microtesoura blunt são usados ​​para cortar três costelas. </li><li> Um espéculo oftalmológico pediátrico 9 milímetros é usada para retrair a caixa torácica. </li><li> Usando a pinça curva, puxar o pericárdio longe do coração e usar a pinça dentada gentilmente rasgá-lo aberto. </li><li> Usando o porta-agulha Castroviejo, um ponto seis milímetros cônico tópicos 08/03 a agulha de sutura 8-0 polietileno debaixo da descendente anterior esquerda da artéria coronária (ao longo do eixo do coração) perpendicular a ele. <ol><li> Para uma ligadura temporária que pode ser removido para a reperfusão cronometrados, um pedaço de 0,5 estéril de um centímetro PE90 é colocado sobre o coração em paralelo à artéria coronária. A sutura, que tem sido previamente enrolado sob a artéria coronária, é então ligado à tubulação. No momento em que está para ser lançado, a ligadura está solto. Isto pode ser repetido conforme desejado eo tempo de oclusão / reoclusão podem ser modificados 4. Dependendo da duração do protocolo e do tipo de anestesia utilizada, a suplementação pode ser necessária. </li><li> Para uma oclusão permanente, a ligadura atado sob a artéria coronária é simplesmente amarrado. Branqueamento e discinesia são aparentes e no final longo da sutura é cortado 10/05. </li><li> Para injeção intramiocárdica (s), uma seringa Hamilton estéril com uma agulha estéril calibre 30 chanfrada é introduzido na base do coração acima da área de lesão no lado direito da ligadura. A agulha é então avançado para a área de lesão e retiradas ligeiramente de modo que o bisel pode ser visto aproximadamente na zona de fronteira. Um pouco da solução na seringa (2-3μl) é injetado no coração e na agulha é mantida no lugar. A seringa é retirado outro 1-3mm eo restante da solução é injetada. A seringa é mantido no lugar até que a bolha que é formado pela solução se dissipa. A agulha é então removido. Se houver algum sangramento, um aplicador com ponta de algodão é suavemente pressionado no local de inserção da agulha até que o sangramento pare 5-7. </li></ol></li><li> Uma vez que as manipulações do miocárdio são completos, os afastadores de costela são removidos ea cavidade torácica é fechada com suturas de colchão usando 2-3 6-0 surgipro. </li><li> Dois-três suturas de colchão são feitas então para fechar os músculos peitorais, 1-3 gotas de 0,25% 01:10 marcaína em salina estéril (mouse 0.1ml/25g) é aplicada ao músculo e depois 2-3 suturas de colchão são feitas para fechar a pele. </li><li> O mouse é removido do ventilador. Uma vez que a respiração rítmica, rápida e superficial é verificada, o mouse pode ser extubado. </li><li> 0,5 ml solução salina estéril morna é injetado no espaço subcutâneo dorsal eo mouse é colocado sobre uma almofada de aquecimento em uma gaiola até que ele recupere a mobilidade (mínimo de 1 hora). </li><li> Para experimentos de sobrevivência, os ratos são colocados de volta em suas gaiolas e voltou para o viveiro até o momento do sacrifício. Durante os primeiros dois dias, o alimento é umedecidocolocado no chão da gaiola para facilitar a alimentação (para que eles não têm que chegar até o que pode causar dor) e buprenorfina deve ser administrada a cada 6-12h. Cuidados pós-operatórios também inclui monitoramento diário para a primeira semana para verificar a mobilidade adequada, higiene e hábitos alimentares. </li><li> Os instrumentos cirúrgicos são limpos com etanol e inserido no talão de esterilização antes da próxima cirurgia. </li><li> No momento do sacrifício, os ratos são anestesiados com pentobarbital sódico (65mg/ml; 55-65 mg / kg). Quando um plano adequado de anestesia é alcançado, a cavidade torácica é aberta. </li><li> Enquanto o coração ainda está batendo, uma seringa com uma agulha de calibre 23, contendo cloreto de potássio a frio (KCl, 30 mm) ou 2,3-butanedione monoxime (BDM; 10mM) é usado para perfurar a região posterior basal do ventrículo ea solução é lentamente injetado na câmara até que o coração está preso em diástole. </li><li> Uma vez que o coração é removido, uma seringa contendo PBS é usado para lavar retrogradamente perfundir o coração para remover todo o sangue que resta. Aguda para estudos, no final do período de reperfusão, o LAD é re-ligado no ponto original de oclusão. Uma solução contendo 1% de azul de Evan é injetado na aorta. Uma vez que