Name: Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: Aprenda a medir a ansiedade em camundongos através da hiponeofagia, avaliando a latência para comer em ambiente novo. Este método confiável ajuda pesquisadores a estudar comportamentos relacionados à ansiedade.

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Wellcome Trust para a concessão de financiamento de Acesso Livre na Universidade de Oxford. Robert Deacon é um membro do grupo de Oxford OXION, financiado pelo Wellcome Trust conceder WT084655MA.

1. Introdução: Camundongos e ratos, inicialmente consumir apenas pequenas quantidades de um novo alimento. Isto é pensado para ser, porque são susceptíveis de envenenamento devido à sua incapacidade de vomitar. A única exceção a isso é se eles já se deparou com outro animal que tenha comido esse alimento; se sentir o cheiro no ar exalado de seus pares, eles vão classificá-lo como 13 seguro. Isto é porque o odor dos alimentos está emparelhado com dissulfeto de carbono em 12 o rato do outro fôlego. De fato, dissulfeto de carbono por si só aumenta o consumo de alimentos em ambos os ratos e camundongos 17. O fenômeno é chamado de "transmissão social das preferências alimentares" e pode ser usado como um paradigma de aprendizagem simples olfativo 22. Isto foi relatado para ser sensíveis às lesões do hipocampo 3, mas outros estudos não conseguiram replicar 5 este achado. Tem sido sugerido que o sistema colinérgico neocortical, particularmente a componente orbitofrontal 19 de maio ser mais importante do que o sistema colinérgico do hipocampo para a transmissão social. Transmissão social foi mostrado mesmo para monitorar perda de memória em ratos idosos, provavelmente mediada por CREB diminuiu (cAMP-resposta proteína elemento de ligação) de transmissão no hipocampo de 7. A facilidade com que os roedores adquirir uma preferência alimentar por transmissão social tem fortes implicações para os testes hyponeophagia. Quando o autor estava realizando um teste com hyponeophagia hipocampo ratos lesados ​​e controle, ele acidentalmente colocou um rato testado hipocampo (que tinha comido o milho doce) na gaiola do rato próximo controle devido para o teste 8. Ele comeu dentro de 14 s, não o controle só para ter uma latência de 300 s. Grande cuidado deve ser tomado para evitar a transmissão social, de odores de alimentos durante os testes hyponeophagia. Se o teste hyponeophagia primeira não resultar em um resultado claro e inequívoco, vários outros testes podem ser realizados. Figuras 1-4 ilustram exemplos de aparelhos diferentes. O número de situações de teste que podem ser criados é limitado apenas pela imaginação do experimentador. Resultados são analisados ​​por ANOVA medidas repetidas. Desde hyponophagia dados geralmente é muito variável, não conformes a distribuição de Gauss e, muitas vezes distorcida, com alguns animais dando latências muito tempo, ele deve primeiro ser transformado; uma raiz quadrada ou transformação log é particularmente útil para truncar as latências mais extremas. 2. Aparelhos: Figuras 1-4 são apresentados como exemplos de hyponeophagia teste set-ups. As combinações específicas de novos alimentos e meio ambiente não são críticos, embora a comida bem mostrado na Figura 1 é, obviamente, mais adequada para conter líquidos, embora um niblet de milho doce também pode ser colocado nela. Em geral, é uma boa idéia ter a maior parte do chão do aparelho coberto com a comida. Não só os animais parecem encontrar esta superfície incomum aversivo, esta técnica também elimina confunde devido à exploração antes de encontrar o alimento. Assim, uma droga sedativa podem aparecer ansiogênicas porque aumentou a latência para encontrar e comer a comida porque deprimido locomoção, não porque era ansiogênicas. Por exemplo, uma publicação aconselhou colocar o alimento no centro de um campo aberto 2. Não só este