Name: Avaliar buraqueira, Construção Nest, e Hoarding em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-05T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprenda a avaliar comportamentos típicos de espécie em camundongos, incluindo buraqueira, construção de ninho e acumulação. Este método auxilia pesquisadores a estudar alterações neurológicas e doenças como Alzheimer.

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Wellcome Trust para a concessão de financiamento de Acesso Livre à Universidade de Oxford. Robert Deacon é um membro do grupo de Oxford OXION, financiado pelo Wellcome Trust conceder WT084655MA.

1. Burrowing 1. Aparelho Projetos recipiente vários foram julgados (por exemplo uma jarra de metal que pode ser facilmente limpo, mas os ratos estavam relutantes em entrar nele). Eventualmente foi descoberto que um comprimento de downpipe de plástico (como ligado ao calhas nas casas) elevou ligeiramente em uma extremidade para evitar deslocamentos acidentais (não-intencional) de pelotas de comida e selado, no outro extremo, foi um eficiente aparelho. Burrows agora são feitas de plástico downpipe, 68 mm de diâmetro, cortado em comprimentos de 20 centímetros de comprimento (Figura 1). Uma extremidade é selada com um bujão de 12 mm de média densidade MDF (MDF). (A proteção respiratória é aconselhável quando se trabalha com mdf). Para limpeza e impermeabilização, um composto adesivo à prova d'água de aroeira pode ser aplicada às superfícies, dentro e fora do mdf, bem como servir de cola-lo para dentro do tubo burrowing. Parafusos de máquina (5 cm de comprimento) são usadas para elevar a outra extremidade of tubo de três centímetros do chão. Dois buracos são perfurados a 1 cm da extremidade aberta do tubo burrowing em um ângulo de 90 ° e os parafusos inseridos e apertados 4. O diâmetro do burrows é provavelmente crítico; Schmid-Holmes et al 19 observaram que os ratos in the wild "toca limpa" principalmente a partir de tocas semelhante em tamanho aos nossos entes artificial.. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Um rato em um tubo de escavação. 2. Procedimento <ol><li> Habituação Burrowing normalmente é espontânea, mas há um elemento de aprendizagem determinadas. O processo de aprendizagem é reforçada pela facilitação social. Portanto, coloque uma toca cheia durante a noite na gaiola grupo de ratos que são mais tarde a ser testado com um tratamento. Cada escavação é preenchida com 200 g de pellets de alimentos normalmente fornecidos como dieta. (Trata-se de tele tipo comprimido densa de dieta, se uma dieta "expandido" está em uso o burrow manterá menos de 200g). Experimentadores deve levar em consideração fatores ao selecionar um substrato burrowing. Se os ratos estão no racionamento de alimentos (por exemplo, para motivá-los para executar uma tarefa labirinto simultâneos de aprendizagem) não-alimentares substâncias podem ser utilizadas, por exemplo, bolas de argila, como usado para a linha da superfície do solo em vasos de plantas indoor; ervilha cascalho (pedras pequenas ~ 1 cm de diâmetro) e areia. Telha de ervilha e areia, sendo três vezes mais pesado que pellets de alimentos, são substitutos úteis para pelotas do alimento se os ratos estão cavando muito vigorosamente, para evitar um "efeito teto". </li><li> Baselining Run (preferencialmente dois) de base burrowing testes 48 h para além da mesma maneira como será feito para o teste após o tratamento proposto. O teste é ideal começou por volta das 16:00 se os ratos estão alojados em um 0700-1900 h ciclo claro-escuro. Este é um momento delicadopara testar, pois eles não são normalmente acordados neste momento e burrowing começa mais