o coração é extraído, é cortado transversalmente em 3 secções de igual espessura, incubados em 1% de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio e fotografada para análise morfométrica 11. Para estudos crônica, o coração é então imerso em fixador, então processadas e incluídas de acordo com procedimentos de rotina. Lâminas podem ser coradas histologicamente e fotografada para análise morfométrica (usando Scion, NIH Image J, ou Image Pro Plus) 9,10,12. </li></ol> Resultados representativos: Quando feito corretamente, a taxa de sobrevivência em camundongos (masculino: idade 8-10 semanas, 22-28g; feminino: idade 10-12 semanas, 20-26g) são: mais de 90% no infarto agudo de isquemia / reperfusão isquêmica e experimentos pré-condicionamento, sobre 85% em estudos de ligação permanente da artéria, e aproximadamente 80% para injectáveis ​​intramiocárdico. Como a lesão precoce é mais facilmente visível por alterações metabólicas e não estruturais, a determinação do tamanho do infarto em isquemia / reperfusão e isquemia experimentos pré-condicionamento é realizado através da infusão de 1% de corante Evan é azul para a aorta que perfundir o coração que não é fornecido pela LAD ( Figura 1A). Uma vez que o coração é removido e cortados transversalmente ao meio, o tecido é incubado em solução a 1% de cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio para medir o tamanho do infarto (Figura 1B). As áreas são medidos usando Scion ou NIH software de imagem que pode ser calibrado com um micrômetro fotografada com a mesma ampliação. Esses números são usados ​​para calcular a área em risco / ventrículo esquerdo e infarto do tamanho / área de risco 11. Diferenças tensão pode resultar em variações no peso corporal eo tamanho do coração e por isso deve ser tomado cuidado para normalizar essas medidas ao peso do coração, peso corporal, ou comprimento da tíbia para fins comparativos. Resultados da artéria permanente ligadura em bruto mudanças estruturais, tais como necrose, parede desbaste, e dilatação das câmaras. Comparação dos efeitos do tratamento e / ou tempo do tamanho do infarto e necrose em relação ao ventrículo esquerdo, área da câmara, parede septal do ventrículo esquerdo e espessura da parede livre no modelo de oclusão definitiva (Figura 2A) também pode ser medida usando Scion ou NIH imagem software. Colágeno com coloração picrosirius red / fast verde (Figura 2B) pode ser usado para medir a fibrose difusas que se correlaciona com os índices funcionais de 8-10 enrijecimento da parede. A imagem na Figura 3 representa a distribuição da solução 6ul (azul de Evan) injetado na zona de fronteira do coração após ligadura da artéria permanente. Note que ele prossegue na direção da lesão, bem como para a base e também transmuralmente. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Evan A. 's Azul injetado na aorta antes da excisão. Esta imagem mostra as regiões perfundidas do coração (manchado) e da área obstruída (sem manchas). Evan B.' s azul e coloração TTC após lesão de isquemia / reperfusão aguda. Esta é uma imagem representativa (20x) mostrando a distribuição de corante azul, que manchou o unoccluded regiões, bem como TTC coloração de tecido metabolicamente viáveis ​​(vermelho). Áreas de necrose não mancham e assim eles permanecem pálidos (esboçado). <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. A. hematoxilina e eosina. Esta é uma imagem representativa (20x) de coloração H &amp; E de um coração de rato cortados transversalmente através da região do infarto de 4 dias pós-infarto do miocárdio (20x). A * denota necrose tecidual, setas apontam para tecido de granulação, RV = ventrículo direito e LV = ventrículo esquerdo. B. Picrosirius vermelho e verde rápido mancha. Esta é umaimagem representativa (20x) de picrosirius red / coloração verde rápida de uma secção transversal de coração de rato com 4 semanas pós-infarto do miocárdio. O citoplasma verde manchas e fibras de colágeno são vermelhos. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Evan de distribuição de corante azul mancha após injeção intramiocárdica 6ul. Esta é uma imagem representativa mostra a distribuição global e transmural de corante azul de Evan todo o coração após a injeção intramiocárdica 6ul na zona fronteiriça imediatamente após a ligadura da artéria coronária (12x).