resultado na latência de alimentação sendo confundidos por exploratória tempo, ela também apresenta uma faceta adicional de ansiedade, abra a aversão ao campo ou seja, área central, uma medida clássica de ansiedade campo mediada aberto, o que tem sido relacionado para evitar risco de predação em habitats naturais 14. No entanto, em algumas situações isso pode realmente ser uma característica desejada do experimento. Outra desvantagem do experimento descrito no 2 foi que a isca era padrão laboratório comida no centro do campo aberto. Isto tem a desvantagem dupla que não é romance, e também não é extremamente palatável, ao contrário de alimentos como o milho doce ou leite condensado. Temos sempre achei que o uso de iscas de palatabilidade extrema não só aumenta o conflito sobre se a comer ou evitar o alimento, mas também os animais não precisam ser excessivamente privados de alimentos antes do teste, apenas a privação leve é ​​necessário, para esse aspecto dos protocolos aqui apresentados reflete o "Requinte" aspecto dos 3Rs de Russell e Burch 20. 2,1 procedimento: Ração dos ratos durante a noite. Remova toda a comida da tremonha gaiola à noite antes de testar em seguida, dar 1 g / mouse da dieta comum, que é aproximadamente um terço do que normalmente comem. Se eles estão alojados em grupo se certificar de que as peças são pequenas, para que todos os ratos podem comer partes iguais. Testá-losna manhã seguinte e substituir seus alimentos, assim como o teste está terminado. Configurar o aparelho de teste escolhido hyponeophagia, também uma fileira de pequenas gaiolas em que os ratos da gaiola grupo são colocados individualmente, antes e durante o teste. (Isso evita o aumento da ansiedade em camundongos remanescente na gaiola grupo, que pode ocorrer se você eliminar progressivamente os ratos a partir de um grupo, também transmissão social das preferências alimentares. Também auxilia na normalização do teste (entre o grupo e os animais alojados individualmente) e garante que os animais são perfeitamente alerta. Coloque o mouse em um aparelho de teste. Medir a latência para comer. Esta é definida como comer / beber continuamente por 2-3 s. Muitas vezes, os ratos vão cheirar ou lamber o alimento brevemente no início, mas só depois começar a comer continuamente, sem inibição. Outras medidas também podem ser tomadas. O tempo gasto comer durante um determinado período, por exemplo, 2 min após a alimentação começa a primeira, e possivelmente também a quantidade de alimentos consumidos durante este período, também pode ser medido. Lesões cerebrais às vezes afetar estas medidas diferencialmente 4. 2,2 Os detalhes específicos de execução de um teste hyponeophagia com o aparelho mostrado na Figura 1: Um jarro de plástico translúcido (aproximado do volume de 1,5 l, 15 cm de diâmetro com um bico protuberante mais 2 cm) é o aparelho de teste. Use creme cheio de leite condensado (Nestlé marca Carnation é excelente) 50:50 diluído com água (para facilitar a manuseá-lo) como o novo alimento. Para conter o mouse sobre a base e facilitar a investigação do leite, coloque o jarro de cabeça para baixo com o bico formando uma pequena alcova sobre o alimento bem. Este centra a atenção do mouse sobre o bem eo leite, assim minimizar os efeitos de tratamentos que podem afetar a percepção de, ou orientação para a fonte de alimento. O mouse é colocado de costas para o bem e o jarro é suavemente abaixado em posição, tomando o cuidado para não prender o rabo do rato. A latência de ser colocado no aparelho para iniciar corretamente beber é tomada. Cheira a leite não contam, pelo menos dois segundos de beber deve ocorrer. Contar qualquer boli fecal e observe qualquer micção (mas note que estas medidas serão influenciadas pelo tempo no aparelho). O tempo de corte é de 2 min. Se um rato não tem bebido até então, retire-o do aparelho e testar mais um ou