lentamente do que se fossem assim para a fase escura e, conseqüentemente, muito ativa. Duas horas após o início, um "instantâneo" medição é feita do peso dos alimentos escavados; a toca é esvaziado em um recipiente tarado e pesado e os pellets substituído na toca que é colocada de volta na gaiola. Se o mouse está na toca, apenas suavemente derramá-lo eo conteúdo para o recipiente de pesagem e substituir o mouse na gaiola. O peso burrowed menos duas horas é então calculada por subtração a partir do original 200 g. A leitura final é tomada na manhã seguinte. Tempo não é crítico como os ratos terão voltado a dormir (muitas vezes na toca) e não são mais ativamente burrowing. Use as 2 h medição tomadas no segundo julgamento para formar grupos equilibrados para o desempenho de linha de base. Como burrowing aumenta com a prática 17, baselining também ajuda os ratos para alcançar asymp mais estáveldesempenho totic que revela os efeitos do tratamento melhor. </li><li> Ensaio Para testes, após os tratamentos são administrados os ratos são submetidos ao teste burrowing exatamente o mesmo que na fase de linha de base. Se o teste burrowing é para ser usado cronicamente, recomenda-se que pelo menos 48 h separar os testes para evitar um declínio no desempenho devido ao excesso de exposição ao procedimento. </li><li> Nota NÃO substitua o alimento burrowed no chão da gaiola para a toca. Mesmo que o mouse não tem nada de burrowed, execute o procedimento de pesagem como você faria se tivesse ocorrido burrowing; a perturbação causada por peso tende a estimular o comportamento, e os ratos que já enterrou algumas das substrato, muitas vezes, começar cavando com vigor renovado após a pesando processo. </li></ol> 2. Resultados esperados C57 ~ BL / 6 ratos toca normalmente em torno de 70 g nas duas primeiras horas, e perto de 200 gdurante a noite. Hipocampo ratos lesionados, muitas vezes burrow menos de 5 g 11 (Figura 2). Doença de príon inibe burrowing 1,2, assim como a administração de lipopolissacarídeo 20. Buraqueira pode detectar a doença priônica (scrapie) em 10-12 semanas após a injeção de homogenato de cérebro de doentes, enquanto que os sinais clínicos aparecem apenas em 22 semanas 13. (Figura 3). Buraqueira tem se mostrado sensível às diferenças tensão 15 e knock-out de subunidades de íons de potássio canal 10. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Peso de pelotas de alimento (medianas e intervalos interquartis) burrowed em duas horas pelo controle e hipocampo lesado camundongos. O último burrowed significativamente menos do que os controles (P = 0,0001). <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Peso dapelotas do alimento (meios) burrowed durante a noite por e controle de scrapie camundongos infectados. Buraqueira aumenta (com prática) em ambos os grupos de semana 7-10 pós-injeção, mas a partir de 12 semanas diminui burrowing no grupo scrapie ea diferença entre os grupos torna-se estatisticamente significativa (superior a dois erros padrão da média). 3. Discussão Nós testamos burrowing em outras espécies de roedores - ratos, gerbils, hamsters e ratos egípcios spiny 8. Todos, mas este último poderia ser induzido a quantidades substanciais burrow de substratos terrestres como cascalho ou areia, mas burrowing de pelotas de comida era muito menos, mesmo depois de vasta experiência com os materiais terrestres. A razão para esta diferença de ratos não é conhecido. Após este trabalho tinha sido feito, foi descoberto que os ratos egípcios spiny de fato não fazem tocas na natureza, eles podem ocupar tocas feitas por gerbils, também a superfície de seus ha naturaisBitat muitas vezes é hard rock. Observação recente em Nairóbi mostrou que, dentro do gênero Acomys, mouse Wilson spiny (Acomys wilsoni) e spiny Percival mouse (Acomys percivali), que se enterram no estado selvagem, também burrowed em laboratório. 