Name: High-Throughput medição e classificação de P orgânico em amostras ambientais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 58 s
Description: Aprenda a classificar fósforo orgânico em amostras de solo ou esterco usando hidrólise enzimática em placa de 96 poços. Este método de alta vazão permite analisar formas de fósforo de forma eficiente e econômica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos ao USGS e dos Recursos Hídricos e Vermont Lake Centro de Estudos para a concessão de financiamento.

1. Extração de fósforo <ol><li> Prepare uma solução de 1L de 0,25 M de hidróxido de sódio (NaOH, 40,00 g / mol) + 0,05 M de ácido etilenodiaminotetracético (EDTA, 292,24 g / mol). </li><li> Adicionar 30 mL da solução de NaOH + EDTA a 2 g de solo úmido ou seco / amostra em um tubo cônico de 50 mL. </li><li> Incube com agitação por 16 h à temperatura ambiente. </li><li> Centrifugar a 3000 xg por 3 minutos. </li></ol> 2. Ajuste de pH da amostra Extract <ol><li> Transferência de uma alíquota de 0,1 mL para um tubo de 1,5 mL micro centrífuga. </li><li> Adicionar 0,017 mL de ácido acético 2,5 M, 0,144 mL de 0,4 M tampão acetato (70,5% de acetato de sódio [CH 3 COONa, 82,03 g / mol] e 29,5% de ácido acético, pH 5,0) e 0,739 mL de água deionizada. </li><li> O volume final do extrato ajustado será de 1 mL eo pH final será 5,0. </li></ol> 3. Enzima Preparação Solução stock <ol><li> Prepare 1 L de 0,1 M de acetato de sódio (CH 3 COONa, 82,03 g / mol) solução, pH 5.0. </li><li> Prepare 2 x 10 mL de ácido soluções estoque fosfatase no buffer de acetato de sódio preparada na etapa 3,1 tal que as concentrações finais são cada 0,5 Unidades / mL. Fosfatase ácida Tipo I de Triticum aestivum (gérmen de trigo; GP, geralmente 0,5 mg sólida U-1, EC 3.1.3.2) Fosfatase ácida Tipo IV-S de Solanum tuberosum (batata; PP, geralmente 4,6 mg U-1 sólido, EC 3.1.3.2) * Unidades de actividade são especificados pelo fornecedor, onde uma unidade é definida como a libertação de um micromole de ortofosfato para a solução por hora a 37 ° C. </li><li> Reconstituir liofilizado nuclease P1 (CE 3.1.30.1) de Penicillium citrinum (fungos; NP1, geralmente 500 U mg -1 sólido) em um mL de água deionizada, isso agora pode ser armazenado a 4 ° C para uso futuro. </li><li> Pipeta NP1 em um dos 10 tubos mL preparada no passo 3,2 tais que a concentração final é de 2,5 Unidades / mL NP1; misture suavemente por inversão várias vezes. </li><li> Centrifugar as duas soluções enzimáticas 10 mL 3000 xg por 30 minutos. </li></ol> 4. P curva de calibração e controles <ol><li> Prepare 1 L de 1 mM fosfato de potássio (K2HPO4, 174,18 g / mol) solução estoque. </li><li> Adicionar 1 mL da solução estoque 1 mM fosfato de potássio a um tubo de centrífuga de 1,5 mL e 0,5 mL realizar sete diluições em série. </li><li> Descartar o primeiro tubo para que você tenha sete diluições variando de 20 nmol-0.625 nmol P. </li><li> Transferência de 80 mL de cada tubo em duplicado para linhas B - H de um padrão em placas de 96 poços. </li><li> Adicionar 80 mL de tampão acetato de sódio (ponto 3.1) com a linha A de colunas 11 e 12 este é o ponto de calibração 0 nmol P. </li><li> Cada coluna 11 e 12 agora contém oito amostras de referência de 0 a 20 nmol de fosfato inorgânico nmol. </li><li> Coluna 10 conterá os seguintes controles: <ol><li> Adicionar 40μL PP + solução enzimática GP + 40 mL de tampão de acetato de sódio (ponto 3.1) para os três primeiros poços na coluna 10. </li><li> Adicionar 40 mL PP + GP + solução enzimática NP1 + 40 mL de tampão de acetato de sódio para os próximos três poços. </li><li> Adicionar 40 mL de acetato de sódio contendo 10 glicose-6-fosfato nmol (C 6 H 11 O 9 Na 2 P 2 O &amp;bullet; xH, 304,1 g / mol) + 40 mL PP + solução enzimática para um GP bem e para o bem-finais em solução Coluna 10 acetato de sódio em vez de adicionar solução enzimática. </li></ol></li></ol> 5. Amostra Enzima + Incubação <ol><li> Cada amostra que está sendo testado vai ocupar os primeiros 9 poços em uma linha de uma placa padrão de 96 poços. </li><li> Distribuir 40 mL de extratos com pH ajustado amostra da Seção 2 para poços 09/01 em até 8 linhas. </li><li> Depois de todas as amostras foram distribuídas * use uma pipeta multicanal