dois camundongos, teste novamente aquele que não beber cerca de 3 min mais tarde. Este tempo é, provavelmente, ideal para os níveis de ansiedade para diminuir ainda preservar um estado de habituação ao aparelho. Este ciclo de teste-reteste de descanso descanso-reteste pode ser continuado até que o rato come ou um determinado número de ensaios foram realizados. Um máximo de três ensaios deve resultar em mais ratos beber sem fazer a experiência muito longa. O parâmetro de teste é a latência (cumulativos) para beber. Como em outros testes onde o odor poderia desempenhar um papel significativo, não-experimental ratos deve ser colocado no aparelho antes do início do teste. Seguir um protocolo de limpeza padronizada entre todos os ratos. Remover urina / fezes, limpe bem os alimentos e da base de plástico com úmido seguido de pano seco / tecido. Recarga de alimentos do bem com o leite (cerca de 0,2 ml, até a borda do poço). <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Um jarro de plástico doméstico convertidos para uso como uma unidade de teste hyponeophagia. Leite condensado pode ser colocado na comida pequeno bem localizado no interior do bico, que, convenientemente, direciona a atenção do mouse diretamente para ele. O peso de chumbo colado à base invertida do jarro ajuda a estabilizá-lo contra qualquer movimento do mouse contra as paredes. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Uma câmara de observação contendo duas brancas (que provoca ansiedade) insere branco para testar hyponeophagia. Milho doce pode ser usado como alimento. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Outra unidade de teste hyponeophagia. O alimento é misturar tratar macaco. <img src="/files/ftp_upload/2613/2613fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Outra unidade de teste hyponeophagia. A comida apresentada é misturado nozes picadas. 3. Execução de experiências múltiplas hyponophagia: O teste hyponeophagia primeira não pode fornecer um resultado inequívoco. Isto acontece muitas vezes e é frequentemente devido à linha de base (controle) os valores serem muito altos ou baixos, resultando em efeitos de teto ou no chão. Efeitos de fundo foram encontrados quando testes hipocampo ratos lesados ​​10; parecia que o valor de controle tiveram que ser suficientemente alta para observávele redução hyponeophagia. Pode ser difícil para julgar a aversão exigido da situação de teste. Se os ratos foram testados várias vezes já (não necessariamente sobre a ansiedade relacionada com tarefas) o seu nível de emotividade será menor do que se eles são ingênuos para comportamentais testes e um teste mais ansiogênicas será necessária. Isso muitas vezes pode ser prestada por um ambiente de teste elevados (como na Figura 4). Ruído aversivo poderia ser acrescentado à situação de teste, por exemplo, um rádio tocando em um volume alto ou um gerador de ruído branco. Iluminação mais brilhante também aumentaria aversão ambiente de teste. Assim, se o resultado hyponeophagia primeiro não é significativo, tente mais diversas situações de teste e realizar uma ANOVA de medidas repetidas. Este é um projeto muito poderoso experimental. 4. Resultados esperados: As lesões do hipocampo produzem um forte decréscimo hyponeophagia em camundongos 10 e trabalhos inéditos recente tem mostrado que este é, como em ratos 1, devido à região ventral do hipocampo. Camundongos sem a subunidade do canal KATP Kir6.2 mostraram aumento hyponeophagia em um teste, mas menos em outro 9, um resultado confuso, mas uma que serve para enfatizar que as diferenças no ambiente de teste pode ter um efeito significativo sobre o resultado, e também aponta a utilidade de realizar múltiplos testes. 129S2/SvHsd ratos eram mais do que hyponeophagic C57BL/6JolaHsd 6. De fato, uma comparação de várias linhagens de camundongos mostrou puras marcada inter-tensão diferenças 21.