4. Nidificação 1. Aparelho Este teste é realizado em gaiolas individuais, sendo que os mesmos utilizados para escavação são adequados. Cama normal deve cobrir o chão a uma profundidade de 0,5 cm. (Variação em profundidade, e roupa de cama muito profundo, poderia afetar a construção do ninho). Cada gaiola é fornecido com um "Nestlet", um quadrado de 5 cm de batting de algodão prensado (Ancare). 2. Procedimento Os ratos são colocados individualmente em gaiolas de nidificação cerca de uma hora antes da fase escura, e os resultados são avaliados na manhã seguinte. Tal como acontece com construção de galerias, e por razões semelhantes, o tempo não é crítico. 3.Pontuação Os ninhos são avaliados em uma escala de 5 pontos (Figuras 4-8), ea quantidade de untorn Nestlet é também pesava 5. <ol><li> O Nestlet é praticamente intocados (&gt; 90% intacta). </li><li> O Nestlet é parcialmente rasgado (50-90% restantes intactos). </li><li> O Nestlet é mais desfiado, mas muitas vezes não há local do ninho identificáveis: &lt;50% do Nestlet permanece intacta, mas &lt;90% está dentro de um quarto da área do piso da gaiola, ou seja, o algodão não é reunido em um ninho, mas espalhados ao redor da gaiola . Nota: o material pode por vezes estar em uma área ninho amplamente definido, mas a definição crítica é que 50-90% foi picado. </li><li> Um ninho de identificação, mas plana:&gt; 90% do Nestlet é rasgado, o material é reunido em um ninho dentro de um quarto da área do piso da gaiola, mas o ninho é plana, com muros mais altos do que a altura do corpo do rato (enrolado em seu lado) com menos de 50% da sua circunferência. </li><li> A n (próximo) perfeitaest:&gt; 90% do Nestlet é rasgado, o ninho é uma cratera, com muros mais altos do que a altura do mouse corpo em mais de 50% da sua circunferência. </li></ol> Onde o critério de não concordar dividir a diferença. Por exemplo, um ninho perfeito com um pedaço unshredded 0,7 g marcaria 4.5. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura pontuação Ninho 4 1. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5 pontos. Nest 2 <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Figura 6 pontos. Nest 3 <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig7.jpg" alt="Figura 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 7"> Figura 7. Nest pontuação 4 <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig8.jpg" alt="Figura 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 8"> Figura 8. Scor Ninhoe 5 4. Resultados esperados Os machos e as fêmeas fazem ninhos, como sua finalidade é a termorregulação, além de ser associada com a reprodução. Para camundongos C57BL / 6, a pontuação ninho para homens e mulheres estão no mesmo intervalo, embora não tenhamos feito uma comparação controlada em um único experimento. A maioria dos mouses C57BL / 6 pontuação 4-5 na construção do ninho, mas quando o hipocampo é lesionada a pontuação média seria em torno de 1-2; uma pontuação de 3 dificilmente será ultrapassado (Figura 9). Nidificação também se mostrou sensível à doença de príon em torno de 10-12 semanas 1,2,16. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig9.jpg" alt="Figura 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 9"> Figura 9. Pontuações Nest (medianas e intervalos interquartis) para controle de ratos e camundongos com lesões do hipocampo, dorsal ventral e completa. Somente os ratos lesionados mostram a inibição completa de aninhamento, então os efeitos da dorsal seletiva e Ventr. Dirregiões al aparecem sub-limiar, mas aditivo. 