para distribuir PP + solução enzimática GP às colunas 1-3, PP + GP + NP1 às colunas 4-6 e tampão acetato de sódio (preparado na seção 3.1) para colunas 7-9. * Esta etapa deve ser realizada rapidamente para assegurar todas as amostras de obter tempo de incubação equivalente. </li><li> Cobrir a placa de 96 poços com uma tampa e incubar amostras + soluções enzimáticas, controles e curva de calibração exatamente 1 hr a 37 ° C. </li></ol> 6. Medida colorimétrica de Lançamentos e P inorgânicos Background <ol><li> Prepare 50 mL de cada uma das seguintes soluções em água deionizada: Solução A *: 0,1 M de ácido ascórbico (C6H8O6, 176,12 g / mol) + ácido tricloroacético 0,5 M (Cl3CCOOH, 163,39 g / mol) Solução B: 0,01 M molibdato de amônio ((NH4) 2MoO4, 196,01 g / mol) Solução C: 0,1 M citrato de sódio (HOC (COONa) (CH2COONa) 2 2H2O, 294,10 g / mol) + 0,2 arseniato de sódio M (NaAsO2, 129,91 g / mol) + 5% de ácido acético glacial (CH3CO2H, 60,05 g / mol) * A solução deve ser preparado diariamente. </li><li> Adicionar 25 ml de solução SDS, 100 ml de solução A, 20 mL de solução B e 50 mL de C e solução para todos os poços na pl de 96 poçoscomeu. Fazer isso rapidamente com uma pipeta multicanal. </li><li> Cobrir a placa e incubar 30 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Medir a absorvância a 850 nm em qualquer leitor de micro-placa ajustável. </li></ol> 7. Classificação de Compostos P <ol><li> Importação de dados brutos em um aplicativo de planilha (por exemplo, Microsoft Excel). </li><li> Traçar a curva de calibração de fósforo inorgânico: 0-40 nmol P sobre o eixo-x ea média de medições de absorbância duplicada no eixo-y. </li><li> Executar uma regressão linear e encontrar a equação da linha de melhor ajuste. </li><li> Colunas 1-3: Diretamente aplicar a curva de calibração, isto é fundo P. inorgânicos </li><li> Colunas 4-6: Média de valores da amostra triplicado e subtrair controles (solução enzimática + P inorgânico de fundo) do bruto absorbância-P este é derivado de mono-ésteres hidrolisáveis ​​P. </li><li> Colunas 7-9: O mesmo que 7,5, exceto os valores de absorbância subtrair colunas 4-6 - este é P de diésteres hidrolisável P. </li><li> Converter os dados de absorvância em nmol P liberado pela aplicação da equação de calibração. </li><li> nmol P liberado pode ser relacionado para mg P / kg de solo original. Alternativamente, avaliando as proporções de cada classe P também pode ser uma abordagem útil para a análise de dados. </li></ol> 8. Resultados representativos: Uma rápida inspeção visual da placa de 96 poços após a química colorimétrico vai oferecer pistas sobre se ou não o procedimento foi realizado corretamente. A primeira coisa a verificar é o nível de líquido em cada poço, verificando o perfil lado do prato. Deve haver exatamente 275 mL de reagentes em todos os poços. Em seguida, inspecionar visualmente a cor dos poços de amostras duplicadas triplicado e poços de calibração. Estas técnicas devem ser replicar o mesmo tom de azul. Em seguida aplicar a curva de calibração para os dois poços contendo glicose-6-fosfato e verificar que eles lançaram todos os nmol 10 de P. Após inorgânicos P total extraído foi medido utilizando ICP-OES ou um método alternativo, verifique se o P total valores calculados utilizando este protocolo não excedam a quantidade de P que foi extraído. Nota: o gerenciamento de dados cuidadosa na planilha vai ajudar a proteger contra erros quantitativos. Você estará lidando com um monte de números de uma vez, criando assim um modelo será tempo bem gasto. <img src="/files/ftp_upload/2660/2660fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. A placa de 96 poços mostrando resultados para 8 amostras (linhas AH) e uma curva de calibração (colunas 11 e 12). Controles estão na coluna 10. Aumentar a intensidade de cor entre as colunas 1-3 e 4-6 é devido ao hidrolisado compostos monoester P, entre as colunas 4-6 e 7-9 é devido a compostos de P diéster hidrolisada. <img src="/files/ftp_upload/2660/2660fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Distribuição das classes P em NaOH 0,05 M-0,25 M EDTA extrato de uma amostra de solo Vermont usando alto rendimento de hidrólise enzimática. Barras de erro indicam o desvio padrão, n = 3.