Este protocolo foi aprovado por animais e está em conformidade com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pela Institutional Animal Care e do Comitê Use na East Carolina University.

Doença cardíaca coronária continua a ser um epidemiologicamente e fiscalmente problema de saúde pública. Pesquisa básica considerável ainda é necessária para compreender os mecanismos pelos quais lesão e remodelação proceder e como terapêutica em potencial podem modular estes processos se eles estão a ser desenvolvida para uso clínico. Roedores são mais comumente usados ​​e da ampla gama de camundongos geneticamente modificados disponíveis torna essa espécie um modelo mais atraente. Embora existam diferenças entre ratos e outras espécies, há muitas vantagens em um modelo murino. Uso de um escopo simples dissecação ou lupa e condições bem iluminado permitir a vasculatura para ser facilmente visto (para anatomia detalhada da vasculatura, ver Salto-Tellez et al., 2004 13). Para reduzir o risco de mortalidade pós-operatória, é muito importante para evitar a ruptura navios de grande porte desde que o volume total de sangue de um rato 25g é inferior a 2 ml 14. No caso de sangramento excessivo ocorre, a aplicação de pressão suave ou cauterização identificar pode ser usado para parar o sangramento. Este procedimento também pode ser modificado em uma variedade de maneiras. Por exemplo, ratos podem ser anestesiados com isoflurano, ketamina / xilazina ou sódio pentobarbital e seleção apropriada é determinada pela duração do protocolo de 15-18. O reflexo toe pitada é o índice mais utilizado da profundidade da anestesia. Além disso, para melhorar a probabilidade de sobrevivência a longo prazo, alguns investigadores usam medicamentos antiarrítmicos como a lidocaína para reduzir a incidência de arritmias letais 19,20 no entanto, deve-se levar em conta que esta foi recentemente demonstrado ter propriedades anti-apoptótica em uma aguda modelo 21. Além disso, para reduzir a dor pós-operatória, analgésicos, como a buprenorfina pode ser administrada nas primeiras 48 horas após a cirurgia 3,16,17,22,23. Para manter a temperatura corporal durante a cirurgia (especialmente para os protocolos mais), uma sonda retal em série com uma almofada de aquecimento é muitas vezes usado no lugar do pad isotérmica. Para isquemia / reperfusão e / ou isquêmicos pré ou pós-condicionamento: a duração da oclusão (s) e reperfusão (s) podem ser alterados, por oclusão permanente, o tamanho do infarto pode ser modificado por ajustar a localização da ligadura; e para injectáveis ​​intramiocárdica (células por exemplo, proteínas), pode haver locais de injeção e 03/01 o volume por injeção pode ser de até 15 24 mL. Se as células estão a ser injetado, o calibre da agulha utilizada (geralmente 26-30) 5,25,26 deve ser escolhido com base no tamanho das células de modo que o diâmetro interno da agulha é grande o suficiente para evitar sheering. Para evitar confunde devido a processos inflamatório desencadeado pela cirurgia, alguns pesquisadores têm relatado usando um laço que é manipulado ex vivo para ocluir e reperfundi os corações em um rato tórax fechado a qualquer momento após a cirurgia 27-29. Mais recentemente, Gao et al. 30 demonstraram que a oclusão temporária e permanente pode ser realizada sem a necessidade de ventilação e de alguns laboratórios começaram a usar ultra-som para realizar fechado no peito intramiocárdico injeções 25,31. Desde o primeiro estudo a demonstrar a viabilidade da ligadura da artéria coronária em ratos foi publicado pela Johns e Olson em 1954 32, muitos outros adotaram este modelo e modificou-a para estudar vários aspectos da lesão miocárdica ea remodelação 3,33-45. A natureza de ratos em termos de tamanho, a capacidade reprodutiva, e as despesas comparativamente menos para a compra e manutenção tornam esta espécie uma ferramenta atraente para uma ampla gama de estudos fisiológicos e fisiopatológicos. Como a miniaturização da tecnologia para imagens em avanços vivo 46-49, bem como meios para executar e analisar genômica e proteômica em grande escala, a seleção da droga, a eficácia de terapias baseadas em células e / ou proteínas, bem como biomateriais 50-64, combinado com a gama crescente de manipulações genéticas oferecidas pelo onipresente ou tecidos específicos camundongos transgênicos ou mutante / knockout, o modelo murino de infarto do miocárdio, sem dúvida, continuará a ser uma ferramenta valiosa na avaliação de lesão cardíaca aguda e remodelação a longo prazo. Portanto, há um valor inquestionável em ser capaz de realizar esses experimentos de forma confiável e reprodutível.