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Não há conflitos de interesse declarados.

Os números da latência nos testes hyponeophagia são tipicamente altamente variável. A técnica descrita aqui, de impor um período de tempo definido para o animal para comer, então novos testes mais tarde, se ele não consegue comer, serve para minimizar o risco de ultra-longa latências e economiza o tempo experimentador. Uma vantagem de hyponeophagia sobre testes de ansiedade, como o labirinto, é que se os resultados do primeiro teste não atingiu significância estatística, outro teste pode ser executado usando um ambiente de teste diferentes romance e comida, como o tipo de ansiedade que está sendo medido parece ser o mesmo e não mudou qualitativamente pelos testes executados anteriormente, ao contrário do labirinto 16. Medidas repetidas ANOVA pode então ser usada para avaliar a série de testes. Sabe-se agora que vários aspectos diferentes de emotividade são cobertos pela &quot;ansiedade&quot; guarda-chuva prazo 11,15,18. Camundongos mostrando mudanças na hyponeophagia não necessariamente mostram mudanças em campo aberto, labirinto em cruz elevado ou testes de claro-escuro caixa. Assim, os sistemas cerebrais subjacentes desempenho nos testes deve ser de pelo menos um pouco diferente. Por exemplo, o hipotálamo ea amígdala podem muito bem participar hyponeophagia como eles estão preocupados com (entre outras coisas) a regulação da ingestão de alimentos.

hyponeophagia: uma medida de ansiedade no rato

Hyponeophagia: A Measure of Anxiety in the Mouse

Antes do dia de hoje, quando raticidas de ação rápida e potente, como alfa-Cloralose ainda não estavam em uso, o trabalho dos controladores de pragas foi muitas vezes dificultada por um fenômeno conhecido como &quot;timidez isca&quot;. Camundongos e ratos não pode vomitar, devido ao aperto do esfíncter cardíaco do estômago, de modo a superar o problema da toxicidade de alimentos potencial que eles têm desenvolvido uma estratégia de primeira ingerir apenas quantidades muito pequenas de substâncias novas. As quantidades ingeridas, em seguida, aumentar gradualmente até que o animal tenha determinado se a substância é segura e nutritiva. Então o velho caçadores de ratos em primeiro lugar colocar uma substância palatável como aveia, que era para ser o veículo para a toxina, na área infestada. Somente quando grandes quantidades estavam sendo consumidas prontamente que eles em seguida, adicione o veneno, em quantidades calculadas para não afetar o sabor do veículo. A isca envenenada, que os animais foram agora prontamente comer em grandes quantidades, então rapidamente executar sua função. Timidez isca é usado agora no laboratório de comportamento como uma forma de medir a ansiedade. A substância altamente palatável, mas novela, como o milho doce de frutas ou leite condensado, é oferecido a todos os ratos (ou animais) em uma situação nova, como uma nova gaiola. A latência de consumir uma quantidade definida de o novo alimento é, então, medido. Robert MJ Deacon pode chegar a <a href="mailto:robert.deacon@psy.ox.ac.uk">robert.deacon @ psy.ox.ac.uk</a>

Camundongos e ratos, devido à sua prudência inata, são inicialmente lento em consumir um alimento novo, particularmente em um lugar novo. Este hyponeophagia podem ser facilmente medidos em laboratório, apesar de animais de laboratório são muito menos ansiosos do que suas contrapartes selvagens

Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato

Antes da época atual, quando rodenticidas potentes e de ação rápida, como a alfa-cloralose, ainda não eram utilizados, o trabalho dos controladores de pragas era frequentemente...