<ol><li>Turner, B. L., Frossard, E., Baldwin, D. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTurner%2C+BL+%22Organic+phosphorus+in+the+environment%22">Organic phosphorus in the environment</a>. , Cabi Publishing. Wallingford. (2005).</li>
<li>Murphy, J., Riley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+single+solution+method+for+determination+of+phosphate+in+natural+waters%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A modified single solution method for determination of phosphate in natural waters.</a> Anal. Chim. Acta. 27, 31-36 (1962).</li>
<li>Dick, W. A., Tabatabai, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+orthophosphate+in+aqueous+solutions+containing+labile+organic+and+inorganic+phosphorus+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Environ.+Qual%22%5BJournal%5D)">Determination of orthophosphate in aqueous solutions containing labile organic and inorganic phosphorus compounds.</a> J. Environ. Qual. 6, 82-85 (1977).</li>
<li>He, Z., Toor, G. S., Honeycutt, C. W., Sims, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzymatic+hydrolysis+approach+for+characterizing+labile+phosphorus+forms+in+dairy+manure+under+mild+assay+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour.+Technol%22%5BJournal%5D)">An enzymatic hydrolysis approach for characterizing labile phosphorus forms in dairy manure under mild assay conditions.</a> Bioresour. Technol. 97, 1660-1668 (2006).</li>
<li>He, Z., Honeycutt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+molybdenum+blue+method+for+orthophosphate+determination+suitable+for+investigating+enzymatic+hydrolysis+of+organic+phosphates%5BTitle%5D)+AND+%22Commun.+Soil+Sci.+Plant+Anal%22%5BJournal%5D)">A modified molybdenum blue method for orthophosphate determination suitable for investigating enzymatic hydrolysis of organic phosphates.</a> Commun. Soil Sci. Plant Anal. 36, 1373-1383 (2005).</li>
<li>Cade-Menun, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+phosphorus+in+environmental+and+agricultural+samples+by+31P+nuclear+magnetic+resonance+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Characterizing phosphorus in environmental and agricultural samples by 31P nuclear magnetic resonance spectroscopy.</a> Talanta. 66, 359-371 (2005).</li>
<li>Johnson, N. R., Hill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorus+species+composition+of+poultry+manure-amended+soil+using+high-throughput+enzymatic+hydrolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Soil+Sci.+Soc.+Am.+J%22%5BJournal%5D)">Phosphorus species composition of poultry manure-amended soil using high-throughput enzymatic hydrolysis.</a> Soil Sci. Soc. Am. J. 74, 1786-1791 (2010).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Por sua própria natureza, um método rápido utilizando pequenos volumes requer muito cuidado. Portanto, os passos mais críticos são aqueles que envolvem soluções de pipetagem para a placa. Precisas e, mais importante, a técnica da pipeta consistentes são essenciais para o sucesso deste ensaio. A extração NaOH-EDTA permitirá que a maior parte do P em amostras de muitos para ser caracterizada em três classes: ortofosfato, P monoéster e solos diéster P., adubos, sedimentos ou qualquer outra amostra do ambiente que contém NaOH-EDTA-extraível P pode ser caracterizada . Formas de P em amostras ambientais não são necessariamente estáveis ​​e esta técnica vai garantir amostras são caracterizadas antes de amostras são comprometidos sem a necessidade de empregar um exército de pesquisadores. Este ensaio é especialmente adequado quando um grande número de amostras a serem processadas. As necessidades de reagentes e requisitos de espaço foram reduzidas a um nível administrável (por exemplo, tubos de 1,5 mL de microcentrífuga em vez de 50 frascos de vidro mL). Esta adaptação também limita a produção de resíduos.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> NaOH </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8045 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> EDS </td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 242853 </td></tr><tr><td> Acetato de sódio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S2889 </td></tr><tr><td> Trigo fosfatase ácida </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P3627 </td></tr><tr><td> Fosfatase ácida de batata </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1146 </td></tr><tr><td> Nuclease P1 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> N8630 </td></tr><tr><td> Fosfato de potássio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2222 </td></tr><tr><td></td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td></tr><tr><td></td><td> Sigma-Aldrich </td><td></td></tr><tr><td> Glicose-6-fosfato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7250 </td></tr><tr><td> SDS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> L4390 </td></tr><tr><td> Ácido ascórbico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5960 </td></tr><tr><td> TCA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9159 </td></tr><tr><td> Molibdato de amônio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A1343 </td></tr><tr><td> Citrato de sódio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S1804 </td></tr><tr><td> Arseniato de sódio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S9663 </td></tr></tbody></table>