5. Acumulação 1. Aparelho Uma série de "bases em casa" estão ligados a tubos de malha de arame, selado de forma permanente na extremidade distal onde a pellets alimentos são colocados e, temporariamente, na extremidade proximal por um tampão de madeira. Isto é usado para impedir que os ratos que entram os tubos antes de adaptação para a base de casa tem occurred7. O aparelho (Figura 10) pode ser feita de várias maneiras, desde que os princípios básicos são respeitados. Nosso consiste de uma linha de 8 caixas de madeira, cada um 30 x 13 x 15 cm, com tampas de acrílico transparente. Cada um é fornecido com uma garrafa de água, e tem um buraco na parte de trás em que o tubo de entesouramento é push-equipada. Os tubos são feitos de plástico preto, 10 cm de comprimento, 40 mm de diâmetro, juntou-se a um tubo de malha de arame, 45 cm de comprimento, 4 cm de diâmetro, para formar um comprimento total de 50 cm. A malha é composta de 13 quadrados mm,e é um rolo de casal com as malhas mis-alinhados para fazer os buracos na malha menor e evitar pelotas do alimento cair completamente. Se seis milímetros de malha quadrada está disponível este é um material melhor como um rolo seria suficiente. A extremidade distal do tubo, onde os alimentos são colocados pellets, está fechado. A extremidade proximal é selada com um bujão removível de madeira. <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig10.jpg" alt="Figura 10" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 10"> Figura 10. Mice nos tubos de açambarcamento 2. Procedimento <ol><li> Tipicamente, o entesouramento é muito variável pela primeira vez e alguns ratos não podem acumular em tudo. Entesouramento, como construção de galerias, melhora com a prática. Portanto, onde o design experimental permite, sessões baselining são os melhores dados antes de um tratamento é administrado. Claramente, isto não é prático, se a variável independente é inata, como com um rato (não-condicional) mutante ou ao testar linhagens de camundongos diferentes. </li><li> Um rato é colocado emcada caixa no início do dia a habituar a ele. A caixa é fornecida com um túnel de papelão que foi na gaiola verdadeiro grupo de casa por pelo menos uma noite, também uma generosa porção de cama suja, fazer-se sentir como "casa". Acesso ao tubo de entesouramento é impedido até a noite com uma rolha de madeira. 100 g pellets de alimentos (uma mistura de pequenos e grandes) é colocada na extremidade distal do tubo de entesouramento (deitando-os em, no outro extremo com o tubo na vertical). Para certificar-se o mouse é levemente com fome antes do início dos testes, a caixa de casa não é fornecido com alimentos. </li><li> Pouco antes do início da fase escura, retire o tampão de madeira para permitir o acesso do rato ao tubo de entesouramento. Na manhã seguinte (novamente, o tempo não é crítico) Recolher e pesar todos os pellets de alimentos que foram acumulados na caixa de base. </li></ol> 6. Resultados esperados Usando C57BL feminino / 6 ratos, o valor médio acumulado seria de cerca de50-70 g. Lesões do hipocampo fortemente suprimir hoarding11, enquanto as lesões córtex pré-frontal tem apenas um efeito fraco 12 (Figura 11). <img src="/files/ftp_upload/2607/2607fig11.jpg" alt="Figura 11" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 11"> Figura 11. Peso de pelotas de alimento acumulado por controle e medial córtex pré-frontal-lesionada camundongos (medianas e faixas interquartil). Embora as medianas diferem consideravelmente, a alta variabilidade nos controles, o resultado está longe de ser estatisticamente significativa (P = 0,3).