O objetivo geral deste procedimento é observar a experiência de ansiedade. Quando camundongos são confrontados com um alimento novo em um local novo, primeiramente, selecione um alimento altamente palatável. Em seguida, selecione o ambiente novo no qual o animal experimentará o alimento.Uma vez preparado, introduza o animal e registre os parâmetros comportamentais. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostrem alterações no nível de ansiedade por meio de mudanças na latência para alimentação. Ao consultar a literatura sobre hiperfagia, descobri que as pessoas frequentemente utilizavam arenas muito grandes para colocar a comida, a fim de provocar ansiedade.Mas você pode provocar ansiedade com uma arena de teste muito menor. O resultado é que você não terá seus dados de latência da hiperfagia contaminados por muita atividade exploratória. Além disso, se o composto em teste ou a lesão que você está avaliando diminuir a atividade motora, isso também seria uma confusão, que seria muito mais acentuada com uma arena grande.Mas a pequena arena de teste garantirá que o camundongo, mesmo que se mova muito lentamente, encontre a comida relativamente rápido. A ideia geral desses testes é que o camundongo entre no aparelho de teste e encontre a comida praticamente de imediato, fornecendo então dados puros de latência da hiperalimentação. Na noite anterior ao teste, remova toda a comida da gaiola de origem, exceto um grama de ração por camundongo. Quebre os pedaços para garantir que os animais alojados em grupo comam quantidades iguais.Em seguida, escolha o tipo de aparelho para o teste de hiperfagia a ser utilizado. Foram desenvolvidos quatro tipos com pequenas diferenças. É importante que a isca seca seja distribuída uniformemente sobre o piso do aparelho para reduzir a necessidade de exploração.Neste exemplo, a isca líquida está contida em um poço de alimento. Iscas de palatabilidade extrema incentivam a degustação de alimentos novos e exigem apenas leve privação alimentar. Abaixo estão exemplos de alimentos palatáveis que podem ser usados como isca para montar o aparato experimental.Cole um peso de chumbo na base de um jarro plástico translúcido com cerca de 15 centímetros de diâmetro e um bico que se projeta por mais dois centímetros, vire o jarro sobre uma base plástica branca, de modo que o bico em forma de S cubra um poço para alimento. Como o odor pode desempenhar um papel significativo neste teste, permita que camundongos não experimentais explorem o aparato antes de iniciar o teste.Em seguida, alinhe uma fileira de pequenas gaiolas. Coloque um camundongo em cada gaiola cerca de cinco minutos antes do teste e devolva-os à mesma gaiola. Após cada ensaio, encha o poço de alimento com leite condensado integral adoçado, diluído na proporção de 50:50 com água, para servir como isca.Para iniciar o teste, coloque um camundongo sobre a plataforma voltado para longe do poço. Abaixe suavemente o jarro até a posição. Tendo o cuidado de não prender a cauda.Meça a latência para comer. Isso é definido como comer ou beber continuamente. Por dois a três segundos, conte qualquer bolo fecal e observe qualquer micção.Retire o animal após dois minutos. Se um camundongo não estiver embriagado, devolva-o à sua gaiola nesse momento e reteste-o cerca de três minutos depois. A maioria dos animais bebe dentro de três tentativas antes do próximo teste.Limpe bem o recipiente de alimento e a base de plástico com um pano úmido, seguido por um pano seco, e reabasteça o recipiente de alimento. Lesões no hipocampo produzem uma forte diminuição na hiperalimentação em camundongos. Os valores de latência nos testes de hiperalimentação são tipicamente altamente variáveis.O histograma mostra dados de três testes sucessivos de hiperfagia em uma única coorte de camundongos. Após este procedimento, os animais podem ser testados em diferentes testes de ansiedade, como a caixa clara-escura ou o labirinto em cruz. No entanto, atualmente sabemos que a ansiedade se manifesta de várias formas diferentes, e a ansiedade relacionada à alimentação pode não ser necessariamente a mesma que a ansiedade medida na caixa clara-escura ou no labirinto em cruz, por exemplo.Portanto, devemos sempre testar qualquer tratamento que administrarmos aos camundongos nos três testes de ansiedade, ou em tantos quantos possível, para garantir que, quando o composto for utilizado em ensaios clínicos, seja mais provável atuar como ansiolítico em humanos.

hyponeophagia-a-measure-of-anxiety-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O teste de labirinto em cruz elevado é um dos testes mais utilizados para medir a ansiedade-como o comportamento em camundongos. Aqui, apresentamos um filme mostrando os procedimentos detalhados para a realização do ensaio.