<table><tbody><tr><td>Tesoura Longa Vanna</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-159</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Dissecação Microcirúrgica</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-161</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas &amp;#8211; retas, com 1x2 dentes</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-205</td><td></td></tr><tr><td>Porta-lâmina de bisturi nº 3</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-64</td><td>Lâmina estéril nº 10</td></tr><tr><td>Pinzas &amp;#8211; curvas, com serrilhas</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-19</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura para Tecidos</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-410</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas Castroviejo</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-1828</td><td></td></tr><tr><td>Espéculo Ocular Cook</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-63</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II 8-0</td><td>Suture Express</td><td>VP-900-X</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Suture Express</td><td>8776</td><td></td></tr><tr><td>Sterilizador de Contas Germinator 500</td><td>Cellpoint Scientific</td><td>65369-1</td><td></td></tr><tr><td>Almofada isotérmica Deltaphase</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Hamilton - 25&amp;mu;l</td><td>Hamilton Co</td><td>80430</td><td></td></tr><tr><td>Agulha biselada, calibre 30</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Respirador</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr></tbody></table>

ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Modelos de camundongos são uma ferramenta valiosa para estudar lesões agudas e remodelamento crônico do miocárdio in vivo. Com o advento de modificações genéticas no organismo inteiro ou no miocárdio e uma variedade de materiais biológicos e/ou sintéticos, há um grande potencial para qualquer combinação desses elementos atenuar a extensão da lesão isquêmica aguda e impedir o início da insuficiência cardíaca decorrente do remodelamento miocárdico.
Aqui apresentamos os métodos e materiais utilizados para realizar com confiabilidade esta microcirurgia e as modificações envolvidas para estudos de oclusão coronariana temporária (com reperfusão) ou permanente, bem como injeções intramiocárdicas. Os efeitos sobre o coração que podem ser observados durante o procedimento e ao término do experimento, além da avaliação histológica, verificarão a eficácia.
Resumidamente, o preparo cirúrgico envolve anestesiar os camundongos, remover o pêlo do tórax e, em seguida, desinfetar a área cirúrgica. A intubação intratraqueal é realizada por meio de iluminação transesofágica com uma luz de fibra óptica. O tubo é então conectado a um ventilador. Uma incisão no tórax expõe os músculos peitorais, que serão cortados para visualizar as costelas. Em estudos de isquemia/reativação, um segmento de 1 cm de tubo de polietileno colocado sobre o coração é usado para amarrar o ligadura, permitindo personalizar a oclusão e a reperfusão. Para injeções intramiocárdicas, utiliza-se uma seringa Hamilton com agulha estéril biselada de 30 graus. Quando as manipulações miocárdicas são concluídas, a caixa torácica, os músculos peitorais e a pele são fechados sequencialmente. A analgesia por bloqueio de linha é realizada com marcaina a 0,25% em solução salina estéril, aplicada na camada muscular antes do fechamento da pele. Os camundongos recebem uma injeção subcutânea de solução salina e são colocados em uma câmara de aquecimento até que estejam em decúbito esternal. Em seguida, são devolvidos ao biotério e mantidos em condições padrão até o momento da coleta dos tecidos. No momento da eutanásia, os camundongos são anestesiados, o coração é paralisado em diástole com KCl ou BDM, lavado com solução salina e imerso em fixador. Posteriormente, são realizados procedimentos rotineiros de processamento, inclusão, corte e coloração histológica.
A entubação não cirúrgica de um camundongo e as manipulações microcirúrgicas descritas tornam este um modelo tecnicamente desafiador de aprender e obter reprodutibilidade. Esses procedimentos, combinados com a dificuldade em realizar manipulações consistentes do laço para oclusão(ões) temporizada(s) e reperfusão ou injeções intramiocárdicas, também podem afetar a taxa de sobrevivência, sendo assim essenciais a otimização e a consistência.

Numerosas manipulações genéticas e / ou injeções intramiocárdica de genes, proteínas, células e / ou biomateriais são sobrepostos sobre a dimensão do tempo em estudos de lesão de isquemia / reperfusão aguda e crônica em camundongos remodelação. Este vídeo ilustra os procedimentos de microcirurgia para isquemia / reperfusão, ligadura da artéria coronária permanente, e estudos de injeção intramiocárdica.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

Modelos murinos são ferramentas valiosas para estudar a lesão aguda e a remodelação crônica do miocárdio in vivo. Com o advento de modificações genéticas para...