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

<html> Estes testes são extremamente simples de executar, mas os tamanhos de efeito são muito grandes, tornando-os extremamente sensíveis aos tratamentos, as diferenças de tensão, etc Eles estão em conformidade com o &quot;Requinte&quot; aspecto de Russell e Burch 3 Rs &quot;18. Na verdade, o bom desempenho em testes como burrowing parece ser um indicativo de boa saúde geral dos animais. Portanto, este poderia ser um bom teste para avaliação do bem-estar animal. A importância do enriquecimento ambiental para roedores de laboratório é bem reconhecida nos dias de hoje. Fornecimento de material de nidificação é agora uma prática comum em casas de muitos animais, e isso é fácil de fazer. O entusiasmo com que os ratos escavam tocas faz um enriquecimento potencialmente excelente, mas, infelizmente, uma &quot;auto-recarregamento&quot; toca o que seria uma maneira prática de fornecer este ainda não foi desenvolvido. Se encontrar ratos hoarding enriquecendo ainda não foi determinada. _content &quot;&gt; Uma desvantagem é que os dados gerados por esses testes é geralmente não-paramétricas (não gaussianas na distribuição), de modo apropriado as estatísticas não-paramétricas são necessários para analisá-los, por exemplo, o Mann-Whitney U para comparações pairwise, Kruskal- Wallis ANOVA para o grupo multi-dados. Se designs medidas repetidas são usadas, uma vez que não há nenhum teste ANOVA adequada para dados não-paramétricos, os resultados podem ser transformadas, por exemplo, raiz quadrada ou procedimentos de registro para fazê-los obedecer a uma distribuição mais normal . As medições do aparelho podem ser ligeiramente diferentes daqueles especificados no texto (útil para pesquisadores EUA), mas grandes diferenças devem ser evitados. No entanto, em alguns casos, outros experimentadores podem encontrar diferentes construções funcionam melhor do que as descritas aqui. Como para todas as medições de comportamento, os ratos devem ser testadas para ver se seus níveis de atividade são normais, como a inatividade terá, obviamente, uma detrimental efeito sobre as espécies típicas comportamentos. Quando scrapie camundongos infectados foram mostrando burrowing prejudicada e nidificação, seus níveis de atividade foram normais (testado em um aparelho de campo aberto). De fato, um período de hiperatividade ocorre em torno de 2-4 semanas após esses comportamentos típicos da espécie são os primeiros prejudicada 2. O comprometimento forte produzida por lesões do hipocampo na construção de galerias, de nidificação e entesouramento, que são espécies típicas comportamentos, complementa as deficiências no aprendizado espacial e Memória9 que são tão bem estabelecidos os efeitos dessas lesões. Eles parecem ser equivalentes aos prejuízos nas atividades da vida diária tão característico da AD 14. Estes testes típicos da espécie pode muito bem provar ser de grande utilidade na triagem pré-clínicos para tratamentos do mal de Alzheimer e outras doenças neurodegenerativas 14. Em muitas doenças cérebro humano uma capacidade perda ou redução para realizar véspera normaistarefas ryday é tão importante como outras características da doença, como comprometimento cognitivo. Particularmente, esta perda pode exigir o envolvimento dos cuidadores e da grande fardo socioeconômico este tantas vezes impõe.

avaliar buraqueira, construção nest, e hoarding em ratos

Assessing Burrowing, Nest Construction, and Hoarding in Mice

Deterioração da capacidade de realizar &quot;atividades da vida diária&quot; (ADL) é um sinal precoce da doença de Alzheimer (AD). Triagem comportamental pré-clínicos de possíveis tratamentos para AD atualmente em grande parte concentra-se em testes cognitivos, que freqüentemente exige equipamentos caros e muito tempo experimentador. No entanto, a memória episódica humano (o aspecto mais severamente afetados de memória em AD) é diferente para a memória dos roedores, o que parece ser em grande parte não-episódica. Portanto, as formas atuais de triagem para tratamentos novos para a AD AD em roedores são intrinsecamente improváveis ​​de sucesso. Uma nova abordagem à triagem pré-clínicos seria caracterizar a ADL de camundongos. Por sorte, vários testes, tais têm sido recentemente desenvolvidos na Universidade de Oxford, e aqui os três mais sensíveis e bem caracterizadas são apresentados. Burrowing foi desenvolvido em Oxford 13. Ela evoluiu a partir de uma necessidade de desenvolver um paradigma hoarding mouse. Mais publicarparadigmas hoarding ed roedores necessária uma fonte de alimento distante para ser ligada à gaiola por uma passagem de ligação. Isso implicaria a modificação da gaiola, bem como fazer um mouse à prova de passagem de conexão e fonte de alimento. Por isso, foi considerado se seria possível colocar a fonte de alimento dentro da gaiola. Verificou-se que se um contêiner foi colocado no chão, foi esvaziado na manhã seguinte., As pelotas de alimentos foram, no entanto, simplesmente depositado em uma pilha na entrada de contentores, ao invés de colocados em um lugar discreto fora do container, como seria de esperar se os ratos eram verdadeiramente acumular-los. Inspeção cuidadosa mostrou que os ratos estavam realizando escavação (&quot;burrowing&quot;) movimentos, não carregando a pellets em suas bocas para um lugar escolhido como fariam se realmente hoarding-los 6. Pelotas do alimento não é um substrato essencial para a construção de galerias; ratos irá tubos vazios cheios de areia, cascalho, mesmo roupa de cama sujas de sua própria gaiola. Maismais, eles vão esvaziar um tubo cheio mesmo se um vazio é colocado próximo a ele 8. Vários protocolos de nidificação existem na literatura. O Oxford apresentar um simplifica o procedimento e tem um sistema de pontuação bem definidos para a qualidade do ninho 5. Um paradigma hoarding foi desenvolvido mais tarde em que os ratos, ao invés de acumulação de volta para a jaula casa real, foram adaptados a viver na &quot;base&quot; de um aparelho de entesouramento. Esta base de casa foi conectado a um tubo feito de malha de arame, a extremidade distal do que continha a fonte de alimento. Este arranjo provou rendimento bom comportamento de manada, enquanto os ratos foram adaptados a viver na &quot;base&quot; durante o dia e só autorizados a entrar no tubo de acumulação à noite.