high-throughput medição e classificação de p orgânico em amostras ambientais

High-Throughput Measurement and Classification of Organic P in Environmental Samples

Muitos tipos de compostos orgânicos de fósforo (P) moléculas existem em amostras ambientais 1. P medições tradicionais não detectam estes compostos orgânicos P, uma vez que não reagem com reagentes colorimétricos 2,3. Hidrólise enzimática (EH) é um método emergente para caracterizar com precisão formas de P orgânico em amostras ambientais 4,5. Este método só é superado em precisão por Espectroscopia de fósforo-31 de Ressonância Magnética Nuclear (31 P-NMR), um método que é caro e requer especializados training6 técnica. Nós adaptamos um método de hidrólise enzimática capaz de medir a três classes de fósforo (P monoéster, P diéster e P inorgânico) para um sistema de leitor de microplacas 7. Este método fornece aos pesquisadores um meio rápido, preciso, acessível e de fácil utilização para medir espécies P nos solos, sedimentos, adubos e, se concentrou, amostras aquáticas. Este é o único método de alto rendimento para medir as formas e enzima labilidade de P orgânico que pode ser realizado em um laboratório padrão. Os dados resultantes fornece insights para os cientistas que estudam o conteúdo do sistema de nutrientes e potencial de eutrofização.