O objetivo geral do experimento a seguir é demonstrar os métodos microcirúrgicos para realizar a ligadura temporária ou permanente da artéria coronária, bem como a injeção intra-miocardial no coração de camundongo. Isso é realizado primeiramente preparando e desinfetando a área cirúrgica. Em seguida, o camundongo é entubado com tubo PE 90 para fornecer ventilação com pressão positiva durante a toracotomia.Uma vez isolada, a artéria coronária pode ser ocluída temporária ou permanentemente. Além disso, uma substância pode ser injetada no coração. São obtidos resultados que mostram o grau de lesão imposta ao coração com base em pontos finais histológicos e morfométricos, marcadores proteicos em tecidos e soro, bem como índices funcionais.Meu nome é TKA Rag e estou no Departamento de Fisiologia da Brody School of Medicine da East Carolina University. O objetivo deste vídeo é demonstrar os procedimentos microcirúrgicos utilizados para a ligadura temporária e permanente da artéria coronária, bem como para a injeção intra-miocardial no coração de um camundongo. Para começar, coloque instrumentos cirúrgicos estéreis e aplicadores estéreis com ponta de algodão de três polegadas sobre um suporte estéril.Em seguida, ligue um esterilizador de instrumentos para que esteja pronto para esterilizar os instrumentos entre cirurgias individuais. Para preparar o animal para a cirurgia, aplique um lubrificante estéril nos olhos de um camundongo anestesiado. Em seguida, remova os pelos do lado esquerdo do tórax com um agente depilatório, como o nare.Limpe completamente o creme depilatório para evitar queimaduras químicas ou dermatite. Coloque o camundongo sobre uma placa isotérmica de fase delta fixada a uma mesa de plexiglass. Imobilize cada membro com fita adesiva e posicione um fio grosso sob os dentes superiores para manter a mandíbula superior no lugar.Limpe o local cirúrgico com Betadine e, em seguida, com álcool, por um total de três vezes. Utilize uma luz de fibra óptica para iluminar a região do pescoço, auxiliando na visualização da traqueia durante a inserção do tubo de PE. Após a iluminação, insira cuidadosamente o tubo pela boca.Conecte o tubo a um ventilador para administrar ventilação com pressão positiva. Uma vez confirmada a ventilação por meio de movimentos torácicos sincrônicos, fixe a conexão ao suporte com fita adesiva para mantê-la no lugar. Durante a cirurgia, use pinças dentadas para puxar a pele para cima e afastá-la do tórax e para fazer uma incisão de 1,5 centímetro na pele paralelamente ao esterno.Em seguida, use tesoura micro curva de Vana para cortar os músculos peitorais e fazer um pequeno orifício no músculo intercostal. Após retrair o músculo, use tesoura micro reta e romba para cortar três costelas. Utilize um espéculo para retrair a caixa torácica.Abra suavemente a bolsa pericárdica para visualizar o coração utilizando um porta-agulhas TRO Viejo e uma agulha de ponta cônica com fio, posicionando uma sutura de polietileno sob a artéria coronária descendente anterior esquerda para uma ligadura temporária que pode ser removida. Para reperfusão controlada no tempo, corte um pedaço de 0,5 a um centímetro de PE 90 e coloque-o sobre o coração. Paralelamente à artéria coronária, amarre a sutura que passa sob a artéria coronária ao tubo. Após um período de tempo determinado, afrouxe a ligadura para permitir a reperfusão; para realizar uma oclusão permanente, mantenha a ligadura fechada.A ligadura passada sob a artéria coronária é amarrada. Deve-se observar branqueamento e disquinesia. Corte a extremidade longa do fio para injeções intramiocárdicas, insira uma agulha estéril de calibre 30 na base do coração acima da área lesada, à direita da