Labirinto elevado para Ratos

As medidas labirinto ansiedade-como o comportamento em roedores. Existem dois oposta fechada e dois braços abertos opostos; roedores ansiosas evitar os braços abertos. A área central é nem completamente aberta nem fechada, assim que o tempo gasto aqui é ambígua e difícil de interpretar. Aqui uma modificação do protocolo de labirinto eliminar esta área é descrito.

O Becos Teste sucessiva de ansiedade em camundongos e ratos

Um protocolo é fornecido para usar um labirinto de campo aberto para acessar a atividade locomotora geral, ansiedade e emocionalidade em um modelo de camundongo de laboratório.

A utilização do campo aberto Maze medir Locomotor e Ansiedade-like Comportamento no Mice

Desenvolvemos um protocolo para avaliar o bem-estar em ratos durante procedimentos com anestesia geral. Uma série de parâmetros comportamentais, indicando níveis de bem-estar, bem como metabólitos de glicocorticoides foram analisados. O protocolo pode servir como uma ajuda geral para estimar o grau de gravidade de forma científica, centrada no animal.

Avaliação sistemática de bem-estar em camundongos para procedimentos com anestesia geral

Ratinhos alojados individualmente com uma roda de execução enquanto dado acesso limitado ao alimento desenvolvem reduções no consumo de alimentos e aumentam a atividade na roda de execução. Este fenômeno experimental é chamado anorexia baseado na atividade. Este paradigma fornece uma ferramenta experimental para estudar a neurobiologia e comportamentos subjacentes aspectos da anorexia nervosa.

Avaliar a Anorexia baseado na atividade em ratos

Aqui nós apresentamos o protocolo imprevisíveis stress leve crônica em ratos. Este protocolo induz um fenótipo de depressivo, como a longo prazo e permite avaliar a eficácia dos antidepressivos putativos em reverter os défices de depressiva como comportamentais e neuromolecular.

O protocolo de estresse suave crônico imprevisível para induzir Anhedonia em ratos

Com a manipulação optogenética de populações neuronais específicas ou regiões cerebrais, o comportamento pode ser modificado com alta resolução temporal e espacial em animais em movimento livre. Usando diferentes ferramentas optogenéticas em combinação com fibras ópticas cronicamente implantadas, uma variedade de modulações neuronais e testes comportamentais podem ser realizados.

Manipulação optogenética da atividade neuronal para modular o comportamento em camundongos em movimento livre

Roedores não são capazes de relatar sintomas de enxaqueca. Aqui, descrevemos um paradigma de teste gerenciável (ensaios de campo claro/escuro e aberto) para medir a aversão à luz, um dos sintomas mais comuns e incômodos em pacientes com enxaquecas.

Investigando comportamento semelhante à enxaqueca usando aversão à luz em camundongos

Um modelo de compulsão alimentar foi estabelecido em camundongos usando acesso intermitente a M&amp;M's (um alimento altamente palatável feito de gordura e açúcar). Camundongos com acesso intermitente a esse alimento rico em gordura e açúcar mostraram comportamentos semelhantes ao estresse, aumento da ingestão calórica e preferência por esse alimento em relação à ração padrão em comparação com camundongos com acesso contínuo ou nenhum acesso ao alimento.

Modelo de ingestão periódica intermitente em camundongos

Aqui, apresentamos um protocolo de teste de preferência olfativa que permite a avaliação de vieses olfativos negativos em relação a estímulos de odor apetitivos e aversivos em modelos de depressão em camundongos.

Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

Aprenda a medir a ansiedade em camundongos através da hiponeofagia, avaliando a latência para comer em ambiente novo. Este método confiável ajuda pesquisadores a estudar comportamentos relacionados à ansiedade.

Hyponeophagia: Uma Medida de ansiedade no rato

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