Este protocolo descreve um método de alto rendimento da hidrólise enzimática que utiliza um leitor de microplacas para medir e classificar o fósforo do solo como P monoésteres, diésteres de P inorgânico e P. Até 96 amostras podem ser medidos de uma só vez em um laboratório padrão.

High-Throughput medição e classificação de P orgânico em amostras ambientais

Muitos tipos de moléculas de fósforo (P) orgânico existem em amostras ambientais1. As medições tradicionais de P não detectam esses compostos de P orgânico, visto que...

O objetivo geral deste procedimento é classificar o fósforo orgânico hidrolisado por enzima em extratos de amostras de solo ou esterco. Isso é realizado primeiramente extrai-se as amostras com solução de hidróxido de sódio e EDTA e ajustando-se o pH dos extratos. Em seguida, incuba-se esses extratos ajustados com duas soluções enzimáticas diferentes.Em uma placa de 96 poços, a etapa final consiste em medir o ortofosfato liberado pela enzima utilizando colorimetria com azul de molibdênio. Em última análise, a maioria das formas nativas de fósforo monoéster de ortofosfato e de fósforo diéster pode ser classificada em amostras de solo ou de esterco com base na liberação diferencial de ortofosfato pelo método de hidrólise enzimática. Este método pode ser realizado de forma econômica em qualquer laboratório padrão.A principal vantagem que possui em relação a métodos existentes, como a espectroscopia de ressonância magnética nuclear de fósforo-31, é que pode medir o potencial de enzimas nativas do solo para liberar ortofosfato a partir de compostos orgânicos de ervilha no futuro. Portanto, os dados obtidos por este método podem ajudar a prever a fertilidade do solo ou o potencial do solo de liberar quantidades prejudiciais de ortofosfato disponível para algas. Adicione 30 mililitros da solução de hidróxido de sódio 0,25 molar a dois gramas da amostra úmida ou seca em um tubo cônico de 50 mililitros.Incube com agitação por 16 horas à temperatura ambiente. Centrifugue as amostras a 3000 × g durante 30 minutos, depois transfira 100 microlitros para um tubo microcentrífugo de 1,5 mililitro que já contenha tampão acetato. A amostra ajustada tem um volume total de um mililitro e pH de 5,0.Prepare duas soluções estoque contendo 0,5 unidades por mililitro de fosfatase ácida em 10 mililitros de acetato de sódio 0,1 molar recém-preparado, pH cinco. Adicione agora nuclease liofilizada reconstituída NP um de Penicillium Citron a um dos tubos de 10 mililitros das soluções estoque de fosfatase ácida até uma concentração final de 2,5 unidades de NP um por mililitro, misturando suavemente por inversão várias vezes, e centrifugue as duas soluções enzimáticas a 3000 ×g por 30 minutos. Para construir uma curva de calibração, comece adicionando um mililitro de solução estoque de fosfato de potássio um milimolar a um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro e realize sete diluições seriadas de 0,5 mililitro, descartando o primeiro tubo, de modo que a faixa final de diluição varie de 20 µL a 0,625 nm de fósforo.Agora transfira os padrões de ORTOFOSFATO para as duas últimas colunas da placa, começando com zero nm de ortofosfato na linha A e terminando com 20 nm de ortofosfato na linha H para os três primeiros poços da coluna 10. Adicione 40 microlitros de solução de enzima PP mais GP aos próximos três poços da coluna 10. Adicione 40 microlitros de solução de enzima PP mais GP mais NP uma.Finalmente, adicione 