Construção de galerias, de nidificação e açambarcamento são espécies típicas atividades que os ratos prontamente executar em laboratório. Este artigo descreve como podem ser simplesmente mais barato avaliados. Estes protocolos são extremamente sensíveis à tensão mouse, lesões cerebrais e doenças. Além disso, eles constituem &quot;enriquecimento ambiental&quot; para os ratos, e encarnar o &quot;refinamento&quot; aspecto do &quot;3 Rs&quot; 18.

Avaliar buraqueira, Construção Nest, e Hoarding em Ratos

A deterioração na capacidade de realizar "atividades de vida diária" (AVD) é um sinal precoce da doença de Alzheimer (DA). A triagem comportamental pré-clínica ...

O objetivo deste procedimento é caracterizar comportamentos típicos de espécies em camundongos. Primeiro, o comportamento de escavação é estudado preenchendo-se um tubo com material e medindo-se a quantidade removida pelo animal. Nestlets são colocados na gaiola e a completude do ninho é quantificada como uma medida do comportamento de nidificação.O comportamento de acumulação é examinado colocando um camundongo em uma caixa com acesso a um túnel cheio de pellets de alimento e medindo a quantidade que o animal retira do túnel. Os resultados dessa série de testes indicam se os camundongos realizam suas atividades diárias. Normalmente, as implicações dessa técnica podem estender-se à busca por tratamentos para demência, porque comportamentos funcionalmente semelhantes são prejudicados tanto em camundongos quanto no ser humano.Comportamentos típicos no camundongo podem ser comparados até mesmo às atividades da vida diária dos seres humanos. E os primeiros efeitos da doença de Alzheimer são a inibição da realização das atividades normais da vida diária, como preparar o seu café da manhã, amarrar os cadarços do sapato, planejar uma refeição ou fazer uma compra. Com nossos camundongos modelo de Alzheimer, observamos que os comportamentos típicos da espécie são fortemente inibidos.Aqui temos um modelo direto, quase um modelo homólogo, entre as atividades da vida diária observadas em pacientes com Alzheimer em casa e na clínica, e a inibição de espécies. Comportamentos típicos no camundongo: construa um abrigo a partir de um tubo plástico, com 68 milímetros de diâmetro e 20 centímetros de comprimento. Tampe uma das extremidades com uma tampa feita de 12 milímetros de MDF.A seguir, faça dois furos, a um centímetro da extremidade aberta do tubo de escavação, em um ângulo de 90 graus. Insira um parafuso máquina de cinco centímetros de comprimento em cada furo e aperte-os firmemente. O tubo deve agora estar elevado aproximadamente três centímetros acima do piso.Em uma das extremidades, preencha o túnel com 200 gramas de pellets de alimento e coloque-o na gaiola principal para habituação durante a noite. Se os camundongos forem mantidos em grupos, a habituação será mais rápida e completa devido ao efeito de facilitação social. No entanto, testes de linha de base em camundongos mantidos individualmente ainda devem ser realizados.Posteriormente, substâncias não alimentares também podem ser usadas para medir o comportamento de escavação. Alguns exemplos incluem bolas de argila, pedras britadas e areia. Após a habituação dos animais, coloque um túnel completo na gaiola de teste por volta das 16h para realizar um teste de linha de base.Recomenda-se realizar dois testes de linha de base, com intervalo de 48 horas. Duas horas depois, meça o peso do material restante na toca esvaziando o conteúdo em um recipiente tarado.Devolver o material não consumido ao tubo e colocar de volta na gaiola doméstica na manhã seguinte. Remover o tubo e pesar qualquer material restante para teste. Repetir este procedimento pelo menos 48 horas após a última medição