ligadura.Avance a agulha até a área da lesão e recue levemente para que a bisel fique visível aproximadamente na zona de fronteira. Injete uma pequena quantidade da solução e mantenha a agulha no lugar. Retire a seringa mais um a três milímetros e injete o restante da solução.Mantenha a seringa no lugar até que o sangue formado pela solução desapareça. Após o desaparecimento, remova a agulha. Se houver sangramento, pressione suavemente um aplicador com ponta de algodão sobre o local até que o sangramento pare.Após a conclusão das manipulações miocárdicas, remova os afastadores costais e feche a cavidade torácica com dois a três pontos em alforreia. Em seguida, feche os músculos peitorais com dois a três pontos em alforreia. Aplique uma a três gotas de 0,25% de corante em solução salina estéril sobre o músculo e utilize dois a três pontos em alforreia adicionais para fechar a pele.Retire o camundongo do ventilador e assegure uma respiração rápida e superficial rítmica. Injete 0,5 mililitros de solução salina estéril aquecida no espaço subcutâneo dorsal e coloque o camundongo em uma gaiola contendo um aquecedor até que recupere a mobilidade. Para experimentos de sobrevida, os camundongos são colocados de volta em suas gaiolas de origem e retornados ao biotério até o momento do sacrifício.Limpe os instrumentos cirúrgicos com etanol e insira-os no esterilizador de contas para se preparar para a próxima cirurgia para coleta de amostras para análise, isole o coração e puncione a região basal posterior do ventrículo com uma agulha contendo cloreto de potássio frio ou solução de dois três monóxido de butano dion. Injete lentamente a solução na câmara até que o coração seja arrestado em diástole. Remova o coração e realize perfusão com PBS para remover qualquer sangue remanescente.Uma vez perfundido, imergir o coração em fixador; o coração é então processado e incluído de acordo com procedimentos de rotina. A lesão aguda causada pela ligadura temporária pode ser visualizada por meio de coloração. Nesta imagem, o corante azul está distribuído nas regiões ocluídas do coração e a coloração TTC marca o tecido metabolicamente viável.Em vermelho, as áreas necróticas não são coradas e permanecem pálidas. Um software de imagem pode ser usado para calcular a área em risco em função do ventrículo esquerdo e a área de infarto em função da área em risco. Neste exemplo, um coração lesionado é cortado transversalmente pela região de infarto, quatro dias após o infarto miocárdico, e corado com hematoxilina, hematina e eosina.A estrela denota necrose do tecido, enquanto as setas indicam coloração do colágeno no tecido de granulação com prose. Vermelho sério, verde rápido pode ser usado para medir a fibrose intersticial, que se correlaciona com índices funcionais de rigidez da parede. Esta imagem de um coração de camundongo quatro semanas após infarto do miocárdio mostra o citoplasma em verde e as fibras de colágeno em vermelho.Esta série de imagens representa a distribuição de seis microlitros de solução de corante azul de Evans injetada na zona de fronteira do coração após a ligadura permanente da artéria. Observe que o corante se espalha na direção da lesão, bem como em direção à base, e também de forma transmural. Visualizar a artéria coronária e obstruí-la com confiabilidade é muito desafiador e exige muita prática para se tornar proficiente.É muito importante lembrar durante o procedimento de evitar perfurar os pulmões e, adicionalmente, evitar a extubação do animal durante as manipulações cirúrgicas.I.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra como usar um modelo rápido e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicas da isquemia miocárdica.

LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para gerar um modelo de infarto do miocárdio em camundongos ligando permanentemente a artéria coronária descendente anterior.

Gerando Modelo Murino de Infarto do Miocárdio: Um Procedimento Cirúrgico para Ligadura Permanente da Artéria Coronária Descendente Anterior em Modelo de Camundongo

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

Um modelo altamente reprodutível para infarto do miocárdio em camundongos com manipulações minimamente invasivas é descrito. O modelo pode ser facilmente executado, resultando em alta reprodutibilidade e taxa de sobrevida. Assim, o modelo descrito reduzirá o número de animais necessários conforme solicitado pelo princípio 3R (Substituição, Refinamento e Redução).

Minimal procedimento cirúrgico invasivo de induzir Infarto do Miocárdio em Ratos

A insuficiência cardíaca é a principal causa de hospitalização e uma das principais causas de mortalidade. Um modelo de ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior em camundongos é aplicado para investigar o remodelamento ventricular e a disfunção cardíaca pós-infarto do miocárdio. A técnica de medidas hemodinâmicas invasivas em camundongos é apresentada.

A ligação permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda em Ratos: Um Modelo de Remodelação pós-infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca

Fornecemos um método confiável para ligadura da artéria descendente anterior (DA) em um modelo de camundongo. Este método é comparativamente menos invasivo do que outros métodos, envolvendo intubação endotraqueal, abordagem de toracotomia do lado esquerdo e toracocentese. Este método pode ser usado como modelo para infarto agudo do miocárdio (IM) agudo e crônico.

Murino Descendente Anterior Esquerda (LAD) ligação da artéria coronária: um modelo melhorado e simplificado para Infarto do Miocárdio

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Este artigo demonstra um modelo para estudar o remodelamento cardíaco após o cryoinjúria miocárdico nos ratos.

Um modelo Crioferimento para estudar infarto do miocárdio no mouse

Apresenta-se aqui um procedimento cirúrgico para ligadura permanente da artéria coronária esquerda em camundongos. Este modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

Aprenda técnicas microcirúrgicas de ligadura coronária temporária e permanente e injeção intramiocárdica em corações de camundongos. Este método permite estudar lesão por isquemia/reperfusão e avaliar recuperação cardíaca.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

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