40 microlitros de tampão acetato 100 milimolar a todas as seis poças. Agora, cada uma das primeiras seis poças da coluna 10 deve conter 80 microlitros de solução nas duas próximas poças. Adicione 40 microlitros de solução de acetato de sódio contendo 10 M de glicose, seis fosfato e 40 microlitros de solução enzimática PP mais GP.Para cada amostra em teste, distribua 40 microlitros de extratos de amostra com pH ajustado para os poços um a nove em até oito linhas após a distribuição de todas as amostras. Use uma pipeta multicanal para distribuir a solução enzimática PP mais GP nas colunas um a três, PP mais GP mais NP nas colunas quatro a seis e tampão de acetato de sódio 0,1 molar nas colunas sete a nove. Realize este passo rapidamente para garantir que todas as amostras tenham tempo de incubação equivalente.Cubra a placa de 96 poços com uma tampa e incube as amostras, soluções enzimáticas, controles e curva de calibração exatamente por uma hora a 37 graus Celsius em água desionizada. Prepare 50 mililitros de cada uma das quatro soluções estoque. A solução A deve ser preparada diariamente usando uma pipeta multicanal rapidamente.Adicione 25 microlitros de SDS, 100 microlitros da solução A, 20 microlitros da solução B e 50 microlitros da solução C a todas as cavidades da placa de 96 poços. Tampe a placa e incube por 30 minutos à temperatura ambiente. Por fim, meça a absorbância em 850 nanômetros em qualquer leitor de microplacas com ajuste de comprimento de onda, utilizando um aplicativo de planilha eletrônica.Primeiro, plote a curva de calibração de fósforo inorgânico com zero a 20 nanomols de fósforo no eixo X e a média das medidas duplicadas de absorbância no eixo Y, realize uma regressão linear e determine a equação da reta de melhor ajuste. Em seguida, calcule o fósforo inorgânico de fundo fazendo a média dos valores nas colunas um a três e, então, aplique a curva de calibração ao conjunto de dados. Para determinar o fósforo derivado de ésteres mono de fósforo hidrolisados, faça a média dos valores triplicados das amostras das colunas quatro a seis e subtraia a solução controle de enzima mais o fósforo inorgânico de fundo.Em seguida, para calcular o teor de fósforo a partir do fósforo hidrolisado, os DERs fazem a média dos valores das triplicatas das amostras das colunas sete a nove e subtraem a solução controle de enzima, mais o fósforo inorgânico de fundo, mais o fósforo de éster mono-hidrolisado das colunas quatro a seis. Uma placa típica de 96 poços mostra os resultados de oito amostras e uma curva de calibração. Os controles estão na coluna 10.O aumento da intensidade da cor entre as colunas um a três e quatro a seis é devido a compostos de fósforo monoéster hidrolisados; entre as colunas quatro a seis e sete a nove, é devido a compostos de fósforo diéter hidrolisados. Aqui, o método de hidrólise enzimática de alto rendimento foi utilizado para analisar com sucesso a distribuição das classes de fósforo em extratos de uma amostra de solo do Vermont contendo hidróxido de sódio 0,25 molar e EDTA 0,05 molar. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como medir ortofosfato nativo, compostos de monoéster e diéster de fósforo em extratos de solo ou de esterco utilizando hidrólise enzimática.Essa técnica pode ajudar a abrir caminho para pesquisadores nas áreas de química ambiental e manejo de nutrientes explorarem o comportamento do fósforo orgânico em sistemas de solo ou de esterco.