basal.Camundongos C57 black six normalmente cavam cerca de 70 gramas nas primeiras duas horas e aproximadamente 200 gramas durante a noite. Camundongos com lesão no hipocampo frequentemente cavam menos de cinco gramas. A doença de Pion inibe a escavação, assim como o lipopolissacarídeo.A escavação pode detectar a doença priônica de 10 a 12 semanas após a injeção do homogenato cerebral doente, enquanto os sinais clínicos só aparecem em 22 semanas. A escavação demonstrou ser sensível às diferenças entre cepas e à eliminação de subunidades de canais iônicos de potássio. Para medir o comportamento de aninhamento, prepare gaiolas individuais e cubra o piso com material de cama de 0,5 centímetros de espessura.Coloque profundamente um quadrado de cinco centímetros de algodão emplumado prensado, chamado ninho, dentro de cada gaiola. Coloque um camundongo em cada gaiola com ninho cerca de uma hora antes da fase escura e avalie os resultados na manhã seguinte.Pese a quantidade de ninho não rasgado e avalie o ninho em uma escala de cinco pontos. Uma pontuação de um é atribuída quando o ninho está amplamente intocado, e um cinco é concedido a um ninho quase perfeito, com mais de 90% do ninho rasgado. Tanto machos quanto fêmeas constroem ninhos, cuja função está relacionada à termorregulação, além de estar associada à reprodução.Os escores de ninho de camundongos C57 black six para machos e fêmeas estão na mesma faixa. Embora não tenhamos realizado uma comparação controlada em um único grupo, a maioria dos camundongos C57 black six apresenta escore de quatro a cinco na construção de ninho. Porém, quando o hipocampo é lesado, o escore mediano seria em torno de dois.Uma pontuação de três dificilmente será excedida. Para medir o comportamento de armazenamento, prepare a caixa que servirá como base colocando uma garrafa d'água e fazendo um furo na lateral, onde será acoplado o tubo de armazenamento. Confeccione um tubo de armazenamento enrolando um pedaço de malha metálica de 45 centímetros ao redor de um tubo com diâmetro de 40 milímetros.Fixe-o com grampos Allen ou torções de arame. Em seguida, encaixe-o em um tubo preto de 40 milímetros de comprimento igual a 10 centímetros. Depois, conecte o tubo de contenção à caixa preparada anteriormente e tampe a extremidade proximal com uma tampa de madeira removível.Prepare a caixa de casa com um túnel de papelão e cama suja da gaiola de origem. Certifique-se de que o acesso ao tubo de armazenamento seja impedido. Coloque o camundongo na caixa no início do dia para habituação posterior, remova o tubo de armazenamento e encha a extremidade distal com uma mistura de pelotas de alimento grandes e pequenas, totalizando 100 gramas.Logo antes do início da fase escura. Remova a tampa de madeira para permitir que o camundongo acesse o tubo de armazenamento na manhã seguinte. Novamente, o momento não é crítico.Colete e pese os pellets de alimento que foram armazenados na caixa da base principal. Utilizando camundongos fêmeas C57BL/6. A quantidade mediana armazenada seria de cerca de 50 a 70 gramas.Lesões no hipocampo suprimem fortemente o armazenamento, enquanto lesões no córtex pré-frontal têm apenas um efeito fraco. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como avaliar comportamentos típicos da espécie em massa.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Doenças, traumatismo craniano, modificações genéticas e tratamento de camundongos com drogas podem ter efeitos profundos no comportamento. Utilizando abordagens bem caracterizadas e validadas, como enterrar mármore e triturar ninhos, comportamentos compulsivos podem ser documentados com precisão em camundongos como modelos de transtorno obsessivo-compulsivo humano e transtorno do espectro do autismo.

Enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos

Demonstramos a utilidade do comportamento de construção de ninhos em ratos de laboratório como um indicador de bem-estar. A pontuação do ninho é uma técnica sensível que é alterada pela temperatura, doença e agressão. O tempo para integrar no teste de ninho (TINT) é uma avaliação simples do lado da gaiola que pode detectar a dor pós-operatória.

Construção de ninhos como indicador de saúde e bem-estar em ratos de laboratório

Este protocolo descreve um ensaio comportamental, com base no teste de labirinto de Barnes, para estudar como instintiva defensiva ações são modificadas pelo conhecimento do ambiente espacial.

Um ensaio comportamental para investigar o papel da memória espacial durante uma defesa instintiva em ratos

Desenvolvemos um protocolo para avaliar o bem-estar em ratos durante procedimentos com anestesia geral. Uma série de parâmetros comportamentais, indicando níveis de bem-estar, bem como metabólitos de glicocorticoides foram analisados. O protocolo pode servir como uma ajuda geral para estimar o grau de gravidade de forma científica, centrada no animal.

Avaliação sistemática de bem-estar em camundongos para procedimentos com anestesia geral

Este protocolo mede aprendizagem espacial e memória usando o labirinto de Barnes. Um novo paradigma de donzela em apuros é usado para avaliar a atividade locomotora e comportamento pró-social em camundongos.

Analisando a aprendizagem espacial e comportamento pró-social nos ratos usando o labirinto de Barnes e paradigmas de donzela em apuros

Aqui, nós apresentamos um protocolo para quantificar o comportamento do edifício do ninho nos ratos, que é sabido para ser danificado em diversas desordens e doenças neurológicas. Este protocolo examina a utilidade de quatro materiais e oferece a oportunidade de quantificar a concordância do avaliador na pontuação, melhorando a validade e a confiabilidade do ensaio.

Comportamento do edifício ninho como um indicador precoce de déficits comportamentais em camundongos

Este artigo fornece uma descrição detalhada de um novo protocolo de viés de julgamento do mouse. Evidências da sensibilidade dessa tarefa olfativa de escavação ao estado afetivo também são demonstradas e sua utilidade em diversos campos de pesquisa é discutida.

Avaliação do viés de julgamento do rato através de uma tarefa de escavação olfativa

Este protocolo descreve um modelo animal para estudar como a adversidade no início da vida, provocada por um ambiente empobrecido e cuidados maternos imprevisíveis durante o período pós-natal precoce, afeta o desenvolvimento do cérebro e o risco futuro de transtornos mentais.

Cama e nidificação limitadas como modelo para adversidades no início da vida em camundongos

Nós apresentamos um método de baixo custo para projetar e construir uma luz headstage sistema de pré-amplificador com a gravação simultânea e capacidade neural estimulação. Este dispositivo pode ser impermeabilizado para uso em animais de natação.

Concepção e Construção de um Headstage Custo Efetivo de Estimulação Neural Simultânea e Gravação no labirinto aquático

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T-maze Alternância forçado e Tarefas esquerda-direita para a Avaliação da Discriminação de Trabalho e Memória de Referência em Ratos

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