high-throughput-measurement-classification-organic-p-environmental

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Irrelevantes metabolômica fornece uma hipótese gerando instantâneo de um perfil metabólico. Este protocolo irá demonstrar a extracção e análise de metabolitos a partir de células, soro ou tecido. Uma gama de metabolitos são pesquisadas utilizando extracção de fase líquido-líquido, cromatografia líquida de microfluxo UltraPerformance /-espectrometria de massa de alta resolução (UPLC-HRMS), acoplado ao software de análise diferencial.

Metabolomics irrelevantes de fontes biológicas Usando UltraPerformance cromatografia líquida de alta resolução Espectrometria de Massa (UPLC-HRMS)

Um ensaio de todo Bioreporter celular com Burkholderia sartisoli RP037-MCHE foi desenvolvido para detectar frações de um contaminante orgânico (ou seja, fluoreno) disponível para a degradação bacteriana após o transporte ativo por micélio ponte poros cheios de ar em um sistema modelo insaturada água.

Uma Abordagem Bioreporter celular todo avalie Transportes e biodisponibilidade de contaminantes orgânicos em água insaturadas Sistemas

A estrutura da parede celular vegetal e as características químicas são avaliadas para identificar matérias-primas ideais para biocombustíveis e biomateriais. Os métodos padrão têm limitações quando aplicados a grandes conjuntos de dados. Esses métodos de pré-tratamento de alto rendimento, sacarificação enzimática e espectrometria de massa de feixe molecular de pirólise comparam um grande número de amostras de biomassa com tempo e custo experimentais reduzidos.

Rastreio de alto rendimento de Variações recalcitrância da biomassa lignocelulósica em: Total lignina, a lignina monómeros, e enzimática Sugar lançamento

Um protocolo sobre a caracterização e aplicação de cinco diferentes dispositivos de amostragem passiva é apresentado.

Caracterização e aplicação de amostradores passivos de monitorização de pesticidas em água

A espectrometria de massa de tempo de reação de transferência de prótons de voo permite a análise de alta sensibilidade, rápida e não invasiva de compostos orgânicos voláteis. Para demonstrar seu potencial, damos três exemplos: fermentação de ácido lático de iogurte (monitoramento on-line de bioprocessos), diferentes genótipos de maçã (triagem em larga escala) e espaço retronasal após beber café (análise do espaço nasal).

PTR-ToF-MS acoplado com um sistema automatizado da amostragem e uma análise costurada dos dados para estudos do alimento: Monitoração do Bioprocess, seleção e análise do espaço do nariz

Este artigo descreve os procedimentos de operação para a câmara ambiental de Harvard (HEC) e relacionados a instrumentação para medição de gases e partículas espécies. A câmara ambiental é usada para produzir e estudar as espécies secundárias orgânicas produzidas a partir dos precursores orgânicos, especialmente relacionados com partículas orgânicas atmosférica.

Produção e medição de partículas orgânicas na câmara ambiental de Harvard

Este protocolo descreve uma única taxa de transferência de técnicas complementares, analíticas e omics, culminando em uma caracterização-pareado de matéria orgânica natural e proteomics microbiana nos diferentes ecossistemas. Esta abordagem permite comparações robustas para a identificação de vias metabólicas e transformações importantes para descrever a produção de gás de efeito estufa e prevendo respostas a mudanças ambientais.

Single-produção complementares técnicas analíticas de alta resolução para caracterização de misturas complexas de matéria orgânica Natural

Apresentamos um protocolo para a seleção rápida de amostras ambientais para Sideróforo potencial, contribuindo para a biodisponibilidade de micronutrientes e volume de negócios em sistemas terrestres.

Sideróforo elevado-throughput Screening de amostras ambientais: tecidos, Bulk solos e solos de rizosfera de plantas

O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para o transporte de longa distância de ácidos perfluoroalquil em trigo.

Investigando o transporte de longa distância de ácidos perfluoroalquil no trigo através de uma técnica de exposição de raiz dividida

O presente protocolo descreve a utilização de formato de amônio para particionamento de fases em QuEChERS, juntamente com cromatografia gasosa-espectrometria de massa, para determinar com sucesso resíduos de pesticidas organoclorados em uma amostra de solo.

Análise de pesticidas organoclorados em uma amostra de solo por uma abordagem QuEChERS modificada usando formato de amônio

Aprenda a classificar fósforo orgânico em amostras de solo ou esterco usando hidrólise enzimática em placa de 96 poços. Este método de alta vazão permite analisar formas de fósforo de forma eficiente e econômica.

High-Throughput medição e classificação de P orgânico em amostras ambientais

Explorar mais vídeos